核因子-κB在慢性移植腎失功中作用機(jī)制的研究

楊 俊李淦洪劉璐璐姜 華晏 強(qiáng)李乾偉

核因子-κB在慢性移植腎失功中作用機(jī)制的研究

楊 俊1李淦洪1劉璐璐1姜 華1晏 強(qiáng)2李乾偉1

目的 探討核因子-κB（NF-κB）及其下游信號(hào)分子調(diào)節(jié)激活正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌的細(xì)胞因子（RANTES）和單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）在慢性移植腎失功（CRAD）患者移植腎組織的表達(dá)及與腎間質(zhì)纖維化/小管萎縮（IF/TA）和尿蛋白的關(guān)系。方法 采用免疫組化技術(shù)及計(jì)算機(jī)真彩色圖像分析軟件系統(tǒng)半定量檢測(cè)103例病理診斷符合CRAD的移植腎組織NF-κB p65、RANTES及MCP-1表達(dá)量，并分析其表達(dá)與CRAD移植腎組織IF/TA、血肌酐及24h尿蛋白的關(guān)系。10例移植前零點(diǎn)穿刺正常腎組織作為對(duì)照組，入院行血清肌酐及24h尿蛋白定量檢測(cè)。結(jié)果移植腎組織NF-κB p65表達(dá)較正常腎組織明顯升高［（22.63±6.37）%、（38.59±5.36）%、（53.36± 8.77）%比（7.83±0.57）%，P＜0.01］；其表達(dá)水平同炎癥細(xì)胞趨化因子RANTES、MCP-1及IF/TA病理分級(jí)呈正相關(guān)（r分別為0.736、0.857和0.904，P均＜0.01）；NF-κB p65的表達(dá)與炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)亦具有正相關(guān)性（r=0.851，P＜0.01）；血肌酐及24h尿蛋白定量的變化隨IF/TA病理分級(jí)增加而升高（r=0.902和0.870，P均＜0.01）。結(jié)論 在CRAD患者移植腎組織中，NF-κB p65表達(dá)明顯增強(qiáng)，NF-κB p65及炎癥趨化因子的高表達(dá)與移植腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、腎間質(zhì)纖維化及慢性移植腎失功等表現(xiàn)密切相關(guān)，提示它們可能參與了慢性移植腎功能不全的發(fā)生和發(fā)展。

慢性移植腎失功；間質(zhì)纖維化/腎小管萎縮；腎移植；核因子-κB

目前研究已知，核因子-κB（NF-κB）是一種與炎癥性細(xì)胞因子（IL-1、IL-6、IL-8）、炎癥趨化因子（RANTES、MCP-1）產(chǎn)生及細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）沉積有關(guān)的重要的核轉(zhuǎn)錄因子，NF-κB在各種因子相互影響的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)中起著中心調(diào)控的作用[1]。在各種不同的腎臟疾病中，包括慢性移植腎失功（chronic renal allograft dys-function，CRAD），慢性炎癥反應(yīng)的發(fā)生是導(dǎo)致腎單位進(jìn)行性丟失的共同的病理過(guò)程[2]。影響移植腎長(zhǎng)期存活的主要因素為：心血管方面疾病和慢性移植腎失功（chronic renal allograft dysfunction，CRAD）[3]。目前尚無(wú)NF-κB在CRAD患者移植腎組織中的表達(dá)及其同腎間質(zhì)纖維化/小管萎縮（IF/ TA）關(guān)系的相關(guān)研究，本研究采用免疫組化方法對(duì)CRAD患者移植腎組織NF-κB p65及相關(guān)趨化因子進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)檢驗(yàn)患者24h尿蛋白及血肌酐，分析NF-κB p65同24h尿蛋白、血清肌酐及IF/TA的關(guān)系，探討NF-κB p65在CRAD發(fā)病機(jī)制中的作用，為移植腎慢性纖維化的發(fā)生、發(fā)展及治療提供一定理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集從2008年6月—2014年2月在我院住院的腎移植患者103例，其中尸體供腎95例，活體供腎8例。術(shù)后出現(xiàn)肌酐升高、蛋白尿，行移植腎穿刺病理活檢術(shù)，按照Banff 2013移植腎病理分級(jí)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，診斷為慢性移植腎失功，男53例，平均年齡（46.8±9.3）歲；女50例，（43.1±9.7）歲。腎穿時(shí)間為腎移植術(shù)后0.5～14.5年，血肌酐（630.8±97.1）μmol/L。其中，52例接受環(huán)孢素+嗎替麥考酚酯+潑尼松三聯(lián)免疫抑制治療方案，51例接受他克莫司+嗎替麥考酚酯+潑尼松三聯(lián)方案治療。術(shù)前所有供、受者的血型相同，淋巴細(xì)胞毒交叉配型試驗(yàn)（CDC）＜10%，HLA-A、HLA-B、HLA-Dr位點(diǎn)至少有二個(gè)位點(diǎn)相配。以10例正常腎組織零點(diǎn)穿刺標(biāo)本作為對(duì)照組，病理檢查無(wú)異常，年齡19～54歲。

1.2 病理分級(jí)診斷標(biāo)準(zhǔn) 依據(jù)Banff 2013移植腎病理分級(jí)診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]，按照IF/TA嚴(yán)重程度分為：Ⅰ級(jí)：輕度間質(zhì)纖維化和腎小管萎縮（＜25%的皮質(zhì)受累）；Ⅱ級(jí)：中度間質(zhì)纖維化和腎小管萎縮（26%～50%的皮質(zhì)受累）；Ⅲ級(jí)：重度間質(zhì)纖維化和腎小管萎縮（＞50%的皮質(zhì)受累）。腎管間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)分度：輕度 散在炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；中度：局灶性浸潤(rùn)；重度：大片、彌漫性浸潤(rùn)。

1.3 移植腎組織NF-κB p65、RANTES和MCP-1檢測(cè) 均應(yīng)用免疫組化EnVision法，石蠟切片3μm，常規(guī)烤片，脫蠟至水，3%過(guò)氧化氫清除內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶，10mM檸檬酸鈉（pH6.0）緩沖液修復(fù)抗原，煮沸20min。分別滴加一抗鼠抗人NF-κB p65單克隆抗體（1:100稀釋，Santa Cruz公司產(chǎn)品，編號(hào)ZS-8008）、RANTES兔抗人單克隆抗體（1:200稀釋，武漢博士德公司產(chǎn)品，編號(hào)BA-1383）和兔抗人MCP-1單克隆抗體（1:100稀釋，武漢博士德公司產(chǎn)品，編號(hào)BA-1254），4℃下過(guò)夜，PBS液沖洗，滴加二抗（福州邁新公司提供），37℃溫箱孵育30min，PBS液沖洗，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，再經(jīng)蘇木素復(fù)染，脫水，封片，觀察。

10例移植前零點(diǎn)穿刺正常腎組織用PBS緩沖液替代一抗作為陰性對(duì)照。同時(shí)均行Masson，PASM等免疫組化檢測(cè)。

1.4 免疫組化染色半定量分析 采用德國(guó)Leica（DMR+Q550型）真彩色病理圖像分析系統(tǒng)對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行半定量分析，隨機(jī)選取10個(gè)不連續(xù)（避開(kāi)腎小球和大血管）的腎小管間質(zhì)視野（×400，HPF），每例腎小管總數(shù)大于60個(gè)。使用ImagePro-Plus6.0軟件計(jì)算平均光密度，取其均值表示該種成分在腎小管和間質(zhì)的相對(duì)含量。

2 結(jié)果

2.1 組織學(xué)改變 移植腎慢性排斥反應(yīng)發(fā)生時(shí)，組織學(xué)改變主要表現(xiàn)為：小球系膜基質(zhì)增寬，間質(zhì)有灶性單核細(xì)胞浸潤(rùn)（見(jiàn)插頁(yè)圖1）；PASM染色可見(jiàn)：系膜細(xì)胞及基質(zhì)中-重度增生，局部包曼氏囊壁增厚、分層，基底膜增厚，基底膜呈連環(huán)樣改變和假雙軌征；Masson染色組織學(xué)表現(xiàn)為：小球呈節(jié)段硬化，包蔓氏囊增厚、分層，間質(zhì)中度纖維化伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，小管上皮萎縮，病變?nèi)鐖D中箭頭所示。不符合急性排斥反應(yīng)、免疫抑制劑慢性腎毒性損傷等其他腎病病理改變。

2.2 腎組織NF-κB p65表達(dá) NF-κB p65在正常腎組織表達(dá)甚少。在CRAD患者移植腎組織中，NF-κB p65主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞及腎間質(zhì)，較對(duì)照組顯著增加（P＜0.01），其表達(dá)水平同RANTES、MCP-1及IF/TA病理分級(jí)呈正相關(guān)（r分別為0.736、0.857和0.904，P均＜0.01）；同時(shí)，移植腎組織中NF-κB p65的含量同炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度、血肌酐水平及24h尿蛋白量亦具有正相關(guān)性（r分別為0.851、0.887和0.926，P＜0.01）。見(jiàn)表1～2，插頁(yè)圖2。

表1 正常腎組織及移植腎間質(zhì)NF-κB p65、RANTES和MCP-1陽(yáng)性面積百分比及相應(yīng)肌酐水平同IF/TA分級(jí)的關(guān)系（±s）

表1 正常腎組織及移植腎間質(zhì)NF-κB p65、RANTES和MCP-1陽(yáng)性面積百分比及相應(yīng)肌酐水平同IF/TA分級(jí)的關(guān)系（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.01；與IF/TA-Ⅰ級(jí)組比較，△P＜0.01；與IF/TA-Ⅱ級(jí)組比較，▲P＜0.01

組別對(duì)照組IF/TA-Ⅰ級(jí)組IF/TA-Ⅱ級(jí)組IF/TA-Ⅲ級(jí)組例數(shù)10 51 40 12 NF-κB p65（%）7.83±0.57 22.63±6.37* 38.59±5.36*△53.36±8.77*△▲RANTES（%）0.95±2.67 25.31±4.89* 46.73±8.24*△59.87±5.43*△▲MCP-1（%）2.78±1.56 33.65±4.73* 53.91±6.75*△64.93±5.62*△▲Scr（μmol/L）78.45±6.47 215.89±22.60* 437.05±56.69*△943.73±65.25*▲尿蛋白定量（g/24h）0.06±0.32 0.64±0.47* 1.86±1.28*△2.65±1.87△▲

表2 CRAD患者腎組織NF-κB p65、RANTES和MCP-1表達(dá)面積百分比和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度關(guān)系（±s）

表2 CRAD患者腎組織NF-κB p65、RANTES和MCP-1表達(dá)面積百分比和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度關(guān)系（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.01；與輕度浸潤(rùn)組比較，△P＜0.01；與重度浸潤(rùn)組比較，▲P＜0.01

組別 例數(shù)NF-κB p65（%）RANTES（%）MCP-1（%）

2.3 RANTES表達(dá) RANTES在正常腎組織中的表達(dá)量非常少。CRAD患者移植腎組織中RANTES大量表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞、腎小球系膜區(qū)及間質(zhì)內(nèi)浸潤(rùn)的單核巨噬細(xì)胞；并且RANTES的表達(dá)隨著間質(zhì)纖維化/小管萎縮的程度加重而增多，具有正相關(guān)性（r=0.916，P＜0.01）；RANTES的表達(dá)同炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度、血肌酐水平及24h尿蛋白量亦具有正相關(guān)性（r分別為0.894、0.875和0.936，P＜0.01）。見(jiàn)表1～2，插頁(yè)圖3。

2.4 MCP-1表達(dá) 正常對(duì)照組腎組織中MCP-1在表達(dá)很低。發(fā)生慢性排斥反應(yīng)時(shí)，移植腎組織中MCP-1表達(dá)顯著增加，主要表達(dá)在腎小管上皮細(xì)胞胞漿、腎小球系膜區(qū)，MCP-1的表達(dá)水平隨著IF/TA病理分級(jí)及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度的增加而增加，具有正相關(guān)性（r=0.917和0.865，P＜0.01）；MCP-1表達(dá)同血肌酐水平及24h尿蛋白量亦具有正相關(guān)性（r= 0.827和0.856，P＜0.01）。見(jiàn)表1～2，插頁(yè)圖4。

2.5 血肌酐水平及24h尿蛋白量 在正常腎組織中，血肌酐水平及24h尿蛋白量同NF-κB p65的表達(dá)無(wú)關(guān)聯(lián)（r=0.138和0.269，P分別為0.316和0.254）；而在CRAD患者移植腎組織中，血肌酐水平及24h尿蛋白量隨著IF/TA病理分級(jí)的增加而升高，具有正相關(guān)性（r=0.902和0.870，P均＜0.01），移植腎組織損傷越嚴(yán)重，血肌酐水平及24h尿蛋白量越高。見(jiàn)表1～2。

3 討 論

NF-κB是普遍存在于細(xì)胞漿中的一種的核轉(zhuǎn)錄因子，包括5種亞基：P65（RelA）、P50、cRel、RelB及p52，最常見(jiàn)的結(jié)合形式是p50/p65異源二聚體，p65是其主要的功能單位。在正常情況下，NF-κB二聚體與其抑制蛋白IκB構(gòu)成復(fù)合物，以失活的狀態(tài)存在于細(xì)胞漿中。NF-κB可被許多刺激原激活，如尿蛋白、有絲分裂原、氧化應(yīng)激和血管緊張素Ⅱ等，這些因素可使IκB磷酸化而被降解，促使NF-κB釋放，從胞漿中轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)，調(diào)節(jié)下游多種細(xì)胞因子的轉(zhuǎn)錄和合成，其激活的靶基因包括趨化因子（RANTES、MCP-1）、細(xì)胞黏附分子和炎癥細(xì)胞因子（IL-1、IL-6、IL-8、TNF）等基因[5]；這些炎癥因子同時(shí)又可以作為NF-κB的激活劑，反過(guò)來(lái)激活NF-κB，如：IL-1和TNF[6]，而形成瀑布式級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)加重腎臟炎癥反應(yīng)，促進(jìn)腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生。

本研究結(jié)果顯示，NF-κB p65在CRAD患者移植腎組織中表達(dá)較正常組明顯升高，其表達(dá)水平隨著IF/TA病理分級(jí)及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度的增加而增多，具有正相關(guān)性；另外，NF-κB p65的表達(dá)同移植腎間質(zhì)RANTES和MCP-1的水平呈正相關(guān)，同文獻(xiàn)報(bào)道一致[7]；同時(shí)，RANTES和MCP-1在CRAD患者移植腎組織中的表達(dá)強(qiáng)度與IF/TA的病理分級(jí)與炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)的程度亦呈正相關(guān)，與我們過(guò)去在CRAD研究中的發(fā)現(xiàn)有一致性[8]；還有，反映腎功能的指標(biāo)血肌酐水平和24h尿蛋白定量均隨著NF-κB p65表達(dá)量的增加而升高，我們推測(cè)，CRAD患者移植腎間質(zhì)IF/TA病理分級(jí)和腎功能下降的程度可能與移植腎間質(zhì)炎性介質(zhì)的表達(dá)以及炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)有著密切的關(guān)系，作為腎間質(zhì)炎癥反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)[9]，炎性介質(zhì)NF-κB介導(dǎo)的炎癥級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)可能參與了CRAD患者移植腎IF/TA及慢性移植腎失功的發(fā)生與發(fā)展。

在炎癥性腎臟疾病中，包括CRAD，由于腎移植術(shù)后患者長(zhǎng)期服用免疫抑制劑及激素，導(dǎo)致血脂代謝紊亂、高血糖及蛋白尿等并發(fā)癥，這些因素均可激活NF-κB。NF-κB的活化是一個(gè)重要的細(xì)胞信號(hào)事件，它控制著一系列炎癥介質(zhì)的轉(zhuǎn)錄，由于NF-κB處于介導(dǎo)炎癥反應(yīng)發(fā)生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，故有必要進(jìn)一步討論NF-κB介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在慢性移植腎失功中的作用機(jī)制，為盡早阻斷這種級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)，預(yù)防和控制慢性移植腎失功的進(jìn)展提供一條可能的途徑。

已知，炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)與活化是腎間質(zhì)纖維化發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的重要始動(dòng)環(huán)節(jié)之一[10]。研究[11]表明，腎間質(zhì)中巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)的數(shù)量與腎臟纖維化程度成正比，當(dāng)抑制編碼巨噬細(xì)胞生成的基因表達(dá)或敲除巨噬細(xì)胞基因時(shí)，腎間質(zhì)纖維化程度得以減輕。RANTES和MCP-1屬于CC類趨化因子，具有強(qiáng)大的促炎作用，它們?cè)谘装Y細(xì)胞的浸潤(rùn)、活化及移植腎纖維化發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用。RANTES和MCP-1不僅能趨化和激活T淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞外，還能被其分泌，更加加重了炎癥細(xì)胞的聚集和活化和腎間質(zhì)的損傷[12-13]。同時(shí)，相關(guān)研究已經(jīng)證實(shí)，NF-κB的活化對(duì)于RANTES[14]和MCP-1[1]的表達(dá)起著非常重要的作用，它能夠調(diào)控RANTES和MCP-1的表達(dá)，從而影響淋巴細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和活化，在細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生和腎纖維化的病程中起著重要的作用。

包括CRAD在內(nèi)的各種不同的腎臟疾病中，慢性炎癥反應(yīng)的發(fā)生可導(dǎo)致腎單位進(jìn)行性丟失，炎癥細(xì)胞在腎間質(zhì)的浸潤(rùn)是導(dǎo)致腎間質(zhì)纖維化的重要原因之一。Zhou等[15]的研究證實(shí)，尿酸可通過(guò)活化NF-κB信號(hào)通路，誘導(dǎo)RANTES和MCP-1的表達(dá)，促進(jìn)腎臟炎癥的發(fā)生，同時(shí)，RANTES的高表達(dá)可被NF-κB特異性的抑制劑所阻斷。炎癥細(xì)胞表面的RANTES受體能夠被趨化因子受體拮抗劑Met-RANTES有效的阻斷，顯著的減少了移植腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和活化，抑制IF/TA的發(fā)生。Wu等[16]研究表明，肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）能夠通過(guò)阻斷NF-κB信號(hào)通路，抑制RANTES和MCP-1的表達(dá)，減少腎間質(zhì)T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)，同時(shí)腎間質(zhì)纖維化的程度明顯減輕。說(shuō)明炎癥細(xì)胞在腎間質(zhì)中的浸潤(rùn)和活化在腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生、發(fā)展和腎功能減退的進(jìn)程中均起著重要的作用；同時(shí)，NF-κB p65的激活對(duì)于炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用。

結(jié)合本實(shí)驗(yàn)，在CRAD患者移植腎組織中，NF-κB的異常高表達(dá)，通過(guò)誘導(dǎo)其下游信號(hào)分子RANTES和MCP-1表達(dá)量的增加，從而導(dǎo)致大量淋巴細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和活化，這些炎癥細(xì)胞除了能分泌炎癥因子介導(dǎo)持續(xù)性的腎間質(zhì)損傷外，還能產(chǎn)生大量的致纖維化因子，如TGF-β、PDGF等，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）、Ⅳ型膠原的產(chǎn)生，導(dǎo)致移植腎纖維化；同時(shí)，它們還能產(chǎn)生抑制ECM的降解的物質(zhì)如纖維酶原激活物抑制劑（PAI-1）和金屬蛋白酶抑制物（TIMP-1）等，參與了腎纖維化的發(fā)生[17]；另外，NF-κB還能促進(jìn)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）表達(dá)，導(dǎo)致肌成纖維細(xì)胞的成熟[18]，在移植腎間質(zhì)中產(chǎn)生大量ECM?？梢?jiàn)，NF-κB能通過(guò)誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和促進(jìn)肌成纖維細(xì)胞的生成，生成大量的ECM，使ECM的產(chǎn)生和降解失衡，導(dǎo)致移植腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生。

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（收稿：2015-05-25 修回：2015-07-01）

Expression of NF-κB p65 in Renal Tissue from Patients with Chronic Renal Allograft Dysfunction

YANG Jun1,Li Gan Hong1,LIU Lulu1,JIANG Hua1,YAN Qiang2,Li Qian Wei1. 1Department of Urology,Fifth Affiliated Hospital(Zhuhai Hospital),Zunyi Medical University,Zhuhai(519100),China;2Military Center for Renal Transplantation&Dialysis,No.181 Hospital,Nanfang Medical University,Guilin(541002),China.

Objective To investigate the expression of NF-κB p65 and its downstream signal molecules in renal tissue with chronic renal allograft dysfunction（CRAD）,and explore their relationship with interstitial fibrosis and tubular atrophy（IF/TA）and urine protein.Methods Immunohistochemical assay and computer-assisted genuine colored image analysis system were used to detect the expression of NF-κB p65,regulated on activation normal T cells expressed and secreted（RANTES）and monocyte chemoattractant protein 1（MCP-1）in 103 renal allografts with CRAD.The relationship of NF-κB p65,RANTES,MCP-1 in renal allografts with IF/TA,serum creatinine and 24h urine protein were analyzed.Ten specimens from healthy renal tissue were used as controls.Results Compared to normal tissue,the expressions of NF-κB p65 were significantly higher in renal tissue with CRAD（IF/TAI:22.63%±6.37%,IF/TA-II:38.59%±5.36%,IF/TA-III:53.36%±8.77%vs control:7.83%±0.57%,P＜0.001）,and the expressions were positively related to the pathological grade of IF/TA and RANTES and MCP-1（r=0.904, 0.736,and 0.857,respectively,all P＜0.001）.The expression of NF-κB p65 was positively related with inflammatory cellular infiltration（r=0.851,P＜0.001）;serum creatinine level and 24h urine protein were increased with IF/TA grades（r=0.902 and 0.870,all P＜0.001）.Conclusion The expression of NF-κB p65 in renal allografts is increased and is closely related to up-regulated RANTES and MCP-1,inflammatory cellular infiltration,IF/TA,and chronic allograft dysfunction.This may indicate the involvement of NF-κB p65 and its downstream signal molecules in progression of chronic renal allograft dysfunction.

chronic renal allograft dysfunction;interstitial fibrosis and tubular atrophy;renal transplantation; NF-κB

1遵義醫(yī)學(xué)院第五附屬（珠海）醫(yī)院泌尿外科（珠海519100）；2南方醫(yī)科大學(xué)附屬解放軍第181醫(yī)院全軍腎移植與透析中心（桂林541002）

姜華，yonghongjiang@163.com