GC法測(cè)定測(cè)定消曚眼膏中龍腦和異龍腦的含量

朱雪妍呂軼峰馮旭

1.廣西食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530021；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530200

GC法測(cè)定測(cè)定消曚眼膏中龍腦和異龍腦的含量

朱雪妍1呂軼峰1馮旭2

1.廣西食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530021；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530200

目的：建立GC法測(cè)定測(cè)定消曚眼膏中龍腦和異龍腦的含量。方法：采用DB－WAX色譜柱（柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.53mm，膜厚度1μm），載氣為氮?dú)?，分流比?0：1，柱溫為140℃，進(jìn)樣口溫度為180℃，檢測(cè)器溫度為200℃。結(jié)果：龍腦在0.0317～0.5076μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＝1.0000），平均加樣回收率為99.22%（n＝9），RSD為1.69%；異龍腦在0.0196～0.3136μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r＝0.9991），平均加樣回收率為98.32%（n＝9），RSD為2.22%。結(jié)論：本法靈敏、準(zhǔn)確，可作為消曚眼膏的質(zhì)量控制指標(biāo)。

GC；消曚眼膏；龍腦；異龍腦

消曚眼膏是由珍珠粉、冰片及硼砂制成的復(fù)方制劑，臨床用于角膜炎癥，角膜潰瘍所致的角膜瘢痕 （角膜白班、云翳、斑翳）及角膜混濁，對(duì)石灰燒傷、麻疹、水痘、天花、高燒、腹瀉等疾病或創(chuàng)傷形成的陳舊性角膜瘢痕等均有良好的療效。為確保消曚眼膏的臨床療效及有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，研究參考有關(guān)文獻(xiàn)［1－4］，采用氣相色譜法［5－7］對(duì)冰片中的龍腦和異龍腦進(jìn)行測(cè)定。該方法專屬性強(qiáng)，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，適用于消曚眼膏的質(zhì)量控制。

1 儀器與材料

1.1 儀器 安捷倫公司6890氣相色譜儀（FID檢測(cè)器）；MILLI－Q純水發(fā)生器；梅特勒電子天平。

1.2材料龍腦對(duì)照品（批號(hào)：110881－200706，含量為99.2%）、異龍腦對(duì)照品（批號(hào)：1512－200201）由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；消曚眼膏（批號(hào)：20111001，廣西南珠制藥有限公司）；陰性對(duì)照樣品由廣西南珠制藥有限公司提供。水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：DB－WAX（柱長(zhǎng)30m，內(nèi)徑0.53mm，膜厚度1μm）［8－9］；進(jìn)樣口溫度：180℃；檢測(cè)器溫度：200℃；柱溫：140℃；進(jìn)樣量為1μl；分流比：10：1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加環(huán)己烷制成每1ml含5mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取龍腦對(duì)照品、異龍腦對(duì)照品各10mg，精密稱定，置10m l量瓶中，加環(huán)己烷使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取3ml，置20ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml，加環(huán)己烷至刻度，搖勻，即得。

2.2.2供試品溶液的制備取消曚眼膏約0.5g，精密稱定，置50ml具塞錐形瓶中，精密加入環(huán)己烷20m l，稱定重量，超聲處理（功率320W，頻率40KHz）10 min，放冷，用環(huán)己烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，冷凍離心5min（5000 r／min），精密量取上清液10 ml，置20 m l量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1m l，加環(huán)己烷至刻度，搖勻，即得。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各1μl注入氣相色譜儀，在上述色譜條件下，陰性樣品、對(duì)照品、樣品色譜圖見圖1。龍腦和異龍腦的保留時(shí)間分別為16.3、18.3 min；樣品中其他成分對(duì)龍腦和異龍腦的測(cè)定無干擾。各峰與鄰近峰達(dá)到基線分離，分離度良好 （R＞1.）。

2.4 線性范圍 精密稱取龍腦對(duì)照品127.93mg、異龍腦對(duì)照品78.41mg，置100ml量瓶中，加環(huán)己烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液貯備液；分別精密吸取對(duì)照品貯備溶液8、6、4、2、1、0.5m l，置20m l量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1ml（濃度5.028mg／m l），加環(huán)己烷至刻度，搖勻。進(jìn)樣測(cè)定。以對(duì)照品進(jìn)樣濃度·內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣濃度－1為橫坐標(biāo) （X），對(duì)照品峰面積·內(nèi)標(biāo)峰面積－1為縱坐標(biāo) （Y）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果龍腦的回歸方程為：Y＝2.8392X＋0.0107（n＝6，r＝1.0000），在0.0317～0.5076μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；異龍腦的回歸方程為：Y＝2.7717 X－0.0007（n＝6，r＝0.9991），在0.0196～0.3136μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 對(duì)同一供試品溶液，按正文擬訂的色譜條件，連續(xù)測(cè)定6次。結(jié)果6次測(cè)定龍腦和異龍腦總含量的RSD為0.51%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液1μl，分別于0，3，6，9，12，15，18h注入氣相色譜儀，測(cè)定龍腦和異龍腦總含量，其RSD為0.85%，結(jié)果表明供試品溶液在18 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 對(duì)同一批樣品，分別取樣6份，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法進(jìn)行溶液制備，在上述“2.1”項(xiàng)氣相色譜條件下進(jìn)行分析測(cè)定，結(jié)果龍腦和異龍腦總含量平均值為23.04mg／g，RSD＝0.75%（n＝6），結(jié)果表明，本法的重復(fù)性較好。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取龍腦對(duì)照品127.93mg、異龍腦對(duì)照品78.41mg，置100ml量瓶中，加環(huán)己烷使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。取九個(gè)50ml具塞錐形瓶，分別編號(hào)1～9，第1～3精密加入對(duì)照品貯備液4.5ml；第4～6精密加入對(duì)照品貯備液3ml；第7～9精密加入對(duì)照品貯備液1.5ml，用氮?dú)獯蹈桑∫阎康臉悠?（龍腦含量13.7077mg／g、異龍腦含量9.3323mg／g）約0.25g，共9份，精密稱定，分別置以上50ml具塞錐形瓶中，照擬定標(biāo)準(zhǔn)供試品溶液項(xiàng)下的方法制備、測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果龍腦和異龍腦回收率分別為99.22%（RSD＝1.69%，n＝9）、98.32%（RSD＝2.22%，n＝9）。

2.9 樣品測(cè)定 按正文擬訂的含量測(cè)定方法，測(cè)定了6批樣品中龍腦和異龍腦含量，樣品測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 6批樣品中龍腦和異龍腦含量測(cè)定結(jié)果 （n＝2）

3 討論

3.1 樣品中的龍腦和異龍腦總含量差異很大，含量最高的為26.2mg／g；含量最低的為7.8mg／g。參照處方量，每1g中含有30mg冰片，由于冰片的揮發(fā)性，在生產(chǎn)工藝、貯藏條件及運(yùn)輸過程中均有不同程度的損失而造成龍腦和異龍腦含量差異大。

圖1 氣象色譜圖

3.2 考察極性柱（DB－WAX）的不同固定液膜厚度、不同內(nèi)徑與弱極性柱 （DB－17）對(duì)樣品測(cè)定的影響。結(jié)果弱極性柱 （DB－17）在相同柱溫條件下色譜峰分離不開，而極性柱（DB－WAX）的色譜峰峰形較好，分離良好。由于本品同時(shí)對(duì)冰片進(jìn)行樟腦的雜質(zhì)檢查，而使用DB－WAX（30m×0.25mm，0.25μm）樟腦峰與雜質(zhì)峰分離度欠佳，故選擇極性柱DB－WAX（30m×0.53mm，1.0μm）作為測(cè)定用色譜柱。另外，本品為油性基質(zhì)，過多注入氣相色譜儀會(huì)造成儀器的污染，故選用進(jìn)樣量1μl分流比10：1。

3.3 考察水楊酸甲酯和萘兩種內(nèi)標(biāo)成分，結(jié)果二種成分的保留時(shí)間分別為24min和23min，二種成分對(duì)樣品中龍腦和異龍腦峰均無干擾，考慮到萘具有致畸、致癌、致突變作用，故選用水楊酸甲酯作為內(nèi)標(biāo)。

3.4 由于本品為油性基質(zhì)，無水乙醇不能將基質(zhì)分散使測(cè)定成分溶解出來，故在無水乙醇溶液中未能檢測(cè)出龍腦和異龍腦［10］。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，超聲處理后，若采用濾過的方式，基質(zhì)會(huì)附在濾紙而使濾過速度極慢，且龍腦和異龍腦都具有揮發(fā)性，采用冷凍離心的方式則快速方便。另外，測(cè)定結(jié)果顯示環(huán)己烷的提取效果明顯優(yōu)于乙酸乙酯，故選擇環(huán)己烷作為提取溶劑。

［1］鄭偉強(qiáng).氣相色譜法測(cè)定寒痹軟膏中樟腦、冰片和薄荷腦的含量 ［J］.海峽藥學(xué)，2014，26（5）：34－37.

［2］吳克楠，韓松.氣相色譜法測(cè)定金鳳搽劑中天然冰片的龍腦含量 ［J］.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，35（6）：300－301.

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［4］朱靜，賈曉斌，鄭智音，等.氣相色譜法測(cè)定透骨靈橡膠膏中樟腦、冰片和薄荷腦的含量［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32（11）：831－833.

［5］劉宏偉，周莉玲.氣相色譜法同時(shí)測(cè)定活絡(luò)噴霧劑中4種成分的含量［J］.中國(guó)新藥雜志，2009，18（6）：556－559.

［6］王建化.GC測(cè)定復(fù)方丹參口崩片中冰片的含量 ［J］.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2009，26（2）：153－154.

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GC Determ ination of Borneol and Isoborneol in Xiaomeng Eye Ointment

Zhu Xueyan1Lu Yifeng1Feng Xu2
1.Guangxi Institute for Food and Drug Control，Nanning 530021，China；2.Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530200，China

Objective：To establish GCmethod for determination of borneol and isoborneol in Xiaomeng eye ointment.M ethods：The DB－WAX chromatographic column（30m×0.53mm×1μm）was adopted with nitrogen as the carrier gas and the split ratio of 10：1.The column temperature was 140℃，the injection port temperature was 180℃and the detector temperature was 200℃.Results：The linear range of borneol was in the range of 0.0317～0.5076μg（r＝1.0000），and the average recovery（n＝9）was 99.22%and RSD was1.69%；The linear range of isoborneolwas in the range of0.0196～0.3136μg（r＝1.0000），and the average recovery（n＝9）was 98.32%and RSD was2.22%.Conclusion：Thismethod is convenient，rapid，accurate and reproducible，and can be used for quality control of Xiaomeng eye ointment.

GC；Xiaomeng eye ointment；Borneol and Isoborneol

R283.6

A

1007－8517（2015）20－0014－02

2015.07.18）

廣西“八桂學(xué)者”工程專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)資助；廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（2011GXNSFF018006）。

朱雪妍，碩士，主管藥師，主要從事中藥民族藥的質(zhì)量分析與研究。E－mail：384500662＠qq.com