飲酒對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠心肌功能的影響*

毛玉婷 張涵明 黃楠雯 張倩璇 王秀平 李旭偉 劉行海

(1.川北醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)系，四川 南充 637000；2.川北醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系，四川 南充 637000；3.川北醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)中心，四川 南充 637000)

飲酒對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠心肌功能的影響*

毛玉婷1張涵明2黃楠雯2張倩璇2王秀平2李旭偉3Δ劉行海3

(1.川北醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)系，四川 南充 637000；2.川北醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系，四川 南充 637000；3.川北醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)中心，四川 南充 637000)

目的：研究不同濃度的白酒對(duì)大鼠心肌酶以及心肌結(jié)構(gòu)的影響。方法：將50只SD大鼠隨機(jī)分為五組：高脂對(duì)照組，20%白酒高脂組，40%白酒高脂組，60%白酒高脂組，空白對(duì)照組，每組10只。以高脂飼料喂養(yǎng)建立SD大鼠營(yíng)養(yǎng)性肥胖模型，用不同濃度白酒和生理鹽水對(duì)各組進(jìn)行灌胃1周，摘眼取血檢驗(yàn)血清磷酸肌酸激酶雜化型CK-MB，取其心臟制作切片。結(jié)果：20%白酒組，40%白酒組，60%白酒組CK-MB值與高脂對(duì)照組、空白對(duì)照組CK-MB值比較升高(P<0.05)。高脂白酒組心肌標(biāo)本出現(xiàn)少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，水腫，胞漿聚集，肌絲斷裂，橫紋消失現(xiàn)象，可判斷為梗死前病變。結(jié)論：飲酒對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠心肌細(xì)胞損傷具有劑量依賴性。

白酒；營(yíng)養(yǎng)性肥胖；心肌功能；心肌梗死(MI)

白酒(Alcohol)是一種常見酒類飲料，適度飲酒有利于改善心血管功能，降低心肌梗死的發(fā)病率。營(yíng)養(yǎng)性肥胖也稱單純性肥胖，是指由于營(yíng)養(yǎng)攝入過多導(dǎo)致的原發(fā)性肥胖。相關(guān)實(shí)驗(yàn)表明，長(zhǎng)期對(duì)普通小鼠灌入大量白酒導(dǎo)致GOT含量增高，并且有比較嚴(yán)重的病理變化[1]。基于現(xiàn)代社會(huì)人類肥胖的發(fā)展趨勢(shì)和飲酒的習(xí)慣，本實(shí)驗(yàn)建立營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠模型，從心肌CK-MB，病理切片形態(tài)改變上進(jìn)一步探究白酒對(duì)心肌的作用及影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑

20%白酒(100 ml，60℃白酒瀘州老窖-珍品50 ml加蒸餾水200 ml)；40%白酒(100 ml，60℃白酒瀘州老窖-珍品50 ml加蒸餾水50 ml)；60%白酒(60℃白酒瀘州老窖-珍品50 ml，瀘州老窖股份有限公司)；生理鹽水；普通飼料；高脂飼料(每100 g中：5 g豆粉，5 g干酪素，5 g蛋黃粉，12 g豬油，2 g鹽，10 g奶粉，5 g花生，5 g蔗糖，1 g麻油，50 g普通飼料)[2]；戊巴比妥鈉(北京普博斯生物有限公司)，1%肝素(上海陸安生物科技有限公司)，10%甲醛。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

電子計(jì)重秤(寧波浙衡稱重設(shè)備制造有限公司)，全自動(dòng)生化分析儀(美國(guó)貝克曼庫爾特5821)，離心機(jī)(安徽中科KDC-4)。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

49日齡雌性SD大鼠50只，體重200± 5 g，由川北醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 方法

1.2.1 分組與建模

將50只SD大鼠隨機(jī)分為五組：高脂對(duì)照組，20%白酒高脂組，40%白酒高脂組，60%白酒高脂組，空白對(duì)照組，每組10只。高脂飼料喂養(yǎng)高脂對(duì)照組，20%白灑高脂組，40%白酒高脂組，60%白酒高脂組。普通飼料喂養(yǎng)空白對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)大鼠自由進(jìn)食和飲水，過渡期1 w，實(shí)驗(yàn)期4 w。實(shí)驗(yàn)期內(nèi)，定期對(duì)高脂對(duì)照組，白酒高脂組和空白對(duì)照組大鼠稱重。當(dāng)高脂對(duì)照組和白酒高脂組體重超過空白對(duì)照組體重的20%判定營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠建模成功[3]。

1.2.2 給藥

用20%，40%，60%白酒對(duì)相對(duì)應(yīng)白酒組灌胃，用生理鹽水對(duì)高脂對(duì)照組和空白對(duì)照組灌胃，每只4 ml，一天一次，持續(xù)一周。

1.2.3 指標(biāo)測(cè)定

于實(shí)驗(yàn)第8天對(duì)每組大鼠進(jìn)行麻醉后，摘眼取血，每只4 ml，血液標(biāo)本放入離心管中經(jīng)過10000 r·min-1，10 min離心后用滴管吸出血清，送入全自動(dòng)血液生化分析儀中分析CK-MB數(shù)值。取出各組大鼠心臟標(biāo)本，置于10%甲醛溶液中固定3 d后取出，切取部分，石蠟包埋后切片，HE染色，對(duì)比觀察結(jié)構(gòu)變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 高脂組和空白對(duì)照組體重

0%、20%、40%、60%白酒高脂組體重比較(P>0.05)；0%、20%、40%、60%白酒高脂組分別與空白對(duì)照組體重比較(P<0.05)；空白對(duì)照組自身體重比較，(P>0.05)，見表1。

表1 高脂組與空白組體重對(duì)比

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05。

2.2 高脂組和空白對(duì)照組CK-MB值

通過SNK法分析0%、20%、40%、60%、空白組CK-MB，組間CK-MB比較，20%、40%、60%組CK-MB較高脂空白組和空白對(duì)照組升高(P<0.01)，見表2。

表2 高脂組與空白組CK-MB對(duì)比

注：與對(duì)照組相比，*P<0.01。

2.3 各組心肌組織病理切片染色結(jié)果

高脂對(duì)照組病理切片顯組織基本正常；20%白酒組病理切片顯示細(xì)胞水腫，其他正常；40%白酒組病理切片顯示細(xì)胞水腫，有少量肌絲斷裂，橫紋消失現(xiàn)象；60%白酒組病理切片顯示細(xì)胞水腫，胞漿聚集，大量肌絲斷裂，橫紋消失，有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)；空白對(duì)照組切片顯示組織正常。

(a)高脂對(duì)照組 (b)20%白酒組

(c)C.40%白酒組 (d)60%白酒組

(e)空白對(duì)照組

3 討論

肥胖(Obesity)表現(xiàn)為體內(nèi)脂肪異?；蜻^多的堆積，已被世界衛(wèi)生組織確定為疾病的一種，并與2型糖尿病、心血管疾病、高血壓、中風(fēng)及某些癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，還可加速衰老[4]。對(duì)肥胖及其并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展、治療藥物的作用及機(jī)制的研究需要首先建立成功的肥胖動(dòng)物模型。以高營(yíng)養(yǎng)飼料喂養(yǎng)幼年SD大鼠，建立的高營(yíng)養(yǎng)飲食誘導(dǎo)型肥胖大鼠是常用的動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)在相同周期內(nèi)白酒組大鼠體重平均數(shù)較空白對(duì)照組體重平均數(shù)相比增加大于20%，建立營(yíng)養(yǎng)性肥胖模型成功。其衡量標(biāo)準(zhǔn)以體重為主。已有實(shí)驗(yàn)研究表明，不同劑量白酒對(duì)大鼠心肌損傷標(biāo)志物及心肌組織的影響具有相關(guān)性[5]。通過查閱相關(guān)研究文獻(xiàn)，可以從組織及細(xì)胞生物學(xué)水平對(duì)其進(jìn)行深入研究[6]，通過電生理[7]，免疫機(jī)制[8]對(duì)酒精性中毒大鼠心肌組織及功能影響的研究基礎(chǔ)上，提出單純營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠心肌組織細(xì)胞與酒精性中毒之間的聯(lián)系。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果為臨床上預(yù)防肥胖性酒精性心肌病提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)[9]。肌酸激酶通常存在于脊椎動(dòng)物的心臟，骨骼肌以及腦等組織的細(xì)胞質(zhì)和線粒體中，其同工酶主要為CK-MB，CK-MM，CK-BB，其中CK-MB主要分布于心肌中,對(duì)心肌梗死早期診斷靈敏度高，若發(fā)生損傷其值會(huì)增高。。CK-MB在肌鈣蛋白未出現(xiàn)前是AMI診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，具有很高的陰性排除價(jià)值[10]。在AMI早期診斷靈敏度高，其陽性檢出率為100%，具有高度的特異性，其特異性為92%-100%[11]。 研究表明，心肌梗死患者CK-MB明顯增高，CK-MB與AMI梗死范圍呈正相關(guān)，且存在明顯界限，患者的梗死范圍越大，其生化指標(biāo)越高[12]。且AMI發(fā)病6小時(shí)后CK-MB顯著升高，發(fā)生再梗死是CK-MB與其他酶學(xué)指標(biāo)相比具有良好的靈敏性[13]。本實(shí)驗(yàn)選擇此酶學(xué)指標(biāo)，測(cè)得數(shù)據(jù)可以顯示心臟在小量白酒作用下CK-MB較空白對(duì)照組輕度增高，中量白酒下中度增高，大量白酒作用下CK-MB值增高加重，而對(duì)于高脂對(duì)照組在生理鹽水作用下CK-MB值未見增高。從病理切片，也可觀察到當(dāng)白酒濃度加大，出現(xiàn)的病理損傷嚴(yán)重度加大，并且在白酒低濃度就出現(xiàn)了損傷，但由于給予白酒時(shí)間較短，出現(xiàn)心肌梗死前改變,未給予白酒處理的高脂對(duì)照組未出現(xiàn)病理損傷。

綜上所述，白酒對(duì)營(yíng)養(yǎng)性肥胖大鼠心肌損傷具有劑量依耐性。有單純性肥胖的人應(yīng)該減少白酒攝入。但白酒對(duì)單純性肥胖的影響的具體機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

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Effects of drinking on myocardial function in nutritional obesity rats*

Mao Yu-ting1, Zhang Han-ming2, Huang Nan-wen2,Zhang Qian-xuan2, Wang Xiu-ping2, Li Xu-wei3Δ, Liu Xing-hai3

(1.Department of Anesthesiology, North Sichuan Medical College, Sichuan Nanchong 637000;2.Department of Clinical Medicine, North Sichuan Medical College, Sichuan Nanchong 637000;3.Functional Experiments Center, School of Preclinical Medicine, North Sichuan Medical College, Sichuan Nanchong 637000)

Objective：To study the effects of different concentrations of alcohol on cardiac enzymes and cardiac structure in rats. Methods: Fifty SD rats were randomly divided into five groups: hyperlipidemia rats control group, hyperlipidemia rats group with 20% alcohol intake, hyperlipidemia rats group with 40% alcohol intake, hyperlipidemia rats group with 60% alcohol intake, normal control group. The nutritional obesity rat model was established by feeding high-fat diet. Intragastric administration of different concentrations of alcohol and saline were performed for each group for 1 week, then blood tests were done to detect CK-MB value by taken out of the eyes, and myocardial histological slices were made and observed. Results: The value of CK-MB increased significantly in hyperlipidemia rats groups with 20%, 40%, 60% alcohol intake compared with hyperlipidemia rats control group, normal control group(P<0.05). Myocardial slices of alcohol groups showed a small amount of inflammatory cellinfiltration, edema, cytoplasmic aggregation, filament breakage and disappearance of transverse striation. These can be considered as preinfarction lesions. Conclusion: This study shows that the effects of alcohol on cardiac pathology injury depend on the concentration of alcohol in nutritional obesity rat models.

Alcohol; Nutritional obesity; Ventricular function; Myocardial infarction

川北醫(yī)學(xué)院2014年大學(xué)生科研項(xiàng)目

毛玉婷，女，川北醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)系本科2012級(jí)學(xué)生，Email：940744231@qq.com。

Δ通訊作者：李旭偉，男，講師，主要從事機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué)教學(xué)及電生理科研工作，Email：lxwhi@qq.com。

2015-3-30)