• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    針刺對(duì)缺血缺氧性腦癱乳鼠的治療作用*

    2015-06-09 22:48:23李素慧孫洪濤王延民魏正軍
    關(guān)鍵詞:針刺功能模型

    李素慧, 孫洪濤, 王延民, 魏正軍

    (1. 武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院儀器設(shè)備科, 2. 武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院腦科醫(yī)院, 天津 300162)

    ?

    針刺對(duì)缺血缺氧性腦癱乳鼠的治療作用*

    李素慧1, 孫洪濤2△, 王延民2, 魏正軍2

    (1. 武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院儀器設(shè)備科, 2. 武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院腦科醫(yī)院, 天津 300162)

    目的:探討針刺治療促進(jìn)腦癱乳鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的作用機(jī)制。方法:采用改良的缺氧缺血性腦病(HIE) 造模方法建立腦癱乳鼠模型,將60只乳鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、針刺組 (n=20),觀察各組乳鼠運(yùn)動(dòng)功能情況并評(píng)分,測(cè)定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)的含量,檢測(cè)大腦病變區(qū)域的突觸素(SYP)和神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白(GAP-43)的表達(dá)。結(jié)果:針刺治療組運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分較模型組運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分顯著增加(P<0.05);血清SOD活性較模型組顯著增加(P<0.01);血清MDA含量較模型組MDA含量明顯降低(P<0.01);腦組織SYP和GAP-43的表達(dá)較模型組SYP和GAP-43活性的表達(dá)明顯增加(P<0.05)。結(jié)論:針刺療法能通過降低MDA的活性、升高SOD的含量、進(jìn)一步上調(diào)病變部位的大腦皮質(zhì)區(qū)的SYP及GAP-43 的表達(dá)從而改善缺血缺氧性腦癱乳鼠的運(yùn)動(dòng)功能。

    針刺治療;腦性癱瘓;生長(zhǎng)相關(guān)蛋白;突觸素;乳鼠

    腦癱患兒的治療及功能恢復(fù)是目前醫(yī)學(xué)界研究的重點(diǎn)和難點(diǎn),針灸作為傳統(tǒng)的中醫(yī)治療方法,在腦性癱瘓的臨床治療中廣泛應(yīng)用,其對(duì)腦癱患者運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)起到了一定的治療效果[1,2],但對(duì)于針刺治療的作用機(jī)制研究較少。本研究建立腦癱乳鼠模型,采用針刺治療,對(duì)乳鼠進(jìn)行運(yùn)動(dòng)功能評(píng)估,并對(duì)乳鼠血清血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase ,SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde ,MDA)含量和大腦病變區(qū)域(synaptophysin,SYP)神

    經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白(growth associated protein-43,GAP-43)的表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè),觀察針刺治療的效果,探討針刺療法促進(jìn)腦癱乳鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的作用機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 試劑及儀器

    購(gòu)自于北京中山生物工程有限公司的抗GAP-43和抗SYP單克隆抗體、SAB試劑盒、DAB顯色試劑盒;購(gòu)自于南京建成生物研究所的SOD和MDA試劑盒。日本Olympus手術(shù)顯微鏡;美國(guó)HMIAS-2000型圖像分析系統(tǒng)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

    7日齡新生SD乳鼠(清潔級(jí),天津醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)60只,雌雄各半,平均體重(15.5±1.1)g,在20℃~22℃相對(duì)濕度45%~50%的動(dòng)物房中飼養(yǎng),光照周期10~12 h。將乳鼠隨機(jī)分為三組 (n=20):假手術(shù)組、模型組及針刺組,且每組動(dòng)物再隨機(jī)分為14 d和28 d兩個(gè)亞組(n=10)。分組結(jié)束后,將其送回各自母鼠籠中繼續(xù)母乳喂養(yǎng)。

    1.3 模型制備

    采用改良的缺氧缺血性腦病(hypoxic ischemic encephalopathy,HIE)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模方法[3]。將模型組及針刺組乳鼠仰臥位置于手術(shù)板上,采用10%的水合氯醛 (4 ml/kg) 進(jìn)行腹腔麻醉。先將乳鼠的四肢及頭部固定,碘伏消毒,取頸前正中切口,分離左頸總動(dòng)脈。選用0號(hào)線埋線結(jié)扎,縫合切口后立即將乳鼠放置于37℃水封閉的缺氧箱中(箱內(nèi)持續(xù)充以體積濃度為92%氮?dú)夂?%氧氣的混合氣體,氣體流量為 1 L/min),2.5 h后取出,繼續(xù)保溫1 h后觀察乳鼠的行為,若乳鼠行走時(shí)向手術(shù)對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈或向手術(shù)對(duì)側(cè)傾倒走路不穩(wěn),即可認(rèn)定為腦癱模型制作成功。假手術(shù)組乳鼠只取頸前正中切口,分離出左頸總動(dòng)脈,不做結(jié)扎只縫合切口。

    1.4 針刺組治療方法

    術(shù)后24 h開始針刺治療,根據(jù)“動(dòng)物針灸穴位圖譜”(中國(guó)針灸學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)針灸研究分會(huì)制定)選穴。針刺取穴:百會(huì)、合谷、曲池、前三里、后三里、涌泉;針刺方法:從上到下,從左至右,毫針淺刺,每次穴位針刺3 min,不留針,每天1次,連續(xù)28 d。

    1.5 觀察指標(biāo)及測(cè)定方法

    1.5.1 運(yùn)動(dòng)功能評(píng)估 分別于針刺后14 d及28 d從各組隨機(jī)選出10只乳鼠,對(duì)其進(jìn)行BBB運(yùn)動(dòng)功能等級(jí)評(píng)分[4],評(píng)估其運(yùn)動(dòng)功能。評(píng)分共分三部分:第一部分為0~7分,評(píng)判動(dòng)物后肢各關(guān)節(jié)活動(dòng);第二部分為8~13分,評(píng)判后肢的步態(tài)及協(xié)調(diào)功能;第三部分為14~21分,評(píng)判運(yùn)動(dòng)中爪的精細(xì)動(dòng)作,三項(xiàng)滿分為21分。實(shí)驗(yàn)時(shí)保持房間內(nèi)的安靜,在自然光線下進(jìn)行測(cè)試。將乳鼠放置于寬大活動(dòng)場(chǎng)地,待其活動(dòng)自如后開始評(píng)估,分別從不同方向?qū)θ槭筮M(jìn)行評(píng)定。1.5.2 SOD活性和MDA含量的檢測(cè) 以4 ml/kg劑量將10%的水合氯醛腹腔注射麻醉乳鼠,經(jīng)腹主動(dòng)脈采血,3 000 r/min離心10 min,取上清液,按試劑盒說明測(cè)定大鼠血清SOD活性和MDA的含量。

    1.5.3 GAP-43和SYP 表達(dá)的檢測(cè) 麻醉乳鼠經(jīng)腹主動(dòng)脈采血后,再經(jīng)心臟灌注4% 的多聚甲醛,然后將其固定,開顱,暴露出大腦,取從前鹵向后2 mm的冠狀位腦片,用10%中性甲醛溶液固定24 h,常規(guī)處理后切片,SABC 法染色,進(jìn)行GAP-43和SYP的免疫組化染色測(cè)定,具體操作步驟按照試劑盒上的說明進(jìn)行。采用美國(guó)HMIAS-2000型圖像分析系統(tǒng)測(cè)定平均光密度 (OD值) 。

    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    2 結(jié)果

    2.1 各組乳鼠不同時(shí)間的運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分變化

    與假手術(shù)組比較,模型組乳鼠運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分明顯降低(P<0.05);經(jīng)28 d針刺治療,針刺組乳鼠的運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分明顯升高(P<0.05,表1)。說明針刺可以促進(jìn)腦癱乳鼠的運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)。

    Group14d28dS19.4±0.1919.3±0.17M6.9±0.18*7.4±0.16*A7.7±0.23*11.3±0.29*#

    S: Sham operation group; M: Model group; A: Acupuncture group

    *P<0.05vssham operation group;#P<0.05vsmodel group

    2.2 各組乳鼠不同時(shí)間血清SOD和MDA含量的變化

    與假手術(shù)組比較,乳鼠模型組血清SOD活性顯著性降低(P<0.01),MDA含量顯著升高(P<0.01);與模型組比較,針刺組SOD活性顯著性增加(P<0.05,P<0.01),MDA含量顯著降低(P<0.01,表2)。

    GroupSOD(U/ml)MDA(nmol/ml)14d28d14d28dS154.5±12.90157.9±15.33.50±0.493.62±0.56M116.5±13.76**129.4±10.4**10.46±1.77**9.83±1.43**A136.4±13.96**147.1±12.7##7.72±0.89**##6.48±1.26**##

    S: Sham operation group; M: Model group; A: Acupuncture group; SOD: Superoxide dismutase; MDA: Malondialdehyde

    **P<0.01vssham operation group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group

    2.3 各組乳鼠不同時(shí)間大腦病變區(qū)SYP和GAP-43表達(dá)的變化

    與假手術(shù)組比較,模型組SYP 14 d的表達(dá)顯著降低(P<0.05),針刺組SYP 14 d的表達(dá)無顯著差異(P<0.05),模型組和針刺組乳鼠GAP-43的表達(dá)明顯升高(P<0.05,P<0.01)。

    GroupSYPGAP-4314d28d14d28dS0.162±0.0150.164±0.0130.090±0.0240.092±0.028M0.140±0.023*0.228±0.019*0.179±0.016*0.211±0.042*A0.152±0.0200.262±0.028**#0.182±0.024**0.288±0.025**#

    S: Sham operation group; M: Model group; A: Acupuncture group; SYP: Synaptophysin; GAP-43: Growth associated protein 43

    *P<0.05,**P<0.01vssham operation group;#P<0.05vsmodel group

    3 討論

    小兒腦性癱瘓是指從出生前到出生后l個(gè)月內(nèi)由各種原因所引起的腦損傷或發(fā)育缺陷所導(dǎo)致的運(yùn)動(dòng)障礙及姿勢(shì)異常[5]。早產(chǎn)、產(chǎn)傷、圍產(chǎn)期窒息及核黃疽等造成的新生兒腦組織缺血缺氧均是引起小兒腦性癱瘓的原因。臨床表現(xiàn)主要有中樞性運(yùn)動(dòng)障礙及姿勢(shì)異常,同時(shí)伴有不同程度的智力障礙、癲癇及視覺障礙、聽覺障礙、語言行為障礙等。患兒將會(huì)長(zhǎng)期或終生殘疾,直接影響兒童的身心健康和人口素質(zhì)的提高。目前,人們一直在積極探索腦癱的有效治療方法。有關(guān)文獻(xiàn)表明,傳統(tǒng)的針灸療法已被證實(shí)有良好療效,但文獻(xiàn)只是單純?yōu)榱俗C實(shí)其療效,而對(duì)其作用機(jī)制的研究相對(duì)較少。

    正常機(jī)體存在抗氧化和氧化系統(tǒng),兩系統(tǒng)互相制約而保持著動(dòng)態(tài)平衡。腦組織在缺血缺氧狀態(tài)下,機(jī)體將會(huì)產(chǎn)生大量自由基,使過氧化產(chǎn)物蓄積,引起腦組織損傷。MDA是氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物,可以作為過氧化產(chǎn)物的標(biāo)志物[6,7]。SOD是機(jī)體中主要的抗氧化酶,其活性代表著組織清除體內(nèi)自由基的能力。SOD可以催化氧自由基的歧化反應(yīng),使之轉(zhuǎn)化為氧氣和過氧化氫,從而降低過氧化損傷,調(diào)節(jié)機(jī)體抗氧化和氧化體系的平衡[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明腦癱乳鼠經(jīng)過針刺治療能夠使SOD的含量升高、使MDA的含量降低,改善腦缺血缺氧引起的腦損傷。

    多數(shù)腦癱是多部位的腦組織缺血缺氧,其神經(jīng)元的損傷不容忽視,神經(jīng)元可以通過重塑和功能重組來修復(fù)。大腦可塑性包括現(xiàn)有突觸功能的變化、突觸發(fā)生、皮質(zhì)重組和可能的神經(jīng)再生。SYP是一種分布于突觸囊泡膜上且與突觸結(jié)構(gòu)和功能密切相關(guān)的特異性糖蛋白。它既可作為突觸發(fā)生的標(biāo)志,又能反映出突觸的密度和傳遞效能,與遞質(zhì)的釋放關(guān)系密切,可影響突觸可塑性[9]。SYP在突觸形成的起始階段、突觸結(jié)構(gòu)的保持以及突觸傳遞過程中都是必需的,是突觸重建的重要標(biāo)志。SYP的免疫組化結(jié)果可準(zhǔn)確反映神經(jīng)突觸的密度,模型組乳鼠腦缺血缺氧損傷后,大量的神經(jīng)細(xì)胞死亡或凋亡,突觸結(jié)構(gòu)崩潰,病變腦區(qū)神經(jīng)元發(fā)生病變,導(dǎo)致神經(jīng)突觸末梢的蛻變甚至丟失,同時(shí)神經(jīng)細(xì)胞的代謝減弱、蛋白的合成能力下降,軸漿運(yùn)輸功能隨之下降,所以模型組SYP的表達(dá)首先是降低的;其后,自然修復(fù)和突觸代償功能促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞再生、突觸重建,SYP的表達(dá)能力明顯增高,這與國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道的基本一致[10]。SYP表達(dá)能力的提高可以反映神經(jīng)傳遞的增加,這種神經(jīng)傳遞的增加在一定程度上也能改善認(rèn)知與肢體活動(dòng)功能[11]。

    GAP-43是一種與神經(jīng)軸突生長(zhǎng)密切相關(guān)的神經(jīng)組織特異性磷酸蛋白,在神經(jīng)生長(zhǎng)部位的表達(dá)較為豐富,在神經(jīng)細(xì)胞、雪旺細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中分布較為廣泛,它能夠促進(jìn)神經(jīng)元發(fā)育,是神經(jīng)細(xì)胞的生長(zhǎng)、再生及突觸形成和重建的標(biāo)志性物質(zhì)[12],是神經(jīng)元再塑性的一項(xiàng)重要的觀察指標(biāo)。GAP-43與神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育、突觸的可塑性、神經(jīng)再生等密切相關(guān)[13]。模型組乳鼠缺血缺氧,神經(jīng)細(xì)胞受到損傷時(shí),可以通過突觸、軸突的再生,使受損的神經(jīng)元重新建立聯(lián)系進(jìn)行代償,神經(jīng)可塑性增加[14]。GAP-43呈高水平表達(dá)提示神經(jīng)纖維正處于再生活躍狀態(tài),神經(jīng)元突觸、軸突再生增強(qiáng)。

    本研究結(jié)果顯示,針刺組治療28 d時(shí)SYP和GAP-43的表達(dá)較模型組顯著性升高,說明針刺可以通過上調(diào)受損腦組織SYP和GAP-43的表達(dá),并延長(zhǎng)其高表達(dá)時(shí)程,來改善腦組織缺血缺氧損傷后神經(jīng)細(xì)胞的軸突再生和突觸的重塑,促進(jìn)損傷神經(jīng)細(xì)胞的修復(fù)。

    針刺穴位治療腦癱,把中醫(yī)的經(jīng)絡(luò)學(xué)說和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的大腦功能定位相結(jié)合,在腦康復(fù)醫(yī)學(xué)中具有獨(dú)特的意義。通過針刺相關(guān)穴位,可以促進(jìn)腦組織病變區(qū)側(cè)枝循環(huán)的形成,可解除血管痙攣,改善腦組織供血,同時(shí)激活抑制狀態(tài)的腦細(xì)胞,增強(qiáng)機(jī)體免疫力,有助于疾病的恢復(fù)。腦癱運(yùn)動(dòng)功能障礙屬祖國(guó)中醫(yī)學(xué)“痿證”范疇,針刺治療以選陽明經(jīng)脈腧穴為主。另外,針刺經(jīng)穴,可以疏通經(jīng)脈,上達(dá)巔頂,直接刺激大腦皮質(zhì)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng),從而改善患肢的運(yùn)動(dòng)功能。本研究認(rèn)為針刺療法可以通過提高SOD的活性和降低MDA的含量來抑制氧化損傷,可以促進(jìn)大腦組織的GAP-43和SYP的表達(dá),來完成腦組織的重塑與功能重組,從而促進(jìn)腦癱乳鼠運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)。

    近年來, 中醫(yī)針灸治療腦癱越來越被醫(yī)學(xué)界所重視, 尤其是針灸表現(xiàn)出來的獨(dú)特療效,已經(jīng)被廣大患者所選擇。針灸治療腦癱將有廣闊的研究前景,臨床觀察結(jié)果[15]提示,腦癱患兒越早治療越好。中樞神經(jīng)系統(tǒng)尚未發(fā)育成熟時(shí),其可塑性及代償功能均較強(qiáng),可通過穴位刺激療法促進(jìn)軸突的發(fā)育,故治療效果較好;腦癱患兒隨著年齡的增長(zhǎng),伴隨的臨床癥狀越來越明顯,異常身體姿勢(shì)固定化,引起繼發(fā)性肌肉萎縮、肌腱攣縮、肌張力降低、功能障礙等臨床癥狀,治療可逆性差,療效相對(duì)較差。故對(duì)腦癱患兒應(yīng)當(dāng)早診斷、早治療。本研究為針刺治療小兒腦癱提供了理論依據(jù)和支持,為今后腦癱治療研究提供了基礎(chǔ)。

    [1] 孫 巖, 陳 海. BTX-A 水針治療痙攣型腦癱60例[J]. 河南中醫(yī), 2010, 30(12): 1223-1224.

    [2] 曾超高, 于海波. 靳三針療法結(jié)合康復(fù)訓(xùn)練治療痙攣型腦癱療效分析[J]. 實(shí)用中醫(yī)藥雜志, 2010, 26(3): 148-149.

    [3] Holtzman DM, Sheld RA, Jaffe W,etal. Nerve growth factor protects the neonatal brain again hypoxic-ischemic injury[J].AnnNeurol, 1996, 39(1): 114-122.

    [4] 湯明麗, 呂復(fù)莉, 唐久來. 小兒腦癱康復(fù)治療現(xiàn)狀及進(jìn)展[J]. 安徽醫(yī)學(xué), 2012, 33(9): 1255-1257.

    [5] 《中華兒科雜志》編輯委員會(huì), 中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)神經(jīng)學(xué)組. 小兒腦性癱瘓的定義、診斷條件及分型[J]. 中華兒科雜志, 2005, 43(4): 262.

    [6] 周 峰. 煙酰胺對(duì)甲基苯丙胺注射后小鼠腦組織中脂質(zhì)過氧化的影響[J]. 江蘇醫(yī)藥, 2014, 40(1): 13-15.

    [7] 高偉敏, 任今今, 楊永濱, 等. 清熱止瀉方治療急性放射性腸炎的作用機(jī)制[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2013, 32(7): 878-881.

    [8] 張歆薇, 劉海強(qiáng), 徐勝龍, 等. 次聲作用對(duì)大鼠血漿SOD、MDA、NO水平的影響[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2012, 12(18): 3416-3419.

    [9] Kwon SE, Chapman ER. Synaptophysin regμlates the kinetics of synaptic vesicle endocytosis in central neurons[J].Neuron, 2011, 70(5): 847-854.

    [10]Türeci E, Dashti R, Tanriverdi T,etal. Acute ethanol intoxication in a model of traumatic brain injury: The protective role of moderate doses demonstrated by immunoreactivity of synaptophysin in hippocampal neurons[J].NeurolRes, 2004, 26(1): 108-112.

    [11]Robinson PA. Neural field theory of synaptic plasticity[J].JTheorBiol, 2011, 285(1): 156-163.

    [12]Krueger DD,Nairn AC. Expression of PKC substrate proteins,GAP-43 and nenrogranin,is downregulated by cAMP signaling and alterations in synaptic activity[J].EurJNeurosci, 2007, 26(11): 3043-3053.

    [13]施穎菡, 尤 莉. 神經(jīng)損傷后GAP-43 表達(dá)的進(jìn)展[J]. 中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥, 2011, 33(6): 246.

    [14]宋文秀, 曹云濤, 劉華慶, 等. 新生鼠腦缺血預(yù)處理后突觸素和膠原纖維酸性蛋白表達(dá)及意義[J]. 臨床兒科雜志, 2004, 22(8): 549.

    [15]孫 莉, 翟紅印, 蘇春婭. 穴位與肌肉定位水針治療痙攣型腦癱的臨床觀察[J]. 中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志, 2011, 14(19): 33-35.

    Therapeutic effect of acupuncture treatment on ischemic hypoxic neonate rats with cerebral palsy

    LI Su-hui1, SUN Hong-tao2△, WANG Yan-min2, WEI Zheng-jun2

    (1. Department of Instrument and Equipmement, 2. Department of Neurology, Affiliated Hospital of Logistics College of Chinese People's Armed Police Forces, Tianjin 300162, China)

    Objective: To explore the mechanisms of acupuncture treatment promoting the motor function recovery of neonate rats with cerebral palsy. Methods: The improved hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE) means was performed to establish the model of neonate rats with cerebral palsy. All neonate rats were randomly divided into 3 groups: sham group, model group and acupuncture group (n=20). We observed and scored motor function of rats, measured the levels of superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) in serum, and also measured the expression of synaptophysin(SYP) and growth associated protein-43(GAP-43) in the diseased region of cerebral tissue. Results: The motor function scores (11.3±0.29) and the serum level of SOD (147.1±12.7) U/ml in acupuncture treatment group were higher than those of model group (P<0.05). The serum level of MDA was lower in acupuncture treatment group than that of model group (P<0.05). The expression of SYP and GAP-43 in the diseased region of cerebral tissue of acupuncture treatment group were higher than those of model group (P<0.05). Conclusion: Acupuncture-therapy could improve the motor function of neonate rats with cerebral palsy by decreasing the content of MDA in serum, increasing the contents of SOD in serum, and prolonging the upregulation of SYP and GAP-43 expressions in brain tissue.

    acupuncture therapy; cerebral palsy; growth associated protein; synaptophysin; neonate rat

    2014-11-05

    2015-06-03

    R245.3

    A

    1000-6834(2015)05-473-04

    10.13459/j.cnki.cjap.2015.05.023

    △【通訊作者】Tel: 022-60577145; E-mail: chenmo333@163.com

    猜你喜歡
    針刺功能模型
    一半模型
    也談詩的“功能”
    中華詩詞(2022年6期)2022-12-31 06:41:24
    談針刺“針刺之要,氣至而有效”
    重要模型『一線三等角』
    重尾非線性自回歸模型自加權(quán)M-估計(jì)的漸近分布
    關(guān)于非首都功能疏解的幾點(diǎn)思考
    3D打印中的模型分割與打包
    針刺聯(lián)合拔罐治療痤瘡50例
    中西醫(yī)結(jié)合治療甲狀腺功能亢進(jìn)癥31例
    針刺結(jié)合聰耳息鳴湯治療耳鳴80例
    国产xxxxx性猛交| 天天影视国产精品| 新久久久久国产一级毛片| 国产亚洲精品第一综合不卡| 男女床上黄色一级片免费看| 国产成人精品无人区| 国产一区二区三区av在线| 女警被强在线播放| 一级片'在线观看视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 曰老女人黄片| 亚洲专区中文字幕在线| 国产av一区二区精品久久| 岛国毛片在线播放| 美女大奶头黄色视频| www.av在线官网国产| 免费观看av网站的网址| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 成年人午夜在线观看视频| 国产av国产精品国产| 一边亲一边摸免费视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 啦啦啦 在线观看视频| av视频免费观看在线观看| 亚洲精品国产区一区二| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲国产最新在线播放| 成人影院久久| 欧美中文综合在线视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 久久99一区二区三区| 国产免费又黄又爽又色| 成年av动漫网址| 国产日韩欧美视频二区| 亚洲欧美一区二区三区国产| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 免费少妇av软件| 人妻一区二区av| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 美女主播在线视频| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产精品国产三级国产专区5o| 亚洲成人免费av在线播放| 午夜福利,免费看| 久久人妻熟女aⅴ| 国产黄频视频在线观看| 99热国产这里只有精品6| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 青春草亚洲视频在线观看| 精品久久久精品久久久| 国产高清视频在线播放一区 | 国产av国产精品国产| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲国产成人一精品久久久| 男女床上黄色一级片免费看| 久久性视频一级片| 2018国产大陆天天弄谢| 黄色视频在线播放观看不卡| 另类亚洲欧美激情| 国产成人影院久久av| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 天堂俺去俺来也www色官网| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产黄色免费在线视频| 黄色怎么调成土黄色| 欧美日韩黄片免| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲国产精品一区三区| 久久久精品区二区三区| 久久鲁丝午夜福利片| 欧美日韩视频精品一区| 精品高清国产在线一区| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲成色77777| 视频区图区小说| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产高清视频在线播放一区 | 制服诱惑二区| 在线观看免费高清a一片| www.自偷自拍.com| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美精品亚洲一区二区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 女警被强在线播放| 国产老妇伦熟女老妇高清| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 天堂中文最新版在线下载| 亚洲精品乱久久久久久| 一级毛片我不卡| 久久久国产欧美日韩av| 美女大奶头黄色视频| 欧美另类一区| 婷婷成人精品国产| 久久国产精品大桥未久av| 国产成人免费观看mmmm| 久热爱精品视频在线9| 日韩精品免费视频一区二区三区| 中文欧美无线码| 黄色a级毛片大全视频| 亚洲精品国产区一区二| 欧美激情高清一区二区三区| 啦啦啦在线观看免费高清www| 在现免费观看毛片| 日韩欧美一区视频在线观看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 99国产精品99久久久久| 亚洲av在线观看美女高潮| 亚洲av电影在线进入| 两人在一起打扑克的视频| 午夜福利影视在线免费观看| 天天影视国产精品| 成人手机av| 校园人妻丝袜中文字幕| 极品少妇高潮喷水抽搐| 日韩av不卡免费在线播放| 亚洲精品国产色婷婷电影| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 九草在线视频观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲欧美一区二区三区国产| 美女高潮到喷水免费观看| 国产成人av教育| 咕卡用的链子| 欧美变态另类bdsm刘玥| 香蕉国产在线看| av国产精品久久久久影院| 晚上一个人看的免费电影| 看十八女毛片水多多多| 在线av久久热| 美女国产高潮福利片在线看| 国产av一区二区精品久久| 国产黄色免费在线视频| 亚洲国产欧美网| 波多野结衣av一区二区av| 在线看a的网站| 国产精品欧美亚洲77777| 欧美成人午夜精品| 波野结衣二区三区在线| 一级毛片电影观看| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 9色porny在线观看| 国产野战对白在线观看| 国产黄色免费在线视频| 亚洲色图综合在线观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 狠狠精品人妻久久久久久综合| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产免费现黄频在线看| 777米奇影视久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 亚洲国产看品久久| 日本一区二区免费在线视频| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久女婷五月综合色啪小说| 一级毛片电影观看| 亚洲少妇的诱惑av| 久久九九热精品免费| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲第一av免费看| 精品熟女少妇八av免费久了| 9191精品国产免费久久| 人妻一区二区av| 精品国产乱码久久久久久小说| av电影中文网址| 欧美变态另类bdsm刘玥| 麻豆国产av国片精品| 91精品伊人久久大香线蕉| 欧美精品高潮呻吟av久久| 美女大奶头黄色视频| 久久久久久久精品精品| 成年动漫av网址| 嫁个100分男人电影在线观看 | 满18在线观看网站| 国产成人a∨麻豆精品| 久久狼人影院| 视频区图区小说| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲成色77777| 国产激情久久老熟女| 国产亚洲一区二区精品| 久久人妻熟女aⅴ| 丰满迷人的少妇在线观看| 嫩草影视91久久| 欧美精品一区二区大全| 精品国产国语对白av| h视频一区二区三区| 69精品国产乱码久久久| 久久久久国产精品人妻一区二区| 丝袜美腿诱惑在线| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 午夜福利视频在线观看免费| 香蕉国产在线看| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 精品国产一区二区三区四区第35| 亚洲熟女精品中文字幕| 9热在线视频观看99| 午夜福利,免费看| 日韩伦理黄色片| 欧美人与性动交α欧美软件| 欧美日本中文国产一区发布| 国产成人欧美在线观看 | 国产爽快片一区二区三区| 尾随美女入室| 日本av免费视频播放| 亚洲精品国产色婷婷电影| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久人妻熟女aⅴ| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 亚洲精品av麻豆狂野| 超碰97精品在线观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 欧美在线一区亚洲| av天堂久久9| xxxhd国产人妻xxx| 午夜精品国产一区二区电影| 夫妻性生交免费视频一级片| 成人国语在线视频| 午夜激情av网站| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 丝袜脚勾引网站| www.av在线官网国产| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 视频区图区小说| 一二三四在线观看免费中文在| 国产三级黄色录像| 丰满迷人的少妇在线观看| 在线观看一区二区三区激情| 国产熟女午夜一区二区三区| 又紧又爽又黄一区二区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| xxxhd国产人妻xxx| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| av欧美777| 极品人妻少妇av视频| 欧美成人午夜精品| 日本a在线网址| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 高清av免费在线| 成年av动漫网址| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 成年人午夜在线观看视频| 久久久国产精品麻豆| 国产精品一区二区在线不卡| 日韩欧美一区视频在线观看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 成人国产一区最新在线观看 | 自线自在国产av| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 国产精品久久久久成人av| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产高清videossex| 少妇精品久久久久久久| 亚洲av男天堂| 超碰97精品在线观看| 老鸭窝网址在线观看| 9191精品国产免费久久| 成人免费观看视频高清| 国产av国产精品国产| kizo精华| 亚洲国产中文字幕在线视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 狂野欧美激情性xxxx| 午夜视频精品福利| 亚洲美女黄色视频免费看| 老司机在亚洲福利影院| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 国产一卡二卡三卡精品| 精品一区在线观看国产| 精品人妻在线不人妻| 首页视频小说图片口味搜索 | 大码成人一级视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧美日韩成人在线一区二区| 一级黄片播放器| 久久精品国产亚洲av高清一级| 午夜日韩欧美国产| 性高湖久久久久久久久免费观看| 黄色怎么调成土黄色| 乱人伦中国视频| 欧美激情高清一区二区三区| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲七黄色美女视频| 多毛熟女@视频| 午夜两性在线视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 色综合欧美亚洲国产小说| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 久久久国产精品麻豆| 亚洲成国产人片在线观看| a级毛片黄视频| 熟女av电影| 又大又黄又爽视频免费| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 一二三四社区在线视频社区8| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 下体分泌物呈黄色| 久久天堂一区二区三区四区| 精品久久久久久电影网| 久久久久国产精品人妻一区二区| 久久久国产精品麻豆| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 水蜜桃什么品种好| videosex国产| 亚洲国产中文字幕在线视频| 999久久久国产精品视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片 | 男女无遮挡免费网站观看| 国产精品国产三级专区第一集| 精品少妇久久久久久888优播| 两个人免费观看高清视频| 亚洲成国产人片在线观看| av线在线观看网站| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 国产99久久九九免费精品| 亚洲第一青青草原| 国产精品一区二区免费欧美 | 中国美女看黄片| 在现免费观看毛片| 大型av网站在线播放| 精品少妇内射三级| 久久久国产精品麻豆| av国产精品久久久久影院| 国产伦理片在线播放av一区| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 免费在线观看完整版高清| 国产精品欧美亚洲77777| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 精品欧美一区二区三区在线| 国产真人三级小视频在线观看| 成人国语在线视频| 搡老岳熟女国产| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 精品人妻1区二区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 在线观看免费午夜福利视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲美女黄色视频免费看| 天堂俺去俺来也www色官网| 18在线观看网站| 秋霞在线观看毛片| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美日韩黄片免| 久久九九热精品免费| 久久精品久久久久久久性| 亚洲一区二区三区欧美精品| 午夜激情av网站| 一级片免费观看大全| 丝袜脚勾引网站| 美女大奶头黄色视频| 欧美日韩av久久| 亚洲av欧美aⅴ国产| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 久久精品成人免费网站| 午夜两性在线视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 男人舔女人的私密视频| 国产麻豆69| 国产高清视频在线播放一区 | 天天操日日干夜夜撸| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 男人添女人高潮全过程视频| 免费av中文字幕在线| 中文字幕人妻丝袜制服| 日日爽夜夜爽网站| 国产男女超爽视频在线观看| 一本综合久久免费| 性色av乱码一区二区三区2| 午夜日韩欧美国产| 中文字幕人妻丝袜制服| 五月天丁香电影| 国产女主播在线喷水免费视频网站| a级毛片黄视频| av网站免费在线观看视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日韩大码丰满熟妇| 热re99久久精品国产66热6| 国产精品一国产av| 自线自在国产av| 国产麻豆69| 涩涩av久久男人的天堂| xxx大片免费视频| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲国产av影院在线观看| av在线app专区| 国产成人欧美在线观看 | 欧美大码av| 高清视频免费观看一区二区| 国产成人免费无遮挡视频| 国产三级黄色录像| 午夜福利影视在线免费观看| 天天操日日干夜夜撸| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 99香蕉大伊视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 免费不卡黄色视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲国产欧美在线一区| 国产av一区二区精品久久| 久久影院123| 人妻一区二区av| 日日夜夜操网爽| 久久女婷五月综合色啪小说| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 中国美女看黄片| 激情视频va一区二区三区| 69精品国产乱码久久久| av在线app专区| 777米奇影视久久| 青春草视频在线免费观看| 亚洲伊人久久精品综合| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产黄频视频在线观看| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 人成视频在线观看免费观看| 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲成色77777| 色视频在线一区二区三区| 久热这里只有精品99| 中文字幕av电影在线播放| 成年动漫av网址| 成人国语在线视频| 十八禁高潮呻吟视频| av福利片在线| 悠悠久久av| 亚洲人成电影观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡 | 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 欧美日韩av久久| 91国产中文字幕| 国产爽快片一区二区三区| 成人国产av品久久久| 狂野欧美激情性bbbbbb| 久久精品亚洲av国产电影网| www.自偷自拍.com| 国产亚洲欧美精品永久| 欧美激情 高清一区二区三区| 高清不卡的av网站| 免费观看av网站的网址| 日韩一区二区三区影片| 午夜老司机福利片| 欧美97在线视频| 精品第一国产精品| 成人亚洲精品一区在线观看| 热99国产精品久久久久久7| 一级,二级,三级黄色视频| 国产一级毛片在线| 日韩大片免费观看网站| 亚洲视频免费观看视频| 99国产精品99久久久久| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲中文字幕日韩| 老司机午夜十八禁免费视频| 午夜免费观看性视频| 青青草视频在线视频观看| 老司机影院毛片| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日本色播在线视频| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 男女高潮啪啪啪动态图| 女人久久www免费人成看片| 亚洲精品国产av成人精品| 日韩av不卡免费在线播放| 晚上一个人看的免费电影| 成人国语在线视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 在线观看免费高清a一片| 亚洲av日韩在线播放| 久久久精品区二区三区| 两人在一起打扑克的视频| 国产av一区二区精品久久| 亚洲 欧美一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲成人免费电影在线观看 | 免费少妇av软件| 两个人看的免费小视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲一区中文字幕在线| 日本av免费视频播放| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 欧美中文综合在线视频| 国产三级黄色录像| 丝袜脚勾引网站| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 国产又爽黄色视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 国产一区有黄有色的免费视频| 多毛熟女@视频| www.999成人在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 两性夫妻黄色片| 免费黄频网站在线观看国产| 国产精品一区二区免费欧美 | 国产一区亚洲一区在线观看| 尾随美女入室| 最近手机中文字幕大全| 免费高清在线观看视频在线观看| 新久久久久国产一级毛片| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 九草在线视频观看| 欧美日韩精品网址| 国产成人av教育| 久热这里只有精品99| 在线观看免费高清a一片| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产激情久久老熟女| 欧美激情极品国产一区二区三区| 老司机影院成人| 麻豆国产av国片精品| 国产又爽黄色视频| 中国国产av一级| 叶爱在线成人免费视频播放| 国产亚洲一区二区精品| 爱豆传媒免费全集在线观看| 亚洲av美国av| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 91国产中文字幕| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 校园人妻丝袜中文字幕| 99国产精品一区二区蜜桃av | 色综合欧美亚洲国产小说| 捣出白浆h1v1| 成年人午夜在线观看视频| 99精品久久久久人妻精品| avwww免费| 91精品国产国语对白视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 国产爽快片一区二区三区| 欧美国产精品一级二级三级| 久久国产精品大桥未久av| 亚洲中文字幕日韩| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产欧美日韩精品亚洲av| 免费日韩欧美在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 国产av一区二区精品久久| 99九九在线精品视频| 国产黄频视频在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 中文字幕av电影在线播放| a级毛片在线看网站| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 两个人看的免费小视频| 国产免费福利视频在线观看| 久久久久久久国产电影| 夫妻午夜视频| 99精国产麻豆久久婷婷| 欧美日韩黄片免| 久久久国产一区二区| 国产三级黄色录像| 国产亚洲av高清不卡| 各种免费的搞黄视频| 久久鲁丝午夜福利片| 午夜视频精品福利| 最新在线观看一区二区三区 | 国产精品亚洲av一区麻豆| 99国产精品免费福利视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 日本wwww免费看| 国产伦理片在线播放av一区| 五月天丁香电影| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 热99久久久久精品小说推荐| 一本综合久久免费| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 男女下面插进去视频免费观看| www.自偷自拍.com| 黑人欧美特级aaaaaa片| 永久免费av网站大全| www.自偷自拍.com| 亚洲情色 制服丝袜| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网 | 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 夫妻性生交免费视频一级片| 免费看av在线观看网站| 国产精品三级大全| 国产有黄有色有爽视频| 中文字幕制服av| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 亚洲九九香蕉| 丝袜在线中文字幕| 欧美国产精品一级二级三级| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久影院123| 天天操日日干夜夜撸| 新久久久久国产一级毛片|