探討EDTA-K對雙抗原夾心ELISA檢測HIV抗體的影響

冷亞玲

(四川省涼山州昭覺縣疾病預(yù)防控制中心 四川 昭覺 616150)

探討EDTA-K對雙抗原夾心ELISA檢測HIV抗體的影響

冷亞玲

(四川省涼山州昭覺縣疾病預(yù)防控制中心 四川 昭覺 616150)

目的：探討乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K)對雙抗原夾心ELISA檢測人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體的影響。方法：采取HIV抗體的陰性及陽性這兩種靜脈血，分別制成EDTA-K濃度是1.5、2.5、5、10、15、20、25、30mg/mL的抗凝血，同時留存無抗凝劑血，把血漿與血清進(jìn)行分離，對不同樣本中的HIV抗體進(jìn)行測定，然后對吸光度(A)值進(jìn)行讀取，分析A值和EDTA-K的濃度;再分別配成EDTA-K濃度是1.5、2.5、5、10mg/mL的HIV抗體，陽性與陰性的抗凝血各為18份，同樣留存無抗凝劑血，對血漿與血清給予分離，對各個樣本的HIV抗體進(jìn)行平行測定，配對t檢驗血漿與血清的樣本。結(jié)果：EDTA-K的濃度與HIV病毒抗體中的陰性樣本A值沒有關(guān)聯(lián)性(P=0.932)，與HIV抗體中的陽性樣本A值有顯著的負(fù)相關(guān);且當(dāng)EDTA-K的濃度為≥5mg/mL時，HIV病毒抗體的陽性血漿樣本A值比血清樣本更低，比較有差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)當(dāng)EDTA-K2濃度為≤2.5mg/mL時，血漿和血清樣本的A值沒有差異，比較沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論：EDTA-K不會干擾到HIV病毒抗體中的陰性樣本檢測;當(dāng)EDTA-K≤2.5mg/mL時，不會干擾到HIV病毒抗體中的陽性樣本檢測;當(dāng)EDTA-K≥5mg/mL時，會有顯著的副干擾作用于HIV病毒抗體中的陽性樣本檢測。

EDTA-K;原夾心ELISA;HIV抗體

ELISA屬于HIV病毒抗體中的用于診斷的第三代試劑，其敏感度高，具有強(qiáng)烈的特異性和良好的重復(fù)性，在HIV病毒抗體的初階篩選測驗中以及對獻(xiàn)血人員的血液進(jìn)行篩查的試驗中得到了廣泛應(yīng)用，血漿或血清都可以作為HIV抗體的測驗樣本［1］。值得注意的是，抗凝劑對于脫離人體的血液樣本來說，其屬于外源物質(zhì)，會對物質(zhì)本身或者在實驗過程中都可能出現(xiàn)許多的影響因素，從而影響了測驗結(jié)果的真實可靠性［2］。本文主要就EDTA-K對雙抗原夾心ELISA檢測HIV病毒抗體的影響進(jìn)行分析，現(xiàn)作報道如下∶

1.材料與方法

1.1 材料分析

(1)HIV病毒抗體中的陰性樣本采自于某公司身體健康的體檢者; HIV病毒抗體中的強(qiáng)陽性樣本為一份，選自于某疾病預(yù)控中心。通過權(quán)威的疾病預(yù)控中心相關(guān)實驗室對HIV病毒抗體進(jìn)行確認(rèn)后，在溫度為56℃的條件下，持續(xù)30min給予滅活處理。

(2)試劑以及儀器分析∶雙抗原夾心法的診斷試劑和HIV病毒抗體的質(zhì)控血清選自于蘭德克斯診斷器材(昆山)有限公司;Reader 2010型酶標(biāo)儀由ANTHOS LABTEC INSTRUMENTS生產(chǎn);DHP-9270B型電熱恒溫培養(yǎng)箱由上海瑯玕實驗設(shè)備有限公司生產(chǎn);DNX-9620型自動洗板機(jī)由北京普朗新技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

(1)EDTA-K的濃度和HIV病毒抗體的吸光度(A)值關(guān)聯(lián)性測驗∶收集4份HIV病毒抗體的陰性靜脈血液。其中，選取3份并添加不同容量的HIV病毒抗體的強(qiáng)陽性血清，確?；旌暇鶆颍瞥?份程度不一的HIV病毒抗體的陽性樣本，A值分別為A值≥2.3、1.0≤A值＜2.3以及0.5≤A值＜1.0。此外，根據(jù)不同的比例把4份樣本分別添加到8支EDTA-K2的干粉抗凝管內(nèi)。每組血液樣本中的EDTA-K的最后濃度分別是1.5、2.5、5、10、15、20、25、30mg/mL，并留存血清樣本作為對比，從而測驗4組的血漿以及血清樣本中的HIV病毒抗體。

(2)EDTA-K的抗凝血漿和血清樣本對比測驗分析∶收集HIV病毒抗體中的陰性靜脈血液50份。其中，分別選取25份添加不同容量的HIV病毒抗體的強(qiáng)陽性血清，并混合均勻，制成A值相異HIV病毒抗體的陽性樣本。根據(jù)不同的比例分別把50份樣本添加到4支EDTA-K的干粉抗凝管內(nèi)，同時混合均勻，分別確保EDTA-K的最后濃度是1.5、2.5、5、 10mg/mL，注意留存血清樣本作為對比，對每組血漿與血清樣本中的HIV病毒抗體進(jìn)行平行測定。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn)

雙抗原夾心ELISA法，根據(jù)HIV病毒抗體診斷的試劑盒以及儀器的使用說明書進(jìn)行嚴(yán)格操作。當(dāng)波長是450nm時、參考波長是630nm，A值讀取。利用A值/臨界值(S/CO)對結(jié)果進(jìn)行判斷，當(dāng)S/CO≥1時為陽性;當(dāng)S/CO＜1時屬于陰性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均用SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計分析和處理，其中，一般資料采用標(biāo)準(zhǔn)差(ˉ±s)表示，計數(shù)資料比較采用X2檢驗，且當(dāng)P＜0.05時，表示比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 EDTA-K濃度和HIV病毒抗體樣本的A值關(guān)聯(lián)性分析

通過對EDTA-K濃度、HIV病毒抗體A值這兩者之間關(guān)聯(lián)性的研究發(fā)現(xiàn)，二者沒有出現(xiàn)關(guān)聯(lián)性(r=-0.02，P=0.932)。

2.2 EDTA-K抗凝血漿和血清樣本中的HIV病毒抗體測驗結(jié)果分析

當(dāng)EDTA-K的濃度為≤2.5mg/mL時，HIV病毒抗體的陽性血漿和血清A值無明顯差異，沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。當(dāng)EDTA-K的濃度為≥5mg/mL時，HIV病毒抗體的陽性血漿樣本A值和血清樣本比較有明顯的差異，比較具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表1。

表1 EDTA-K的抗凝血漿和血清樣本測驗HIV病毒抗體的A值對照(±s)

表1 EDTA-K的抗凝血漿和血清樣本測驗HIV病毒抗體的A值對照(±s)

注∶和血清樣本相比，*P＜0.05

樣本 HIV抗體陰性 HIV 0.0056±0.0026 1.286±0.652血漿(EDTA-K) 1.5mg/mL 0.0059±0.0038 1.307±0.636 2.5mg/mL 0.0054±0.0021 1.266±0.627 5mg/mL 0.0061±0.0030 1.111±0.593*10mg/mL 0.0055±0.0032 0.962±0.542抗體陽性血清*

3.討論

臨床實驗室要想獲得ELISA檢測結(jié)果的準(zhǔn)確穩(wěn)定性，檢驗人員必須充分考慮影響ELISA的各種因素，其中比較重要又容易被忽視的因素是抗凝劑。正確使用抗凝劑關(guān)系到檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確有效性，實驗人員對血液樣本進(jìn)行科學(xué)正確的選擇，并對抗凝劑進(jìn)行規(guī)范化使用，從而提高實驗質(zhì)量。

本次研究顯示，當(dāng)抗凝劑采用EDTA-K時，抗凝劑配制的最佳濃度應(yīng)該在1.5～2.5mg/mL范圍內(nèi)。其中，當(dāng)濃度為1.4～1.6mg/mL時，屬于血細(xì)胞在分析過程中使用的抗凝劑具有的濃度。因此，針對靜脈血采集容量不足的患者，可以根據(jù)血細(xì)胞的分析樣本來測驗HIV病毒抗體。值得注意的是，隨著抗凝劑的比例增加，不僅會嚴(yán)重干擾到HIV病毒抗體的測驗，而且還會對血細(xì)胞的分析造成影響，導(dǎo)致粒細(xì)胞變性，單核細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞的形態(tài)產(chǎn)生變化。

綜上所述，不同濃度的EDTA-K抗凝血漿會對HIV病毒抗體檢測產(chǎn)生不同的影響。因此，當(dāng)實驗室的檢測樣本為抗凝血漿時，應(yīng)該把其和血清樣本進(jìn)行比較測驗。同時，生產(chǎn)廠家應(yīng)該嚴(yán)格控制質(zhì)量，確?？鼓齽┖蜐舛鹊恼鎸嵖煽啃浴?/p>

［1］張桂芳，孫永鋒，張向峰，等.EDTA-K2對雙抗原夾心ELISA檢測HIV抗體的影響［J］.檢驗醫(yī)學(xué)，2012，27(8)：676-678.

［2］楊梅，王卓婭，郝衛(wèi)，等.雙抗原夾心ELISA法檢測煙曲霉Afmp1cr/ Afmp2cr抗體［J］.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2014，34(5)：646-650.

R446.62

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1009-6019(2015)10-0051-02