原發(fā)性胃、腸彌漫性大B細胞淋巴瘤的免疫學分型比較分析研究

王華齊俠陳燕殷于磊朱建國

（1上海交通大學農(nóng)業(yè)與生物學院，上海市獸醫(yī)生物技術(shù)重點實驗室 上海 200240；2上海市醫(yī)療器械檢測所 上海 201318；3復(fù)旦大學附屬華東醫(yī)院病理科 上海 200240）

原發(fā)性胃、腸彌漫性大B細胞淋巴瘤的免疫學分型比較分析研究

王華12齊俠2陳燕3殷于磊3朱建國1

（1上海交通大學農(nóng)業(yè)與生物學院，上海市獸醫(yī)生物技術(shù)重點實驗室 上海 200240；2上海市醫(yī)療器械檢測所 上海 201318；3復(fù)旦大學附屬華東醫(yī)院病理科 上海 200240）

目的：比較原發(fā)性胃、腸彌漫性大B細胞淋巴瘤（PG－DLBCL，PI－DLBCL）的臨床特性、免疫學分型。方法：收集26例PG－DLBCL及19例PI－DLBCL，用Hans、Choi和Tally三種免疫學分型法則進行免疫學分型。結(jié)果：臨床分期上81.3%（13／16）的PG－DLBCL為I／II期，而PI－DLBCL的I／II期者僅占46.7%（7／15）。PG－DLBCL的臨床分期傾向低于PI－DLBCL，盡管差異未達統(tǒng)計學意義（P＝0.066）。三種法則分型結(jié)果均顯示PG－DLBCL的GCB亞型比率較高，與non－GCB（或ABC）亞型比率接近，而PI－DLBCL則以non－GCB（或ABC）亞型為主，GCB亞型比率較低。尤其是在使用Tally法則進行免疫學分型時，PG－DLBCL的GCB亞型數(shù)顯著高于PI－DLBCL的GCB亞型數(shù)（P＝0.03）。結(jié)論：PG－DLBCL具有與PI－DLBCL不同的臨床生物學特性，與PI－DLBCL相比，PG－DLBCL的臨床分期較低，多為I－II期，GCB亞型比率較高。

彌漫性大B細胞淋巴瘤；臨床分期；免疫學分型

彌漫性大B細胞淋巴瘤（diffuse large B－cell lymphoma，DLBCL）是非霍奇金淋巴瘤（NHL）中最常見的類型，占西方國家成人NHL的30%－40%，我國數(shù)據(jù)顯示該比例高達50%－60%。DLBCL可發(fā)生于淋巴結(jié)內(nèi)以及淋巴結(jié)以外的任何部位，根據(jù)其原發(fā)部位可分為結(jié)內(nèi)原發(fā)性（primary nodal，PN）及結(jié)外原發(fā)性（primary extranodal，PEN）DLBCL。西方數(shù)據(jù)認為DLBCL主要發(fā)生于結(jié)內(nèi)（約60%）［］，而我們前期研究發(fā)現(xiàn)，中國人DLBCL以PEN為主（65%），PN為35%，與韓國人數(shù)據(jù)接近（58% vs42%）［］。PEN－DLBCL中又以胃腸原發(fā)性（primary gastriointestinal，PGI）DLBCL最為常見［3］。

隨著研究發(fā)現(xiàn)，不同部位DLBCL具有不同臨床生物學特性［4，5］。許多研究將PG與PI－DLBCL合并在一起作為PGI－DLBCL進行研究，然而Connor等［6］認為二者具有不同臨床生物學特性，不應(yīng)合并分析。迄今為止，有關(guān)PG和PI－DLBCL單獨分析的數(shù)據(jù)并不多，且研究結(jié)果多有分歧。對于PG－DLBCL，有研究顯示其預(yù)后較好（5年OS為68－72%）［］，而有研究顯示其預(yù)后較差（5年OS為40－44%）［］。免疫表型上有數(shù)據(jù)顯示其生發(fā)中心B細胞樣（GCB）型比率較高［5］，有的數(shù)據(jù)顯示其GCB與非GCB（non－GCB）亞型比率接近［7］，有的數(shù)據(jù)顯示其GCB亞型比率顯著低于non－GCB亞型［8］。有的數(shù)據(jù)顯示其GCB亞型預(yù)后好于non－GCB亞型［7］，而有的數(shù)據(jù)則顯示其GCB與non－GCB亞型預(yù)后無明顯差別［6，7］。有關(guān)PI－DLBCL單獨分析的數(shù)據(jù)更是少見，有兩組報道PI－DLBCL以GCB亞型多見（71.4%，73%），但這兩組病例主要以小腸DLBCL為主［3］。

總之，目前PG、PI－DLBCL的研究層面仍較表淺，且研究結(jié)果重復(fù)性差，不能相互印證，不論是在免疫表型、基因表型及預(yù)后和預(yù)后相關(guān)標記上都不能得出較明確的結(jié)論。為此，我們收集了19例PI－DLBCL及26例PG－DLBCL進行比較性研究，主要分析兩者在臨床特點、免疫學表型及一些基因改變方面的異同。

1.材料與方法

1.1 病例來源：收集復(fù)旦大學附屬華東醫(yī)院2000－2013年診治的26例PG－DLBCL及19例PI－DLBCL。所有病例參照WHO（2008版）造血與淋巴組織腫瘤分類［8］，結(jié)合形態(tài)學及免疫表型，結(jié)合病史將所有病例明確診斷并分類，盡量剔除其他類型淋巴瘤轉(zhuǎn)化性DLBCL病例。

1.2 臨床資料收集：收集的臨床資料包括患者年齡、部位和臨床分期。原發(fā)部位定義參照Lopez－Guillermo等［9］的標準。臨床分期均按胃腸道NHL的Lugano分期方式［10］進行分期。以上臨床資料依據(jù)初次確診時的臨床病史、體格檢查、手術(shù)和（或）影像學檢查和骨髓穿刺等檢查資料做出判斷。

1.3 免疫組織化學染色及分型：石蠟包埋組織4μm厚切片，采用En－Vision法檢測瘤細胞免疫表型。45例樣本均進行以下抗體檢測：CD10、bcl－6、MUM1、GCET1、FOXP1和LMO2。CD10、bcl－6和MUM1等一抗及二抗均購自Dako公司，GCET1、FOXP1和LMO2等一抗購自Abcam公司。均設(shè)陽性和陰性對照。分別使用Hans、Choi及Tally免疫分型法則對DLBCL病例進行分型。具體分型方法參見文獻［11］。Hans分型法則將DLBCL分為GCB型和非GCB型，Choi及Tally分型法則將DLBCL分為GCB和ABC型。比較三種法則分型結(jié)果時，非GCB型與ABC型相對應(yīng)。

1.4 統(tǒng)計學分析：采用SPSS 13.0軟件進行分析。計數(shù)資料采用X2檢驗或Fisher精確檢驗比較各組間的差異。P＜0.05示差異有統(tǒng)計學意義。

2.結(jié)果

2.1 臨床特征：（1）年齡性別：26例PG－DLBCL患者中，男性11例，女性15例，男女比例0.73：1。中位年齡68歲（42－87歲）。19例PIDLBCL患者中，男性9例，女性10例，男女比例0.90：1。中位年齡66歲（27－92歲）。兩組間的性別及年齡均無顯著差異（表1）。（2）Lugano分期：共16例PG－DLBCL有充分臨床資料以進行臨床分期。I／II期者13例（81.3%），Ⅲ／Ⅳ期者3例（18.8%）。共15例PI－DLBCL有充分臨床資料以進行臨床分期。I／II期者7例（46.7%），Ⅲ／Ⅳ期者8例（53.3%）。PG－DLBCL的臨床分期傾向低于PI－DLBCL，盡管差異未達統(tǒng)計學意義（P＝0.066），這可能與樣本數(shù)較少有關(guān)（表1）。

2.2 免疫組織化學分型：三種法則分型結(jié)果均顯示PG－DLBCL的GCB亞型比例較高，與non－GCB（或ABC）亞型比率接近，而PI－DLBCL則以non－GCB（或ABC）亞型為主，GCB亞型比例較低。然而僅在使用Tally法側(cè)進行免疫組織化學分型時，PG－DLBCL的GCB亞型數(shù)才會顯著高于PI－DLBCL的GCB亞型數(shù)（P＝0.03），而在使用Hans法則或Choi法則時，這種差異未達統(tǒng)計學意義，這也可能是與樣本數(shù)較少有關(guān)（表1）。3.討論

表1 胃、腸原發(fā)性彌漫性大B細胞淋巴瘤的臨床特點、免疫學分型及基因改變的比較

我們的研究結(jié)果顯示PG與PI－DLBCL在臨床特點、免疫學分型改變方面均有一些差異。

首先在臨床表現(xiàn)方面，兩組間的性別及年齡均無顯著差異，然而在臨床分期上PG－DLBCL主要以I／II期（81.3%）為主，而PI－DLBCL的I／II期（46.7%）與Ⅲ／Ⅳ期（53.3%）比例接近，雖然差異未達統(tǒng)計學意義，PG－DLBCL的臨床分期傾向于低于PI－DLBCL，提示PG－DLBCL的預(yù)后可能優(yōu)于PI－DLBCL。

基因表達譜（GEP）分析發(fā)現(xiàn)按基因表達可將DLBCL分成兩大分子亞型：生發(fā)中心B細胞（GCB）樣亞型和活化B細胞（ABC）樣亞型，前者預(yù)后顯著好于后者，經(jīng)CHOP（環(huán)磷酰胺＋多柔比星＋長春新堿＋潑尼松）方案治療5年生存率分別為60%和35%。然而GEP檢測技術(shù)復(fù)雜且價格昂貴，不利于臨床推廣應(yīng)用，Nebraska醫(yī)學中心因此以GEP分析結(jié)果為依據(jù)相繼推出Hans、Choi和Tally等免疫組織化學分型法則。隨著Hans法則的廣泛應(yīng)用，東亞人DLBCL的GCB亞型明顯偏低已得到國內(nèi)外學者的認同。使用Hans及改進的Choi和Tally法則對本組DLBCL進行免疫學分型，我們發(fā)現(xiàn)PG－DLBCL的GCB亞型比例偏高，與non－GCB（或ABC）亞型比率接近，而PI－DLBCL則與結(jié)內(nèi)DLBCL相似，仍以non－GCB（或ABC）亞型為主，GCB亞型比例偏低。

我們的研究初步顯示，中國人PG－DLBCL具有與PI－DLBCL不同的臨床生物學特性，PG－DLBCL多為I－II期，GCB亞型比率較高，而中國人PI－DLBCL這些方面的特點似乎與中國人結(jié)內(nèi)DLBCL接近。然而由于本研究樣本數(shù)較小，因此一些差異不能達到統(tǒng)計學意義，因此有必要進行大宗樣本研究以進一步證實。

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R733.4

B

1009－6019（2015）07－0055－02

王華，男，山東菏澤，碩士在讀，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，主要研究方向：實驗動物醫(yī)學護理。