不同產(chǎn)地大黃對(duì)高脂血癥大鼠血脂及抗氧化作用的影響*

王志旺， 郭 玫， 馬 丹， 王瑞瓊

(甘肅中醫(yī)學(xué)院， 蘭州 730000)

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不同產(chǎn)地大黃對(duì)高脂血癥大鼠血脂及抗氧化作用的影響*

王志旺△， 郭 玫△， 馬 丹， 王瑞瓊

(甘肅中醫(yī)學(xué)院， 蘭州 730000)

目的：對(duì)比研究不同產(chǎn)地栽培大黃對(duì)高脂血癥大鼠血脂及抗氧化作用的影響。方法：72只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分9組(n=8)，除正常對(duì)照組外，其余大鼠給予高脂飼料的同時(shí)灌胃大黃(3.0 g/kg、1.0 g/kg)，每天1次，連續(xù)28 d，對(duì)比觀測(cè)不同產(chǎn)地大黃對(duì)高脂血癥大鼠血脂、血液流變學(xué)及抗氧化指標(biāo)變化。結(jié)果：1.0～3.0 g/kg劑量范圍內(nèi)的甘南栽培唐古特大黃、西寧栽培唐古特大黃及禮縣栽培掌葉大黃可降低血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)與低密度脂蛋白(LDL)，提高高密度脂蛋白(HDL)水平，改善血脂代謝，降低血液粘稠度，提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性，降低丙二醛(MDA)含量，其中對(duì)LDL、MDA及血液粘稠度的作用有明顯的量效關(guān)系(P<0.05,P<0.01)。同時(shí)唐古特大黃對(duì)LDL、MDA及血液粘稠度(低切、中切)的改善作用明顯優(yōu)于掌葉大黃(P<0.05)，而甘南栽培唐古特大黃與西寧栽培唐古特大黃的上述作用未見明顯差異。結(jié)論：唐古特大黃降血脂作用的部分指標(biāo)優(yōu)于掌葉大黃，而甘南栽培唐古特大黃與西寧栽培唐古特大黃的降血脂作用無明顯差異。

不同產(chǎn)地大黃；降血脂；血液粘度；抗氧化；大鼠

唐古特大黃(Rheum. tanguticum Maxim. ex Balf., RT)為2010版《中國藥典》收載的三種供藥用大黃品種之一[1]，主要產(chǎn)于青海南部、甘肅南部與西藏偏東部[2, 3]。近年來，RT的需求量穩(wěn)步增加，但RT產(chǎn)道地區(qū)的生產(chǎn)基地建設(shè)發(fā)展滯后，RT的來源仍以野生為主[4, 5]。為了發(fā)揮我國RT藥材資源的優(yōu)勢(shì)，地處地道產(chǎn)區(qū)的甘南州建設(shè)了一批RT生產(chǎn)基地。本研究組在大黃“逐瘀、利濕等”功效的指導(dǎo)下，對(duì)比考察甘南栽培RT、西寧栽培RT及禮縣栽培掌葉大黃(Rheum plmatum planted in Lixian, RP-LX)對(duì)高脂血癥動(dòng)物模型血脂、血液流變學(xué)及抗氧化系統(tǒng)的影響，為甘南栽培RT的應(yīng)用與出口提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

甘南栽培唐古特大黃(Rheum tanguticum planted in Gannan, GN-RT)、西寧栽培唐古特大黃(Rheum tanguticum planted in Xinin, XN-RT)與禮縣栽培掌葉大黃(Rheum plmatum planted in Lixian, LX-RPL)，人工栽培至第4年10月份采挖，整形后縱切成厚片，陰干；吉非羅齊(Gemfibrozil)，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H43020296，康普藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)：130701。丙硫氧嘧啶片，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H31021082，上海朝暉藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號(hào)：1401F11；總膽固醇(total cholesterol, TC)、甘油三酯(triglyceride, TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)與丙二醛(malonaldehyde, MDA)試劑盒，南京建成生物工程研究所生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：20140301、20140205、20140325、201404024、20140403、20140302、20140311。

1.2 動(dòng)物

SPF級(jí)Wistar大鼠，體重(150±10)g，雄性，由甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)SCXK(甘)2011-0001。SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室，許可證號(hào)為SYXK(甘)2011-0001。

1.3 儀器

高速冷凍離心機(jī)(TGL-16G)，上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn)；分光光度計(jì)(722型)，上海第三分析儀器廠生產(chǎn)；sartorius電子天平(BS1103)，北京賽多里斯有限公司；恒溫水浴鍋(HH-S型)，金壇市正基儀器有限公司生產(chǎn)。

1.4 受試藥的制備

取甘南栽培唐古特大黃(GN-RT)、西寧栽培唐古特大黃(XN-RT)與禮縣栽培掌葉大黃(LX-RPL)適量，用黃酒(每100 kg大黃用黃酒30 kg)拌勻，密封浸泡2 h至酒被吸盡，置籠屜內(nèi)，隔水蒸24 h，取出，干燥，粉碎即得熟大黃粗粉[6, 7]。稱取熟大黃粗粉適量，用蒸餾水煎煮兩次(分別加水10倍與8倍量、煎煮60 min與40 min)，過濾，濾液適當(dāng)濃縮至生藥濃度為0.3 g/ml，冷藏備用。

1.5 高脂飼料的配制

參考相關(guān)文獻(xiàn)[8-10]，按比例取膽固醇2%、膽酸鈉0.5%、蛋黃粉5%、蔗糖5%、丙硫氧嘧啶0.5%混合；取77%基飼飼料粉碎，將上述兩種混合物充分混勻。按比例取豬油10%，熔化后加入上述混合物，混均、成形、干燥即得高脂飼料。

1.6 分組、造模及給藥

取雄性大鼠72只，按體重分層隨機(jī)分為9組(n=8)，正常對(duì)照組給普通飼料；其余8組給予高脂飼料飼養(yǎng)；同時(shí)各組分別灌胃[11, 12]GN-RT(3.0 g/kg、1.0 g/kg)、XN-RT(3.0 g/kg、1.0 g/kg)、LX-RPL(3.0 g/kg、1.0 g/kg)、吉非羅齊(0.1 g/kg)，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組蒸餾水10 ml/kg灌胃，每天1次，連續(xù)28 d。

1.7 指標(biāo)觀測(cè)

末次給藥24 h、禁食不禁水12 h后，2%戊巴比妥鈉ip麻醉，股靜脈取血，部分血液肝素抗凝，測(cè)定粘度，其余血液自然凝固后離心(3 000 r/min×10 min)，取血清按試劑盒說明書測(cè)定血脂(TC、TG、LD與HDL)與氧化產(chǎn)物(MDA)及過氧化酶(SOD與GSH-Px)的含量。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 不同產(chǎn)地大黃對(duì)高脂血癥大鼠血脂影響的比較

大鼠食用高脂飼料(含0.5%丙硫氧嘧啶)28 d后，TC、TG與LDL升高，HDL降低，模型對(duì)照組與正常對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)；經(jīng)1.0～3.0 g/kg大黃干預(yù)后，上述異常變化得到不同程度的改善，即TC、TG與LDL降低，HDL升高，與模型對(duì)照組好比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)；對(duì)LDL的降低作用有一定的量效關(guān)系(P<0.05)。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，3.0 g/kg的唐古特大黃對(duì)LDL的降低作用明顯優(yōu)于掌葉大黃(P<0.05)，而甘南栽培唐古特大黃與西寧栽培唐古特大黃對(duì)血脂的影響未見明顯差異(表1)。

2.2 不同產(chǎn)地大黃對(duì)高脂血癥大鼠血液流變學(xué)影響的對(duì)比

食用高脂飼料28 d后，大鼠血液粘度明顯增加，與正常對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；在進(jìn)食高脂飼料的同時(shí)灌胃大黃干預(yù)后，血液粘度普遍下降，與模型對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。同時(shí)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，在1.0～3.0 g/kg劑量范圍內(nèi)，三種大黃的降血脂作用有明顯的量效關(guān)系(P<0.05)；對(duì)低切與中切下的血液粘度，唐古特大黃的降低作用明顯優(yōu)于掌葉大黃(P<0.05，表2)。

2.3 不同產(chǎn)地大黃對(duì)高脂血癥大鼠血清抗氧化作用影響的對(duì)比

高脂飼料飼養(yǎng)的大鼠血清抗氧化酶的活性降低，MDA的含量上升，模型對(duì)照組與正常對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；服用大黃治療后，上述變化得到明顯緩解，即血清SOD與GSH-Px的活性升高，MDA的含量下降，與模型對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P<0.01)。在降低MDA方面，相同來源的大黃在1.0～3.0 g/kg劑量范圍內(nèi)呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，而唐古特大黃的作用明顯優(yōu)于相同劑量的掌葉大黃(P<0.05，表3)。

Tab. 1 Comparative study of Rhubarbs from different regions on blood lipids in hyperlipidemia rats ±s, n=8)

RT-GN: Rhenum tanguticum planted in Gannan; RT-XN: Rheum tanguticum planted in Xinin; RP-LX: Rheum plmatum planted in Lixian; TC: Total cholesterol; TG: Triglyceride; LDL: Low density lipoprotein; HDL-C: High density lipoprotein

*P<0.05,**P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group;△P<0.05vslow dose group of the same origin;▲P<0.05vsthe same dose of the RP group

GroupDose(g/kg)Bloodviscosity(mPa·s)Lowshear(1/10)Middleshear(1/60)Highshear(1/150)Control?7．34±0．834．52±0．613．87±0．30Model?10．02±1．16??5．68±0．58??4．58±0．44??Gemfibrozil0．16．94±0．99##4．12±0．52##3．84±0．37##RP?LXLow1．08．55±1．05#5．10±0．534．11±0．40#RP?LXHigh3．07．50±0．89##△4．32±0．48##△3．76±0．37##RT?GNLow1．07．56±0．90##4．31±0．44##▲3．99±0．41#RT?GNHigh3．06．53±0．89##△▲3．84±0．33##△3．49±0．30##△RT?XNLow1．07．60±0．85##4．35±0．42##▲4．04±0．43#RT?XNHigh3．06．62±0．72##△▲3．86±0．39##△3．45±0．38##△

RT-GN: Rhenum tanguticum planted in Gannan; RT-XN: Rheum tanguticum planted in Xinin; RP-LX: Rheum plmatum planted in Lixian

**P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group;△P<0.05vslow dose group of the same origin;▲P<0.05vsthe same dose of the RP-LX group

3 討論

唐古特大黃作為大黃的品種之一，國內(nèi)使用與出口國外的需求量很大。為了規(guī)范化生產(chǎn)，大黃原產(chǎn)地的各省區(qū)相繼建立了一批大黃生產(chǎn)基地，如四川的南川、甘肅的禮縣與宕縣等地[13, 14]，但從現(xiàn)有的基地布局來看，公認(rèn)的優(yōu)質(zhì)唐古特大黃的產(chǎn)區(qū)-青海南部、甘肅南部與西藏偏東部一帶的生產(chǎn)基地發(fā)展緩慢，商品生產(chǎn)仍是以野生來源為主。為保證我國唐古特大黃藥材資源的優(yōu)勢(shì)，加快優(yōu)質(zhì)大黃產(chǎn)區(qū)的基地建設(shè)，甘南州建設(shè)了一批唐古特大黃生產(chǎn)基地。為了考察GMP種植基地所產(chǎn)唐古特大黃的品質(zhì)，本研究組就甘南所產(chǎn)唐古特大黃與西寧所產(chǎn)唐古特大黃、甘肅禮縣所產(chǎn)掌葉大黃的主要藥理作用展開研究。

GroupDose(g/kg)SOD(U/ml)GSH?Px(U/ml)MDA(nmol/ml)Control?155．66±19．87424．30±40．214．23±0．73Model?125．50±14．88??353．80±22．78??9．05±1．31??Gemfibrozil0．1165．47±22．04##401．35±30．44##4．27±0．94##RP?LXLow1．0132．18±13．93365．18±19．717．33±1．08#RP?LXHigh3．0152．24±16．42##384．14±21．70#5．94±1．06##△RT?GNLow1．0144．31±16．75#373．21±21．906．11±1．04##▲RT?GNHigh3．0160．04±19．01##396．66±24．47##4．54±0．99##△△▲RT?XNLow1．0145．33±19．32#374．18±24．686．18±1．01##▲RT?XNHigh3．0162．97±19．76##397．04±24．51##4．59±0．96##△△▲

RT-GN: Rhenum tanguticum planted in Gannan; RT-XN: Rheum tanguticum planted in Xinin; RP-LX: Rheum plmatum planted in Lixian; SOD: Superoxide dismutase; GSH-Px: Glutathione peroxidase; MDA: Malonaldehyde

**P<0.01vscontrol group;#P<0.05,##P<0.01vsmodel group;△P<0.05vslow dose group of the same origin;▲P<0.05vsthe same dose of the RP-LX group

本次研究在大黃“逐瘀涼血、利濕退黃、主治血熱吐衄、瘀血經(jīng)閉、產(chǎn)后瘀阻、跌打損傷及濕熱痢疾等癥”的中醫(yī)藥理論指導(dǎo)下，通過飼以含丙硫氧嘧啶的高脂飼料來復(fù)制高脂血癥動(dòng)物模型，對(duì)比觀測(cè)不同產(chǎn)地大黃的降血脂、改善血液流變學(xué)及抗氧化作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，甘南栽培唐古特大黃、西寧栽培唐古特大黃及禮縣栽培掌葉大黃可改善血脂代謝、降低血液粘稠度、提高抗氧化酶活性且在1.0～3.0 g/kg范圍內(nèi)有一定的量效關(guān)系。在降血脂與降低血液粘稠度等方面，唐古特大黃的作用明顯優(yōu)于掌葉大黃，而甘南栽培唐古特大黃與西寧栽培唐古特大黃的上述作用未見明顯差異。

綜上所述，甘南栽培唐古特大黃有明顯的降血脂、改善血液流變學(xué)及抗氧化作用，其上述作用與西寧栽培唐古特大黃無明顯差異；而唐古特大黃的部分降血脂指標(biāo)優(yōu)于禮縣栽培掌葉大黃。

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Effects of Rhubarbs from different regions on blood lipid and antioxidation of hyperlipidemia rats

WANG Zhi-wang△, GUO Mei△, MA Dan, WANG Rui-qiong

(Gansu College of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China)

Objective: To comparatively study the effects of Rhubarbs from different regions on blood lipid and antioxi dation of hyperlipidemia rats. Methods: Male rats were randomly divided into 9 groups (n=8) and fed with high-fat diet to replicate the hyperlipidemia model. Meanwhile, Rheum tanguticum was administrated intragastrically at two doses (3.0 g/kg and 1.0 g/kg), once a day for continuous 28 days. The effects of Rheum tanguticum planted in Gannan(RT-GN), Rheum tanguticum planted in Xinin(RT-XN) and Rheum plmatum planted in Lixian(RP-LX) were evaluated through detecting the parameters of blood lipids, blood viscosity and antioxidant system. Results: T-GN, RT-XN and RP-LX in the range of 1.0～3.0 g/kg could decrease the blood levels of total cholesterol (TC), triglyceride (TG), low density lipoprotein (LDL) and malonaldehyde (MDA) in blood. Besides, they could reduce blood viscosity, increase high density lipoprotein (HDL) level and upregulate the activity of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px). Interestingly, their effects on blood viscosity was obviously in a dose dependent manner. In addition, the effects of RT-GN on LDL, MDA and blood viscosity were not significantly different from those of RT-XN and better than those of RP-LX. Conclusion: The RT has better hypolipidemic effects than the RP, but RT-GN and RT-XN are not different from the above effects.

Rhubarbs from different regions; hypolipidemic effects; blood viscosity; antioxidant; rats

甘南州科技開發(fā)交流中心基金項(xiàng)目(BH2012-H01)

2014-09-28

2015-02-25

R285.5

A

1000-6834(2015)03-278-04

10.13459/j.cnki.cjap.2015.03.023

△【通訊作者】Tel: 0931-8765395, 0931-8765394; E-mail: wzw0933@126.com, guomeig@sina.com