• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    原花青素對鎘引起的雞胚睪丸氧化損傷的緩解作用

    2015-06-07 10:06:08侯福銀宓君鵬劉興廷李劍米玉玲張才喬
    生態(tài)毒理學報 2015年4期
    關鍵詞:孵化率內質網(wǎng)花青素

    侯福銀,宓君鵬,劉興廷,李劍,米玉玲,張才喬

    浙江大學動物科學學院,杭州 310058

    原花青素對鎘引起的雞胚睪丸氧化損傷的緩解作用

    侯福銀,宓君鵬,劉興廷,李劍,米玉玲*,張才喬#

    浙江大學動物科學學院,杭州 310058

    為探索原花青素對鎘引起的雞胚睪丸氧化損傷的緩解作用,本實驗設置了對照組、鎘、葡萄籽提取物原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)和鎘+GSPE組,在胚胎期第6.5天(E6.5)注射0.05 mg·kg-1鎘或2.5 mg·kg-1GSPE,統(tǒng)計孵化率和睪丸指數(shù),并在E17.5檢測睪丸形態(tài)、氧化指標、細胞凋亡和內質網(wǎng)應激相關基因的表達情況。結果表明:與對照組相比,鎘處理組孵化率和睪丸指數(shù)均顯著降低;睪丸組織結構出現(xiàn)了細胞核固縮、空泡化和染色質周緣化等變化,過氧化氫和丙二醛水平升高、超氧化物歧化酶活性顯著降低、谷胱甘肽含量明顯減少,凋亡細胞顯著增多;睪丸中抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表達水平下降,同時促凋亡基因Caspase3和內質網(wǎng)應激相關基因(XBP-1和HO-1)mRNA表達水平顯著上升。然而,GSPE聯(lián)合處理,明顯緩解了鎘引起的睪丸損傷,使孵化率和睪丸指數(shù)回升,抗氧化水平和內質網(wǎng)應激得到改善,凋亡細胞顯著減少,睪丸形態(tài)趨于正常。結果表明:GSPE可通過其抗氧化作用降低XBP-1相關的內質網(wǎng)應激基因的表達,從而緩解鎘引起的雞胚睪丸生殖毒性。

    鎘;雞胚;睪丸;氧化損傷;原花青素

    鎘(Cadmium,Cd)是一種人體非必需的二價重金屬離子,隨著工農業(yè)的迅速發(fā)展,其廣泛應用于電鍍、核工業(yè)和蓄電池等生產中,極易造成生態(tài)環(huán)境的污染[1-3]。同時,Cd易通過飲水、吸煙、食物和空氣進入人和動物體內,繼而蓄積在肝臟、腎臟和睪丸等組織器官,造成不同程度損害[4-9]。近些年,有關職業(yè)接觸引發(fā)的鎘疾病、環(huán)境污染導致的鎘超標和鎘大米等事件,引起了人們的廣泛重視。越來越多的研究表明,Cd能夠引起睪丸發(fā)育異常,生精作用紊亂甚至不育[10]。并且,Cd可顯著降低雞胚抗氧化水平和孵化率[11]。有學者認為,內質網(wǎng)應激和線粒體信號通路共同作用,調節(jié)Cd引起的睪丸生殖細胞凋亡[12]。我們通過預實驗發(fā)現(xiàn)Cd能夠引起雞胚睪丸氧化損傷,但其具體的生殖毒性機制和防御措施仍不清楚。

    葡萄籽提取物原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)作為一種天然的食物源性抗氧化劑,可以有效清除自由基,具有抗癌、抗炎、抗氧化和抗凋亡等生物學活性[13]。研究報道,GSPE能夠通過抵抗機體的氧化應激和細胞凋亡,緩解硫酸鎳導致的大鼠睪丸氧化損傷[14],兔類固醇性骨壞死[15]和糖尿病大鼠肝臟的組織損傷[16]等,說明了GSPE本身具有良好的抗氧化作用。此外,褪黑素[17]、鋅[18]和α-生育酚(維生素E)[19]等也有一定的緩解鎘引起的機體氧化損傷的作用,但日常生活中攝取的含量遠不能達到防治Cd致毒的效果。因此,探索Cd的致毒機制和有效的防御措施十分必要,而食源性GSPE是否對其有較好的緩解作用及其調節(jié)機制尚不清楚,值得進一步研究。

    因此,本試驗選用海蘭雞胚作為試驗動物模型,使用一定劑量的Cd和適量GSPE,通過蘇木素-伊紅染色、生化檢測、TUNEL細胞凋亡染色以及熒光定量PCR等方法,檢測Cd對雞胚睪丸損傷的毒性機制,并探索GSPE的緩解效果。這些結果將有助于提高人們對生殖健康和重金屬Cd毒理學的認識,為緩解其毒性的進一步研究提供試驗依據(jù)。

    1 材料與方法(Materials and methods)

    1.1 試驗材料與試劑

    1.1.1 主要儀器及試劑

    儀器:輪轉式石蠟切片機(HM340E,MICROM,German),石蠟組織包埋機(EC-350,MICROM,German),Real-time PCR 擴增儀(ABI7500,USA),電子天平(AB104-N,Mettler-toledo 公司),激光共聚焦顯微鏡(FV1000,Olympus,Japan),分光光度計(OD-1000,Thermo,USA),旋轉孵化箱(Victoria SRL,Italy),顯微鏡(Eclipse 80i,Nikon,Japan)。

    試劑:氯化鎘(CdCl2,99.99%,C116344,Aladdin,中國),原花青素(GSPE,純度≥ 95%,天津尖峰天然產物研究開發(fā)有限公司,中國),反轉錄試劑盒(Thermo,Lithuania),SYBR green RT-PCR kit(Takara,Japan),DAPI(300 nM,Sigma Aldrich),生化檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所,中國),TUNEL細胞凋亡試劑盒(A112-03,南京諾唯贊生物科技有限公司,中國)。

    1.1.2 試驗動物及樣品采集

    試驗雞胚:海蘭白雞種蛋(59.8±2.5) g,購自杭州市蛋雞試驗場),在旋轉孵化箱中38.5 ℃和60%濕度的正常條件下孵化至所需的胚齡,在胚胎期第6.5 d(E6.5,即性腺分化后)注射0.05 mg·kg-1Cd或2.5 mg·kg-1GSPE,注射方法參照前人研究[18],對照組注射0.9%的滅菌生理鹽水,即分為對照組、Cd組、GSPE組和GSPE+Cd組。出殼時統(tǒng)計孵化率和睪丸指數(shù),并對發(fā)育至出現(xiàn)典型曲精細管、精原細胞分層排布于管腔的E17.5的睪丸進行形態(tài)學觀察、生化檢測、凋亡染色和熒光定量PCR檢測。

    1.2 試驗方法

    1.2.1 孵化率和睪丸指數(shù)

    對剛出殼小雞進行孵化率的統(tǒng)計,同時,取材測睪丸指數(shù)(睪丸重/體重,mg·g-1)。

    1.2.2 蘇木素-伊紅染色

    4%中性多聚甲醛固定組織24 h,自來水緩慢沖洗過夜,70%~100%梯度酒精脫水,二甲苯:酒精(1:1)和二甲苯透明、浸蠟2 h后即可包埋,制作厚度為5 μm的石蠟切片,40 ℃水浴展片,60 ℃烘干2 h,100%~70%逐級酒精脫蠟后,用蘇木素和伊紅染色,二甲苯透明之后即可封片,在光學顯微鏡下,進行對組織的切片拍照和形態(tài)學觀察分析。

    1.2.3 生化指標的檢測

    取新鮮睪丸組織0.1~0.2 g放置于預冷的玻璃勻漿管內,按重量體積1:9的比例加入預冷的0.9%生理鹽水,使用超聲勻漿器進行研磨,當細胞完全破碎后將勻漿吸出,于4 000 r·min-1離心15 min,取出上清用于各項生化指標的檢測,試劑盒檢測丙二醛(MDA)、過氧化氫(H2O2)、谷胱甘肽(GSH)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。

    1.2.4 TUNEL染色

    石蠟切片置于二甲苯中15 min,酒精逐級浸水,PBS清洗3次,每張片子滴加100 μL終濃度為20 μg·mL-1的Proteinase K工作液,室溫孵育10 min。配制TUNEL檢測液:按比例,每個樣品分別取10 μL 5×Reaction Buffer,38 μL ddH2O,1 μL FITC-dUTP和1 μL TdT酶,混勻。在樣品上加入50 μL TUNEL檢測液,37 ℃避光孵育60 min;DAPI染核8 min,封片,在激光共聚焦顯微鏡下觀察、拍照并統(tǒng)計TUNEL陽性細胞。

    1.2.5 RNA提取、cDNA合成及熒光定量PCR

    根據(jù)Trizol說明書,提取睪丸組織的總RNA,提取的RNA立即用于反轉錄以免降解。cDNA的合成:加入已純化的2 μg總RNA(具體體積根據(jù)測得的總RNA濃度計算),1 μL Random引物,加水(nuclease-free)補足至12 μL,稍離心,于65 ℃反應5 min,之后,立即放置冰上冷卻5 min至室溫。然后,每孔加入5×緩沖液4 μL,RNA酶抑制劑1 μL,10 mmol·L-1dNTP 混合物2 μL,反轉錄酶(200 U·μL-1)1 μL至20 μL體系,輕柔混勻離心,置于42 ℃,60 min溫育;70 ℃,5 min終止反應。熒光定量PCR的擴增:將cDNA模板稀釋20倍,反應體系為20 μL,即加入SYBR Premix Ex Taq (2X) 10.0 μL,PCR 上下游引物各0.4 μL,ROX Reference Dye II(50x) 0.4 μL,DNA模板2.0 μL和ddH2O 6.8 μL。反應條件是95 ℃ 10 s;95 ℃ 5 s和 60 ℃ 34 s 40個循環(huán),最后95 ℃15 s,60 ℃ 1 min,95 ℃ 15 s終止反應。表1為試驗中所用引物序列。

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    所得數(shù)據(jù)采用SAS(9.0 版本)軟件進行方差分析和Duncan氏多重比較,用平均值±標準誤差表示,P<0.05表示差異顯著。

    2 結果(Results)

    2.1 原花青素和鎘對孵化率和睪丸指數(shù)的影響

    與對照組相比,Cd處理組孵化率和睪丸指數(shù)(睪丸/體重)均顯著性降低(P<0.05),GSPE聯(lián)合后,雞胚孵化率和睪丸指數(shù)有了明顯升高(P<0.05),見表2。

    表1 Real-time PCR 所用引物Table 1 Primers for real-time PCR analyses

    注: 睪丸指數(shù)為睪丸重/體重(mg·g-1),n=100,同列不同的字母表示差異顯著(P<0.05)。Note: Testis index is testis weight/body weight (mg·g-1),n=100,a,bvalues with different letters in the same column were statistically different ( P<0.05).

    2.2 原花青素和鎘引起雞胚睪丸形態(tài)的變化

    圖1顯示GSPE組和對照組睪丸細胞形態(tài)正常,然而Cd處理組睪丸生精上皮遭到一定的破壞,核發(fā)生固縮,染色質周緣化,間質出現(xiàn)空泡狀變化;但是,Cd +GSPE組從形態(tài)學上明顯緩解了Cd導致的睪丸組織損傷。

    2.3 原花青素和鎘對睪丸氧化和抗氧化系統(tǒng)的影響

    與對照組相比,H2O2和MDA含量均在Cd處理組明顯升高 (P<0.05),Cd處理組SOD活性和GSH含量都顯著降低 (P<0.05);GSPE組與對照組沒有明顯的區(qū)別;然而,Cd + GSPE組與Cd處理組相比,明顯降低了MDA的含量 (P<0.05),H2O2的含量也略有下降趨勢,但差異不顯著 (P>0.05),同時,顯著提高了SOD活性和GSH含量 (P<0.05),見表3。

    2.4 原花青素和鎘對睪丸細胞凋亡的影響

    圖2顯示,與對照組相比,鎘處理組TUNEL陽性細胞明顯增多(P<0.05),GSPE聯(lián)合后,GSPE + Cd組與Cd處理組相比,TUNEL陽性細胞數(shù)明顯減少(P<0.05),GSPE單獨處理組與對照組無顯著差別。

    2.5 原花青素和鎘對細胞凋亡和內質網(wǎng)應激相關基因表達的影響

    圖3為各組雞胚睪丸的凋亡相關基因Bcl-2和Caspase3,內質網(wǎng)應激相關基因HO-1和XBP-1 mRNA的相對表達量。與對照組相比,鎘處理組Bcl-2顯著性降低(P<0.05,圖3A),Caspase3、HO-1和XBP-1 mRNA明顯升高(P<0.05,圖3B、3C和3D)。然而,與Cd處理組相比,GSPE + Cd組中Bcl-2顯著性升高(P<0.05),同時,Caspase3、HO-1和XBP-1 mRNA表達水平明顯降低(P<0.05)。

    3 討論(Discussion)

    Cd作為現(xiàn)代工業(yè)和農業(yè)生產中危害較大的環(huán)境污染物之一,對人體和動物的健康造成嚴重威脅。有研究表明,Cd暴露能夠導致發(fā)育階段的胚胎生長緩慢或畸形[20]。Cd的劑量超過1微克/雞胚時,隨著劑量的增加孵化率顯著降低[18]。2 mg·kg-1Cd暴露的小鼠睪丸發(fā)育異常,睪丸重量明顯低于對照組[21]。本試驗結果顯示,Cd處理組雞胚孵化率和睪丸重量均顯著性下降,同時,聯(lián)合GSPE促進了睪丸組織的生長發(fā)育。形態(tài)學上,HE染色結果表明鎘引起了睪丸生殖上皮損傷,空泡化增多、細胞排列散亂等。GSPE + Cd組細胞形態(tài)與Cd處理組相比,趨于正常,生殖上皮較完整,細胞排列均勻,明顯緩解了Cd的致毒作用,這一結果與黨衛(wèi)紅[22]研究的水果蔬菜中抗氧化成分對Cd損傷的營養(yǎng)干預作用一致。可能的原因是,GSPE發(fā)揮了強有效的自由基清除功能,但GSPE的修復效果也會受到Cd的暴露劑量、毒性作用時間以及動物年齡等因素的影響。

    表3 原花青素和鎘對雞胚睪丸氧化和抗氧化系統(tǒng)的影響Table 3 Effects of GSPE and Cd on oxidation and antioxidant system in chicken testis

    注: n=110,同列不同的字母表示差異顯著(P<0.05)。

    Note: n=110,a,bvalues with different letters in the same column were statistically different ( P<0.05).

    圖1 GSPE和Cd對睪丸形態(tài)學的影響 A:對照組,B: Cd組,C: GSPE組,D: Cd + GSPE組。

    圖2 GSPE和Cd對睪丸細胞凋亡的影響

    圖3 GSPE和Cd對睪丸細胞凋亡與內質網(wǎng)應激相關基因表達的影響 A: Bcl-2,B: Caspase3,C: HO-1,D: XBP-1

    當內分泌干擾毒物進入機體后,往往引起自由基產生過多,組織內抗氧化體系耗竭,從而導致組織、器官損傷。為維護機體自身功能的正常運轉和健康狀態(tài),體內有許多抗氧化物質如還原型GSH、維生素E、維生素C和各種抗氧化酶,如GSH-Px、SOD等,以抵抗各種活性氧和自由基產生的氧化損傷[4-7]。同時,MDA含量的測定,在一定程度上可以反映脂質過氧化損傷的程度,在外源性物質的刺激下,機體MDA和H2O2含量將會升高。本試驗結果顯示,Cd暴露導致了MDA和H2O2含量顯著升高,SOD的活性明顯降低,GSH含量也有一定的下降,繼而導致凋亡細胞的增多,這一結果與Malgorzata等[11]發(fā)現(xiàn)的鎘引起新生雛雞血清抗氧化水平的變化和Bu等[23]研究的鎘誘導小鼠睪丸損傷結果一致。然而,在聯(lián)合GSPE后,睪丸的抗氧化水平有了顯著的恢復,同時,鎘誘導的凋亡細胞數(shù)量也有了明顯減少。GSPE良好的緩解效果與另一種天然抗氧化產物槲皮素緩解Cd引起的睪丸損傷作用類似[23]。我們的研究結果表明,在本試驗Cd暴露的劑量下,GSPE有效緩解了Cd引起的雞胚睪丸氧化損傷和細胞凋亡。

    內質網(wǎng)應激在機體氧化應激和細胞凋亡過程中發(fā)揮著重要的調節(jié)作用。近年來,研究發(fā)現(xiàn)鎘暴露引起的氧化應激過程中,受到了內質網(wǎng)應激信號通路的調控[24],同時,Ji等[25]發(fā)現(xiàn)N-乙酰半胱氨酸可通過抑制內質網(wǎng)應激,有效緩解了Cd誘導的睪丸生殖細胞凋亡。此外,內質網(wǎng)應激往往激活未折疊蛋白反應,其中XBP -1轉錄因子具有重要的調節(jié)作用。本試驗也發(fā)現(xiàn)在Cd暴露的雞胚睪丸組織中,細胞凋亡和內質網(wǎng)應激相關基因的表達變化密切相關,Cd處理組抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表達明顯降低,促凋亡基因Caspase3 mRNA表達水平顯著升高;內質網(wǎng)應激XBP -1和HO -1 mRNA的表達水平同樣明顯升高。以上結果進一步表明,內質網(wǎng)應激在Cd導致的雞胚睪丸細胞凋亡的過程發(fā)揮著重要作用。而且,聯(lián)合GSPE后,GSPE +Cd組明顯緩解了Cd誘導的細胞凋亡和內質網(wǎng)應激。另外,研究發(fā)現(xiàn),抗壞血酸(維生素C)可以一定程度上緩解鎘引起的內質網(wǎng)應激和睪丸損傷[26],這與本試驗結果類似。因此,GSPE可能通過XBP-1相關的內質網(wǎng)應激信號通路,發(fā)揮抗氧化的功能,緩解了氧化損傷,其具體作用機制還有待于進一步研究。

    [1] Nordberg G F.Historical perspectives on cadmium toxicology [J].Toxicology and Applied Pharmacology,2009,238(3): 192-200

    [2] Jarup L,Akesson A.Current status of cadmium as an environmental health problem [J].Toxicology and Applied Pharmacology,2009,238: 201-208

    [3] 趙艷芳,吳繼法,翟毓秀,等.鎘脅迫對不同鎘富集能力海水養(yǎng)殖貝類(扇貝和菲律賓蛤仔) 抗氧化能力的影響[J].生態(tài)毒理學報,2014,9(2): 224-232

    Zhao Y F,Wu J F,Zhai Y X,et al.Effects of cadmium stress on the antioxidant responses in two biovalves (the scallop Chlamys farreri and the clam Ruditapes philippinarum) with different abilities to accumulate cadmium [J].Asian Journal of Ecotoxicology,2014,9(2): 224-232 (in Chinese)

    [4] Amamou F,Nemmiche S,Meziane R K,et al.Protective effect of olive oil and colocynth oil against cadmium-induced oxidative stress in the liver of Wistar rats [J].Food and Chemical Toxicology,2015,78: 177-184

    [5] 余娜,鐘志勇,唐小江,等.鎘引起腎臟毒性的細胞凋亡通路[J].生態(tài)毒理學報,2014,9(3): 407-412

    Yu N,Zhong Z Y,Tang X J,et al.Apoptotic pathways for cadmium-induced renal toxicity [J].Asian Journal of Ecotoxicology,2014,9(3): 407-412 (in Chinese)

    [6] Soodvilai S,Nantavishit J,Muanprasat C,et al.Renal organic cation transporters mediated cadmium-induced nephrotoxicity [J].Toxicology Letters,2011,204(1): 38-42

    [7] Niknafs B,Salehnia M,Kamkar M.Induction and determination of apoptotic and necrotic cell death by cadmium chloride in testis tissue of mouse [J].Journal of Reproduction & Infertility,2015,16(1): 24-29

    [8] Weng S,Wang W,Li Y,et al.Continuous cadmium exposure from weaning to maturity induces downregulation of ovarian follicle development-related SCF/c-kit gene expression and the corresponding changes of DNA methylation/micro RNA pattern [J].Toxicology Letter,2014,225: 367-377

    [9] Soares M B,Izaguirry A P,Vargas L M,et al.Catechins are not major components responsible for the beneficial effect of Camellia sinensis on the ovarian delta-ALA-D activity inhibited by cadmium [J].Food and Chemical Toxicology,2013,55: 463-469.

    [10] Zhang X,Lui W Y.Dysregulation of nectin-2 in the testicular cells: An explanation of cadmium-induced male infertility [J].Biochimica et Biophysica Acta - Gene Regulatory Mechanisms,2014,1839(9): 873-888

    [11] Dzugan M,Lis M,Droba M,et al.Effect of cadmium injected in ovo on hatching results and the activity of plasma hydrolytic enzymes in newly hatched chicks [J].Acta Veterinaria Hungarica,2011,59(3): 337 -347

    [12] Ji Y L,Wang H,Zhao X F,et al.Crosstalk between endoplasmic reticulum stress and mitochondrial pathway mediates cadmium-induced germ cell apoptosis in testes [J].Toxicological Sciences,2011,124(2): 446-459

    [13] 苗智如,袁夏,廖麗娜,等.葡萄籽提取物原花青素磷脂復合物抗氧化功能的實驗研究[J].藥學實踐雜志,2013,31(5): 362-365

    Miao Z R,Yuan X,Liao L N,et al.Experimental study on anti-oxidative effect of proanthocyanidins phospholipid complex in grape seed [J].Journal of Pharmaceutical Practice,2013,31(5): 362-365 (in Chinese)

    [14] Su L,Deng Y,Zhang Y,et al.Protective effects of grape seed procyanidin extract against nickel sulfate-induced apoptosis and oxidative stress in rat testes [J].Toxicology Mechanisms and Methods,2011,21(6): 487- 494

    [15] Song Q,Shi Z,Bi W,et al.Beneficial effect of grape seed proanthocyanidin extract in rabbits with steroid-induced osteonecrosis via protecting against oxidative stress and apoptosis [J].Journal of Orthopaedic Science,2015,20(1): 196-204

    [16] Mansouri E,Khorsandi L,Abedi H A.Antioxidant effects of proanthocyanidin from grape seed on hepatic tissue injury in diabetic rats [J].Iranian Journal of Basic Medical Sciences,2014,17: 460-464

    [17] Ji Y L,Wang H,Meng C,et al.Melatonin alleviates cadmium-induced cellular stress and germ cell apoptosis in testes [J].Journal of Pineal Research,2012,52: 71-79

    [18] Dzugan M,Lis M W,Droba M,et al.Protective effect of zinc on cadmium embryotoxicity and antioxidant status of blood plasma in newly hatched chicks [J].Journal of Environmental Science and Health Part A,Toxic/Hazardous Substances & Environmental Engineering,2012,47(9): 1288-1293

    [19] Yang H S,Han D K,Kim J R,et al.Effects of alpha-tocopherol on cadmium-induced toxicity in rat testis and spermatogenesis [J].Journal of Korean Medical Science,2006,21: 445-451

    [20] Thompson J,Bannigan J.Cadmium: Toxic effects on the reproductive system and the embryo [J].Reproductive Toxicology,2008,25: 304-315

    [21] 金龍金,張軍明,樓哲豐,等.氯化鎘對雄性小鼠的生殖毒性作用[J].中國男科學雜志,2004,18(1): 15-18

    Jin L J,Zhang J M,Lou Z F,et al.Toxic effects of cadmium chloride on the reproductive function and reproductive organs of male mice [J].Chinese Journal of Andrology,2004,18(1): 15-18 (in Chinese)

    [22] 黨衛(wèi)紅.鎘的毒性及鎘損害的營養(yǎng)干預[J].鄭州輕工業(yè)學院學報,2008,23(4): 10-12

    Dang W H.Toxicity of cadmium and nutrition intervention against cadmium poisoning [J].Journal of Zhengzhou University of Light Indusrty,2008,23(4): 10-12 (in Chinese)[23] Bu T L,Mi Y L,Zeng W D,et al.Protective effect of quercetin on cadmium-induced oxidative toxicity on germ cells in male mice [J].Anatomical Record,2011,294: 520-526

    [24] Kitamura M,Hiramatsu N.The oxidative stress: Endoplasmic reticulum stress axis in cadmium toxicity [J].Biometals,2010,23(5): 941-950

    [25] Ji Y L,Wang H,Zhang C,et al.N-acetylcysteine protects against cadmium-induced germ cell apoptosis by inhibiting endoplasmic reticulum stress in testes [J].Asian Journal of Andrology,2013,20: 290-296

    [26] Ji Y L,Wang Z,Wang H,et al.Ascorbic acid protects against cadmium-induced endoplasmic reticulum stress and germ cell apoptosis in testes [J].Reproductive Toxicology,2012,34: 357-363

    Ameliorative Effect of Grape Seed Proanthocyanidin Extract on Cadmium-induced Testicular Oxidative Damage in Chicken Embryos

    Hou Fuyin,Mi Junpeng,Liu Xingting,Li Jian,Mi Yuling*,Zhang Caiqiao#

    College of Animal Sciences,Zhejiang University,Hangzhou 310058,China

    9 March 2015 accepted 13 May 2015

    This study was conducted to explore the ameliorative effect of grape seed proanthocyanidin extract (GSPE) on cadmium (Cd)-induced testicular oxidative damage in chicken embryos.Embryos of 6.5 days (E6.5) were injected with or without Cd (0.05 mg·kg-1) in the presence or absence of GSPE (2.5 mg·kg-1),then the hatchability and testis index were made statistically.Additionally,testicular morphology,parameters related to oxidative damage,apoptosis and the expression of endoplasmic reticulum (ER) stress related genes (XBP-1 and HO-1) mRNA were all measured at E17.5.The results showed that Cd exposure significantly reduced the hatchability and testis index,with the lesions of testis characterized by karyopyknosis,vacuolation and chromatin margination,compared with the control group.Cd exposure resulted in increased H2O2and malondialdehyde level,reduced superoxide dismutase activity and glutathione level,enhanced apoptotic cells in the testis as well.Meanwhile,Cd exposure also down-regulated Bcl -2 mRNA level,up-regulated the expression of caspase3,XBP -1 and HO-1 mRNA.However,GSPE supplementation attenuated the Cd-induced oxidative damage,along with the increase of hatchability and testis index,the improvement of antioxidant level and ER stress,the marked decrease of apoptotic cells,and the testicular morphology tended to be normal.In conclusion,GSPE via the antioxidative ability could ameliorate the Cd-induced testicular reproductive toxicity in chicken embryos by decreasing the expression of XBP-1 related ER stress genes mRNA.

    cadmium; chicken embryo; testis; oxidative damage; proanthocyanidin

    教育部新世紀項目(NCET-13-0519);國家自然科學基金項目(31001041,31472160)

    侯福銀(1989-),女,碩士研究生,研究方向為環(huán)境毒理與生殖內分泌學,E-mail: houfuyin2008@126.com;

    *通訊作者(Corresponding author),E-mail: yulingmi@zju.edu.cn

    10.7524/AJE.1673-5897.20150309008

    2015-03-09 錄用日期:2015-05-13

    1673-5897(2015)4-138-08

    X171.5

    A

    米玉玲(1975-),女,副研究員,博士,博導,主要從事環(huán)境毒理學、動物生殖內分泌學方面的研究,發(fā)表學術論文40余篇。

    侯福銀,宓君鵬,劉興廷,等.原花青素對鎘引起的雞胚睪丸氧化損傷的緩解作用[J].生態(tài)毒理學報,2015,10(4): 138-145

    Hou F Y,Mi J P,Liu X T,et al.Ameliorative effect of grape seed proanthocyanidin extract on cadmium-induced testicular oxidative damage in chicken embryos [J].Asian Journal of Ecotoxicology,2015,10(4): 138-145 (in Chinese)

    張才喬(1965-),教授,博士,博導,主要從事卵泡發(fā)育和閉鎖調節(jié)、環(huán)境內分泌干擾物生殖毒理相關研究,發(fā)表學術論文100余篇。

    猜你喜歡
    孵化率內質網(wǎng)花青素
    蘇豪×鐘曄(抗)正交秋用種孵化率偏低的原因分析
    內質網(wǎng)自噬及其與疾病的關系研究進展
    提高家禽孵化率的有效措施
    憤怒誘導大鼠肝損傷中內質網(wǎng)應激相關蛋白的表達
    秋制雄蠶雜交種“秋·華×平30”的孵化率調查*
    蠶桑通報(2020年3期)2021-01-07 03:05:20
    原花青素B2通過Akt/FoxO4通路拮抗內皮細胞衰老的實驗研究
    花青素對非小細胞肺癌組織細胞GST-π表達的影響
    中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
    LPS誘導大鼠肺泡上皮細胞RLE-6 TN內質網(wǎng)應激及凋亡研究
    山楸梅漿果中花青素提取方法的優(yōu)化和測定
    中成藥(2016年8期)2016-05-17 06:08:41
    原花青素對腦缺血再灌注損傷后腸道功能的保護作用
    少妇的逼好多水| 日韩大尺度精品在线看网址| 日本熟妇午夜| 国内精品美女久久久久久| 亚洲精品成人久久久久久| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 成人无遮挡网站| 精品日产1卡2卡| 91在线观看av| 中文字幕av成人在线电影| 高清日韩中文字幕在线| 观看美女的网站| 免费在线观看成人毛片| 日日夜夜操网爽| 动漫黄色视频在线观看| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 久久久久性生活片| 赤兔流量卡办理| 悠悠久久av| 久久久成人免费电影| 免费人成视频x8x8入口观看| 又爽又黄无遮挡网站| 午夜日韩欧美国产| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲五月天丁香| 免费在线观看成人毛片| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 永久网站在线| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲精华国产精华精| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久久久久久久久成人| 999久久久精品免费观看国产| 99热只有精品国产| 男女视频在线观看网站免费| 老司机福利观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 亚洲无线在线观看| 午夜爱爱视频在线播放| 久久久精品大字幕| 国产午夜福利久久久久久| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 亚洲av熟女| 亚洲精品456在线播放app | 欧美一区二区亚洲| 亚洲人成伊人成综合网2020| 欧美潮喷喷水| 三级国产精品欧美在线观看| 亚洲av美国av| 亚洲欧美清纯卡通| 国产大屁股一区二区在线视频| av天堂中文字幕网| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 久久国内精品自在自线图片| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 一进一出好大好爽视频| 久久午夜福利片| 高清在线国产一区| 一个人看的www免费观看视频| 色噜噜av男人的天堂激情| 日日干狠狠操夜夜爽| 老司机福利观看| 白带黄色成豆腐渣| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 69av精品久久久久久| 亚洲av不卡在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 男人舔女人下体高潮全视频| 欧美zozozo另类| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲 国产 在线| 极品教师在线免费播放| 欧美色视频一区免费| 九九爱精品视频在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 天天一区二区日本电影三级| av天堂在线播放| 国产黄a三级三级三级人| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产探花极品一区二区| 最好的美女福利视频网| 亚洲av成人av| a级毛片免费高清观看在线播放| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲七黄色美女视频| 欧美色视频一区免费| 可以在线观看毛片的网站| 国产精品国产高清国产av| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产一区二区在线观看日韩| 有码 亚洲区| 亚洲无线在线观看| 国产精品久久久久久av不卡| 无人区码免费观看不卡| 国产久久久一区二区三区| 亚洲在线观看片| 色综合婷婷激情| 一级黄色大片毛片| 大型黄色视频在线免费观看| 成人国产一区最新在线观看| 婷婷精品国产亚洲av在线| 久久人人爽人人爽人人片va| 嫩草影院新地址| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲av电影不卡..在线观看| 日日夜夜操网爽| 欧美不卡视频在线免费观看| 亚洲中文字幕日韩| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 欧美又色又爽又黄视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 欧美日韩乱码在线| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久人妻av系列| 老司机深夜福利视频在线观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 日韩精品有码人妻一区| 极品教师在线免费播放| av女优亚洲男人天堂| 免费黄网站久久成人精品| 久久久久久久久久成人| 国产av在哪里看| 国产av不卡久久| 欧美激情在线99| 国内精品宾馆在线| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 91av网一区二区| 国产亚洲91精品色在线| 成年人黄色毛片网站| 欧美高清性xxxxhd video| 在线国产一区二区在线| 日本黄色视频三级网站网址| 国产精品无大码| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 美女xxoo啪啪120秒动态图| a在线观看视频网站| 成熟少妇高潮喷水视频| 免费人成在线观看视频色| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产亚洲精品综合一区在线观看| av.在线天堂| 国内揄拍国产精品人妻在线| 一级毛片久久久久久久久女| 好男人在线观看高清免费视频| 高清在线国产一区| 不卡视频在线观看欧美| 日韩一本色道免费dvd| 久久久久久伊人网av| 在线观看美女被高潮喷水网站| 午夜爱爱视频在线播放| 色av中文字幕| 中文字幕高清在线视频| 国产午夜福利久久久久久| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产亚洲精品久久久com| 老司机福利观看| 久久精品国产亚洲av天美| 国产精品电影一区二区三区| 免费人成在线观看视频色| 不卡视频在线观看欧美| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲av美国av| 成人无遮挡网站| 亚洲男人的天堂狠狠| 国产午夜精品论理片| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产成年人精品一区二区| 中亚洲国语对白在线视频| 国产69精品久久久久777片| 国产探花在线观看一区二区| 麻豆成人av在线观看| 一a级毛片在线观看| 欧美日韩乱码在线| 久久99热6这里只有精品| 久久久久久久久中文| 免费在线观看影片大全网站| 久久精品国产清高在天天线| 久久6这里有精品| 麻豆av噜噜一区二区三区| 欧美潮喷喷水| 亚洲成人久久性| 丰满的人妻完整版| 亚洲黑人精品在线| 久久草成人影院| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产高清视频在线观看网站| 97热精品久久久久久| 午夜福利成人在线免费观看| 国产午夜精品论理片| 男人舔奶头视频| 亚洲内射少妇av| 久久九九热精品免费| 99久久成人亚洲精品观看| 国内精品一区二区在线观看| 日韩欧美精品v在线| or卡值多少钱| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 99热精品在线国产| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚州av有码| 桃红色精品国产亚洲av| 欧美国产日韩亚洲一区| 色综合色国产| 日韩中字成人| 国产伦人伦偷精品视频| 国产69精品久久久久777片| 欧美高清成人免费视频www| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲av免费高清在线观看| 国产高清三级在线| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 香蕉av资源在线| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲美女搞黄在线观看 | 国产av麻豆久久久久久久| 12—13女人毛片做爰片一| 国产黄a三级三级三级人| 精品欧美国产一区二区三| av在线老鸭窝| 日本成人三级电影网站| 精品一区二区免费观看| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产黄片美女视频| 热99在线观看视频| 夜夜爽天天搞| 国产精品久久电影中文字幕| 伦理电影大哥的女人| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 亚洲精品456在线播放app | 91在线精品国自产拍蜜月| 国产单亲对白刺激| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 99精品在免费线老司机午夜| 永久网站在线| 精品久久久久久久久av| 亚洲成人久久爱视频| 午夜视频国产福利| 中文字幕av成人在线电影| 久久久精品欧美日韩精品| 麻豆av噜噜一区二区三区| 内射极品少妇av片p| 国产真实伦视频高清在线观看 | 亚洲,欧美,日韩| 国产精品福利在线免费观看| av在线天堂中文字幕| 国产亚洲欧美98| 国产探花极品一区二区| eeuss影院久久| 免费搜索国产男女视频| 亚洲avbb在线观看| 九九在线视频观看精品| 欧美黑人欧美精品刺激| 久久久国产成人免费| 亚洲中文日韩欧美视频| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国内精品一区二区在线观看| 男女下面进入的视频免费午夜| 性插视频无遮挡在线免费观看| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 看黄色毛片网站| 亚洲美女黄片视频| 一夜夜www| 久久精品国产亚洲av天美| 欧美日韩综合久久久久久 | 国产欧美日韩一区二区精品| 中文字幕久久专区| 亚洲精品亚洲一区二区| 精品久久国产蜜桃| 热99re8久久精品国产| 日韩欧美在线乱码| 亚洲精品成人久久久久久| 男女视频在线观看网站免费| 真实男女啪啪啪动态图| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 最近视频中文字幕2019在线8| 成人二区视频| 婷婷精品国产亚洲av| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产精华一区二区三区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 此物有八面人人有两片| 日本免费a在线| 成人亚洲精品av一区二区| 日本成人三级电影网站| 欧美精品国产亚洲| 日本黄色片子视频| av福利片在线观看| 亚洲自偷自拍三级| 免费在线观看成人毛片| 日本熟妇午夜| 他把我摸到了高潮在线观看| 日本欧美国产在线视频| 国产精品人妻久久久久久| 欧美日韩精品成人综合77777| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产色婷婷99| 久久精品人妻少妇| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲人成网站在线播| 熟女电影av网| 色哟哟·www| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 网址你懂的国产日韩在线| 天堂√8在线中文| 啦啦啦啦在线视频资源| 成年版毛片免费区| 精品午夜福利在线看| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产一区二区在线av高清观看| 三级毛片av免费| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产精品久久久久久精品电影| 麻豆国产av国片精品| 久久久久免费精品人妻一区二区| 婷婷色综合大香蕉| 高清毛片免费观看视频网站| 中文字幕高清在线视频| 精品国产三级普通话版| 麻豆国产av国片精品| 欧美日韩国产亚洲二区| www.色视频.com| 精品一区二区三区视频在线| 伦精品一区二区三区| 99热网站在线观看| 一进一出抽搐动态| 日本熟妇午夜| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲人与动物交配视频| 99久久九九国产精品国产免费| 国产亚洲91精品色在线| 啦啦啦啦在线视频资源| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 女人被狂操c到高潮| av福利片在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 99久国产av精品| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 国内精品宾馆在线| 日韩在线高清观看一区二区三区 | videossex国产| av专区在线播放| 日本色播在线视频| 在现免费观看毛片| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 色5月婷婷丁香| 久久久久久伊人网av| x7x7x7水蜜桃| 国产老妇女一区| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产精品久久电影中文字幕| 1000部很黄的大片| 一区二区三区四区激情视频 | 亚洲av熟女| 99精品在免费线老司机午夜| 色噜噜av男人的天堂激情| 久99久视频精品免费| 亚洲av一区综合| 男女那种视频在线观看| 一级a爱片免费观看的视频| 午夜爱爱视频在线播放| 看十八女毛片水多多多| 免费高清视频大片| 99久国产av精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产成人a区在线观看| 一a级毛片在线观看| 午夜爱爱视频在线播放| 伦理电影大哥的女人| 亚洲自拍偷在线| 日日撸夜夜添| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲中文字幕日韩| 免费观看人在逋| 淫妇啪啪啪对白视频| 精品久久久久久久久亚洲 | 特级一级黄色大片| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲av不卡在线观看| 午夜福利高清视频| 嫩草影院入口| 欧美日本视频| 国产精品免费一区二区三区在线| 桃色一区二区三区在线观看| 国产精品久久久久久久电影| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲三级黄色毛片| eeuss影院久久| 亚洲人与动物交配视频| 一级黄色大片毛片| 免费看美女性在线毛片视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 在线播放国产精品三级| 久久人人精品亚洲av| 久久久色成人| 亚洲经典国产精华液单| or卡值多少钱| 日本一本二区三区精品| 美女免费视频网站| 简卡轻食公司| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日本免费a在线| 日韩一区二区视频免费看| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲欧美激情综合另类| 国产熟女欧美一区二区| 午夜亚洲福利在线播放| 国产欧美日韩精品一区二区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 午夜激情福利司机影院| 网址你懂的国产日韩在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 99热这里只有是精品50| 一区福利在线观看| 国产视频内射| 国产精品一区二区性色av| 亚洲精华国产精华精| 搞女人的毛片| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 一本精品99久久精品77| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲人成伊人成综合网2020| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 91久久精品国产一区二区成人| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 亚洲不卡免费看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 精品一区二区三区视频在线| 九九在线视频观看精品| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲av美国av| 日韩欧美在线二视频| 国产 一区精品| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 毛片一级片免费看久久久久 | 亚洲自拍偷在线| 国产成人av教育| 亚洲一区二区三区色噜噜| 最近最新免费中文字幕在线| 天美传媒精品一区二区| 色av中文字幕| 国产精品综合久久久久久久免费| 最后的刺客免费高清国语| 成人国产综合亚洲| 午夜亚洲福利在线播放| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 精品午夜福利在线看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产一区二区在线观看日韩| 国产单亲对白刺激| 亚洲精品在线观看二区| 精品一区二区三区视频在线| 日韩中文字幕欧美一区二区| 国产伦人伦偷精品视频| 韩国av一区二区三区四区| 国产一区二区在线av高清观看| 国产色爽女视频免费观看| 99热网站在线观看| 校园春色视频在线观看| 深夜a级毛片| 国产日本99.免费观看| 日韩人妻高清精品专区| 久久午夜亚洲精品久久| 国产视频一区二区在线看| 精品久久久久久久末码| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产探花极品一区二区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 中文字幕高清在线视频| 国产一区二区激情短视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久草成人影院| 国产一区二区三区av在线 | 久久精品国产清高在天天线| 九九爱精品视频在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 国产精品伦人一区二区| 美女免费视频网站| 男人狂女人下面高潮的视频| 免费看a级黄色片| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产人妻一区二区三区在| 国产极品精品免费视频能看的| 99riav亚洲国产免费| 女同久久另类99精品国产91| 嫩草影院入口| av福利片在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| h日本视频在线播放| 久久亚洲真实| 一个人看的www免费观看视频| 久久久久久久精品吃奶| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产高清有码在线观看视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产精品乱码一区二三区的特点| 日本免费a在线| 日韩国内少妇激情av| а√天堂www在线а√下载| 国产午夜精品论理片| 一级毛片久久久久久久久女| 尾随美女入室| 18禁在线播放成人免费| 伦精品一区二区三区| 嫩草影院新地址| 国产精品乱码一区二三区的特点| 嫩草影院新地址| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 欧美在线一区亚洲| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 性插视频无遮挡在线免费观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 在线观看午夜福利视频| 亚洲中文字幕日韩| 毛片女人毛片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 成人性生交大片免费视频hd| 日韩人妻高清精品专区| 国产中年淑女户外野战色| 国产男靠女视频免费网站| 干丝袜人妻中文字幕| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美国产日韩亚洲一区| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲av成人av| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲最大成人av| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 一个人免费在线观看电影| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲av二区三区四区| 日韩高清综合在线| 亚洲中文字幕日韩| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 大型黄色视频在线免费观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 午夜福利成人在线免费观看| 久久久成人免费电影| 亚洲av成人精品一区久久| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 成人特级黄色片久久久久久久| 成年人黄色毛片网站| 欧美+亚洲+日韩+国产| 麻豆av噜噜一区二区三区| 亚洲精品亚洲一区二区| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产一区二区在线观看日韩| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚州av有码| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 舔av片在线| 欧美激情久久久久久爽电影| 午夜老司机福利剧场| 永久网站在线| 午夜激情欧美在线| 亚洲欧美日韩无卡精品| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 88av欧美| 午夜视频国产福利| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲av二区三区四区| 亚洲av免费高清在线观看| 波多野结衣高清无吗| 如何舔出高潮| 丰满的人妻完整版| 成人综合一区亚洲| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 91在线观看av| av在线天堂中文字幕| 亚洲最大成人中文| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国内精品久久久久久久电影| 无遮挡黄片免费观看| 久久久久久久久久久丰满 | 精品欧美国产一区二区三| 此物有八面人人有两片| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 久久久久久久久大av| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产精华一区二区三区| 亚洲 国产 在线| 婷婷丁香在线五月| 亚洲精品色激情综合|