不同人群中新型呼腸病毒既往感染狀況調(diào)查

胡燕，貌達(dá)，劉澤，姜棋予，謝國明，白冰珂

·論著·

不同人群中新型呼腸病毒既往感染狀況調(diào)查

胡燕，貌達(dá)，劉澤，姜棋予，謝國明，白冰珂

目的調(diào)查不同人群中新型呼腸病毒既往感染情況。方法選取健康人群以及手足口病、腹瀉、麻疹、乙型肝炎等患者的血清標(biāo)本，利用微量中和試驗檢測其血清標(biāo)本中新型呼腸病毒IgG抗體。結(jié)果中和試驗結(jié)果表明，健康人群中新型呼腸病毒IgG抗體陽性率為29.90%，抗體滴度的中位數(shù)為1∶32；手足口病患者中抗體陽性率為70.83%，抗體滴度的中位數(shù)為1∶64；乙型肝炎和麻疹患者抗體陽性率分別為90.22%和90.70%，抗體滴度的中位數(shù)均為1∶128；腹瀉患者中抗體陽性率和抗體滴度的中位數(shù)均最高，分別為100%和1∶256。結(jié)論健康人群與不同疾病患者中新型呼腸病毒特異性IgG抗體陽性率及滴度存在顯著差異。

呼腸病毒科感染；血清分型；中和試驗

我中心自2003年從嚴(yán)重急性呼吸綜合征（severe acute respiratory syndrome,SARS）患者咽拭子標(biāo)本中分離并鑒定出1株新型呼腸病毒，基因組序列分析表明，病毒的S1基因與原有的哺乳呼腸病毒1、2、3型標(biāo)準(zhǔn)株差異較大，其氨基酸序列與目前已知呼腸病毒的同源性最高只有64%[1]。對S1片段的進(jìn)化樹分析表明，新分離呼腸病毒與2型呼腸病毒的進(jìn)化距離較近，是2型呼腸病毒的一個新的獨立進(jìn)化分支[2-4]。S1基因節(jié)段編碼的σ1蛋白是呼腸病毒主要的抗原蛋白，能誘導(dǎo)宿主免疫系統(tǒng)產(chǎn)生保護(hù)性中和抗體和血凝抑制抗體，是決定病毒的致病性、感染性和毒力的主要因素。

人體中的呼腸病毒一般分離自呼吸道和腸道，但以往并未發(fā)現(xiàn)同已知的疾病相關(guān)，通常認(rèn)為其是溫和感染[5]。20世紀(jì)60年代早期的研究表明呼腸病毒在一些輕微的呼吸道/腸道疾病中可能起到致病的作用，但是通常情況下呼腸病毒感染無明顯癥狀，呼腸病毒與人類疾病的關(guān)系仍未最后確定。本研究中的呼腸病毒是從重癥呼吸道疾病患者中分離出的一種新型呼腸病毒，在當(dāng)前可能存在人禽流感的情況下，對該病毒在人群中的流行情況進(jìn)行調(diào)查研究，有助于呼吸道疾病的預(yù)防和治療，明確新型呼腸病毒與人類疾病的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 病毒與血清本室自2003年從SARS患者中分離到的呼腸病毒[6]，與已知的哺乳呼腸病毒1、2、3型標(biāo)準(zhǔn)株相比，S1基因存在較大的變異，屬于新型呼腸病毒。血清學(xué)研究表明該病毒與已知的呼腸病毒1、2、3型無交叉反應(yīng)，部分SARS患者血清中相關(guān)特異性抗體效價有4倍改變。將病毒感染L929細(xì)胞，出現(xiàn)明顯CPE反應(yīng)后收取細(xì)胞，反復(fù)凍融3次后1500 r/min離心10min，吸取上清凍存，作為中和用的病毒液。

本研究中檢測的血清均為醫(yī)院標(biāo)本庫中保存。97份健康血清（健康組）為獻(xiàn)血員提供，其他血清均采自我院門診或住院患者。我們選取了219份患者血清（患者組），包括手足口病、麻疹、乙型肝炎（乙肝）、腹瀉等患者。316份檢測對象年齡為（30.95± 19.05）歲，其中57.59%為男性。

1.2 微量中和滴定將血清樣品56℃加熱30min滅活，然后進(jìn)行系列倍比稀釋（1∶4～1∶256）。50μl稀釋后的血清混合等體積的100 TCID50R4病毒懸液，加入96孔板中，每個血清稀釋度重復(fù)4個孔。37℃孵育2～4 h后，按照每孔加入1×104個細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)加入新鮮制備的L929細(xì)胞懸液。放入35℃CO2孵箱中繼續(xù)孵育培養(yǎng)，倒置顯微鏡每天觀察CPE，并記錄病毒滴定結(jié)果，以抑制50%細(xì)胞病變的血清最高稀釋度為終點效價。7 d后判定最終結(jié)果。血清最高稀釋度大于1∶32的視為陽性血清。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理用CHISS 2004軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。2組間率的比較用四格表χ2檢驗或校正χ2檢驗或確切概率檢驗。多組間率的比較用R×Cχ2檢驗或確切概率檢驗，多重比較用Scheffe法。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 健康組與患者組新型呼腸病毒IgG陽性率比較對2組血清中和滴定進(jìn)行檢測，總體陽性率患者組為85.39%，健康組為29.90%。健康組中男性陽性率為26.19%，女性為32.73%；而患者組中男性陽性率為85.71%，女性為84.81%。結(jié)果表明，無論是總體人群還是男女性人群，患者組陽性率均高于健康組（P均＜0.05），但男女陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（表1）。

表1 健康組和患者組微量中和滴定檢測新型呼腸病毒IgG陽性情況Table 1 Positivity of a novel reovirus-specific IgG antibody in healthy controls and patients by neutralization assay

2.2 不同病種患者組呼腸病毒IgG陽性率比較腹瀉組呼腸病毒IgG陽性率（100%）最高，明顯高于手足口病組（70.83%）和乙肝組（90.22%），但與麻疹組（90.70%）比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而麻疹組、手足口病組、乙肝組陽性率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。按性別分層后，男性陽性率與4種病種總體陽性率特點一致，但女性陽性率在各病種間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。各病種內(nèi)男女陽性率差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義（表2）。

麻疹組、手足口病組、乙肝組、腹瀉組抗體滴度中位數(shù)分別為1∶128，1∶64，1∶128，1∶256。

表2 不同病種患者微量中和滴定檢測新型呼腸病毒IgG陽性情況Table 2 Positivity of a novel reovirus-specific IgG antibody in different patient groups by neutralization assay

3 討論

呼腸病毒在人群中普遍易感，Tyler等[7]從腦炎患兒中分離出傳統(tǒng)3型呼腸病毒，Ouattara等[8]也從壞死性腦病兒童患者中分離到了傳統(tǒng)2型呼腸病毒。近幾年也有從呼吸道患者中分離出呼腸病毒的多例報道[9-11]。這些研究打破了傳統(tǒng)意義上呼腸病毒感染不致病的觀點，為腦炎等神經(jīng)系統(tǒng)疾病提供了新的病原體，使呼腸病毒的研究顯得更加重要。我們分離出的新型呼腸病毒可感染實驗動物產(chǎn)生類似SARS的癥狀[12-13]，提示其在SARS病情中可能起到協(xié)同致病或加重病情的作用。同時特別是在2003年SARS暴發(fā)流行以后出現(xiàn)了甲型H1N1及人感染禽流感可能性的情況下，調(diào)查研究該病毒在人群中的流行情況，有助于對呼吸道疾病的預(yù)防和治療。因此，我們檢測了316份不同人群中新型呼腸病毒抗體陽性率，對某些可能因新型呼腸病毒感染造成的臨床疾病具有指導(dǎo)和預(yù)防意義。本研究中的呼腸病毒是從重癥呼吸道疾病患者中分離出的一種新型呼腸病毒，在當(dāng)前可能存在人感染禽流感的情況下，我們的調(diào)查對象為本院標(biāo)本庫中保存的血清，病種有限，只對麻疹、腹瀉、手足口病和乙肝患者進(jìn)行了新型呼腸病毒抗體流行研究。而患者組抗體陽性率普遍高于健康組，是否其他疾病或病原體的存在會增大新型呼腸病毒的感染，從而進(jìn)一步加重疾病進(jìn)程，目前尚無確證?？赡苋鏟iccoli等[14]提出的協(xié)同作用一樣，疾病造成的肝損傷和呼腸病毒感染率之間存在協(xié)同作用，從而增加病毒感染并增大死亡率。

雖然316份樣品中有不少呈新型呼腸病毒抗體陽性，且抗體滴度較高，但目前并未成功分離出新型呼腸病毒，RT-PCR檢測時呼腸病毒抗原也呈陰性?？赡苁怯捎诨颊咴缙诘臐摲腥净騺喤R床感染[15]，甚或患者曾暴露于呼腸病毒存在較多的環(huán)境中[16]，經(jīng)過一段時間后，機(jī)體免疫反應(yīng)清除了病毒抗原，而抗體仍可保留至較長的時間。

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（2015-04-04收稿 2015-06-29修回）

（責(zé)任編委 曲 芬 本文編輯 陳玉琪）

Serological survey of past infection w ith a novel reovirus in different populations

HU Yan,MAO Da,LIU Ze,JIANG Qi-yu,XIE Guo-ming,BAIBing-ke*
Experimental Research Support Center,302 Hospital of PLA,Beijing 100039,China
*Corresponding author,E-mail:bbk3627@sohu.com

Objective To evaluate the prevalence ofpast infectionwith a novel reovirus in differentpopulations.M ethods The serum sampleswere taken from 97 healthy people and 219 patientswith hand,footand mouth disease(HFMD),diarrhea,measlesand hepatitis B treated in ourhospital.The prevalenceof the novel reovirus-specific IgG antibody in serawasdetected by using a neutralization assay.Results The neutralization assay demonstrated that the positive rates of the novel reovirus-specific IgG antibody were 29.90%in healthy controls,70.83%in HFMD group,90.22%in hepatitis B group,90.70%inmeaslesgroup and 100%in diarrheagroup, and themedian IgGantibody titerswere1∶32,1∶64,1∶128,1∶128and 1∶256 in thosegroupsrespectively.Conclusions The positive rates and titers of a novel reovirus-specific IgG antibody are significantly different between the healthy population and patients with different diseases.

reoviridae infections;serotyping;neutralization tests

R512.99

A

1007-8134(2015)04-0207-03

10.3969/j.issn.1007-8134.2015.04.005

國家自然基金青年基金（81000735）

100039北京，解放軍第三〇二醫(yī)院實驗技術(shù)研究保障中心（胡燕、劉澤、姜棋予、謝國明、白冰珂）；100050北京，中國食品藥品檢定研究院艾滋病性病病毒疫苗室（貌達(dá)）（胡燕、貌達(dá)為并列第一作者）

白冰珂，E-mail:bbk3627@sohu.com