蟾蜍草提取液體外抑菌作用的觀察

覃雪 肖毓

(四川達(dá)州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 四川 達(dá)州 635000)

蟾蜍草提取液體外抑菌作用的觀察

覃雪 肖毓

(四川達(dá)州職業(yè)技術(shù)學(xué)院 四川 達(dá)州 635000)

中藥因其作用獨(dú)特日益受到關(guān)注。體外研究是新藥開(kāi)發(fā)的第一步，為探索達(dá)州道地藥材蟾蜍草的體外抑菌作用，采用K-B法［1］觀察其體外分別對(duì)代表性細(xì)菌-金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌的抑菌作用效果。結(jié)果表明蟾蜍草提取液體外對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果優(yōu)于表皮葡萄球菌，優(yōu)于大腸桿菌與枯草桿菌。

蟾蜍草;體外抑菌;藥物敏感度測(cè)定

中藥功效顯著，許多研究資料表明，中藥在體內(nèi)外有不同程度的抑菌作用，并且較抗生素不易產(chǎn)生耐藥性。本文所選用的蟾蜍草系四川達(dá)州道地藥材，取材方便，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。蟾蜍草全草入藥，民間廣泛用于跌打損傷，流感，咽喉腫痛，乳癰，淋巴腺炎，哮喘，腹水腫脹，腎炎水腫，療瘡癤腫，痔瘡腫痛，尿道炎，高血壓，一切疼痛及胃癌等癥。因此研究和開(kāi)發(fā)蟾蜍草抗菌藥具有重大意義。

1.材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)菌種∶金黃色葡萄球菌(由達(dá)州市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科惠贈(zèng))、表皮葡萄球菌(實(shí)驗(yàn)室分離培養(yǎng)皮膚表面細(xì)菌所得)、大腸桿菌(實(shí)驗(yàn)室分離培養(yǎng)糞便中的細(xì)菌所得)、枯草桿菌(系實(shí)驗(yàn)室購(gòu)買(mǎi)菌種)

1.1.2 中藥∶達(dá)州道地藥材蟾蜍草

1.1.3培養(yǎng)基∶肉湯培養(yǎng)基、MH瓊脂培養(yǎng)基(蛋白胨、MH瓊脂購(gòu)自杭州天和微生物試劑有限公司)

1.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器∶旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、恒溫水箱、干燥箱、恒溫保溫箱

1.2 蟾蜍草提取液的制備

稱取50g的蟾蜍草烘干、粉碎后，用500mL35%的酒精于50℃的恒溫水浴中浸泡48h得提取液，將提取液離心過(guò)濾去除殘?jiān)?，最后將提取液減壓濃縮的40mL浸膏用35%酒精定容，使最終質(zhì)量濃度為1g/ml(所有中草藥的重量與最終液體體積的比值)。將蟾蜍草提取液置于4℃冰箱中，備用。

1.3 體外抑菌實(shí)驗(yàn)

用滅菌棉簽拭紙將分離所得的四種細(xì)菌--金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸桿菌、枯草桿菌。分別移種至3～5mLMH肉湯培養(yǎng)液中37℃培養(yǎng)2～8h，以待生長(zhǎng)至輕微或中等濁度。為保證菌液濃度一致，將菌液稀釋并校正濁度至0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)濃度，麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)［2］按表1所示，稀釋時(shí)使用無(wú)菌肉湯，此時(shí)菌液的濃度約為1.5×108個(gè)/L。將制備好的菌液均勻涂布在瓊脂培養(yǎng)基上，將6mm的滅菌紙片每片浸入10ug(取1g/ ml的提取液1ml，浸滿100片紙片)的蟾蜍草提取液，將其與青霉素或鏈霉素分別貼在涂布好革蘭氏陽(yáng)性菌與革蘭氏陰性菌的瓊脂培養(yǎng)基上，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-2h，然后用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈的大小，以判斷蟾蜍草提取液對(duì)不同總類細(xì)菌的體外抑菌效果。

表1 麥?zhǔn)媳葷峁苤品?/p>

2.結(jié)果

2.1 結(jié)果

培養(yǎng)后取出平板，測(cè)量抑菌圈的直徑。抑菌圈的邊緣以肉眼看不到細(xì)菌明顯生長(zhǎng)為限。按抑菌圈直徑判斷細(xì)菌的敏感度，具體判定標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2［3］。

表2 細(xì)菌敏感度的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)

通過(guò)提取濃縮工藝，在控制藥物濃度與菌液濃度的情況下，采用紙片擴(kuò)散法，在排除35%酒精影響情況下，客觀又直觀地展現(xiàn)了蟾蜍草提取液在體外對(duì)不同細(xì)菌的抑菌效果。蟾蜍草提取液的體外抑菌作用詳見(jiàn)表3。

表3 蟾蜍草提取液體外對(duì)不同細(xì)菌的抑菌效果(mm)

3.結(jié)論

隨著抗生素的廣泛使用，細(xì)菌對(duì)多數(shù)抗生素產(chǎn)生了耐藥性［4-5］，而中藥以其價(jià)廉、易得、低毒等優(yōu)勢(shì)吸引了人們的目光。因此，研究和開(kāi)發(fā)中藥抗菌藥具有重大意義。已有的研究資料表明，中藥在體內(nèi)外有不同程度的抑菌作用［6］，并且較抗生素不易產(chǎn)生耐藥性。中藥藥敏實(shí)驗(yàn)方法［7］和抗生素藥敏實(shí)驗(yàn)一樣，有擴(kuò)散法、稀釋法和比色法等。選取達(dá)州道地藥材蟾蜍草進(jìn)行提取后，采用擴(kuò)散法觀察其體外抑菌作用。結(jié)果表明∶蟾蜍草提取液對(duì)耐青霉素的致病性的金黃色葡萄球菌體外有較好的抑菌效果，且金黃色葡萄球菌對(duì)蟾蜍草提取液敏感度為極敏，這在當(dāng)今耐藥性細(xì)菌的抗菌藥物的研發(fā)有一定的意義;蟾蜍草提取液體外對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌效果優(yōu)于表皮葡萄球菌，優(yōu)于大腸桿菌與枯草桿菌。

有研究資料顯示，蟾蜍草的主要抗菌作用成分是原兒茶酸，可有效提取蟾蜍草中的原兒茶酸，進(jìn)一步觀察其對(duì)不同細(xì)菌的體外抑菌作用效果。在目前實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)之上，可進(jìn)一步明確蟾蜍草提取液的抑菌作用機(jī)制，力求更好地了解其藥用價(jià)值，為新藥的研發(fā)奠定基礎(chǔ)。在此基礎(chǔ)之上，可設(shè)定不同的藥物紙片濃度梯度，進(jìn)一步探究其對(duì)不同細(xì)菌的最低抑菌濃度。

［1］馬建鳳，劉華鋼，朱丹.中藥體外抑菌研究的方法學(xué)進(jìn)展［J］.藥學(xué)評(píng)價(jià)研究，2010，33(1)：42-45.

［2］李建志，劉旭紅，楊麗珍，等.11種中草藥抗菌作用實(shí)驗(yàn)研究［J］.中醫(yī)藥信息，2009，26(3)：82-83.

［3］梁群，于倩，郝娟，等.大蒜提取液與環(huán)丙沙星殺菌活性的聯(lián)合效應(yīng)研究［J］.中醫(yī)藥信息，2010，27(6)：82-84·

［4］錢(qián)海英.臨床常見(jiàn)革蘭陰性菌的分布及其耐藥性分析［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2010，20(20)：3223-3224.

［5］竇紅濤，謝秀麗，張小江.Mohnarin 2008年度報(bào)告：腸桿菌科細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)［J］.中國(guó)抗生素雜志，2010，35(7)：556-564.

［6］于震，王軍，周紅艷，等.雙黃連粉針劑抑菌、清熱實(shí)驗(yàn)研究［J］.中醫(yī)研究，2000，13(2)：28-29.

［7］馬建鳳，劉華鋼，朱丹.中藥體外抑菌研究的方法學(xué)進(jìn)展［J］.藥學(xué)評(píng)價(jià)研究，2010，33(1)：42-45.

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1009-6019(2015)10-0039-02

桑斗，職位：副主任醫(yī)師。研究方向：中醫(yī)骨傷，中醫(yī)正骨。學(xué)歷：學(xué)士學(xué)位。