高效液相色譜法測定麻杏口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量

張敏新，黃愛文，宋洪濤（南京軍區(qū)福州總醫(yī)院藥學(xué)科，福建福州350025）

高效液相色譜法測定麻杏口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量

張敏新，黃愛文，宋洪濤（南京軍區(qū)福州總醫(yī)院藥學(xué)科，福建福州350025）

目的建立HPLC法測定麻杏口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量。方法采用Phenomenex Hydro-RP（250 mm×4．6 mm，4μm）色譜柱，以乙腈（A）-0．1%磷酸溶液（含0．1%三乙胺）（B）為流動相，梯度洗脫（0～20 min，3%→10%A），流速：1．0 m l／min，檢測波長：210 nm，進(jìn)樣量：20μl。結(jié)果鹽酸麻黃堿在0．99～39．6μg／m l范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r＝0．999 9，平均回收率為101．5%，RSD為1．77%（n＝6）；鹽酸偽麻黃堿在1．09～43．6μg／ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r＝0．999 9，平均回收率為100．8%，RSD為1．96%（n＝6）。結(jié)論本法簡便、可靠、準(zhǔn)確，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

麻杏口服液；鹽酸麻黃堿；鹽酸偽麻黃堿；高效液相色譜法

麻杏口服液收載于《中國人民解放軍醫(yī)療機構(gòu)制劑規(guī)范》（2002年版）（以下簡稱《制劑規(guī)范》）由麻黃（炙）、瓜蔞皮、金銀花、連翹、苦杏仁、枇杷葉、黃芩、石膏、甘草等9味中藥材制得，具有清熱化痰、宣肺平喘的功效，用于外感發(fā)熱、咳喘等癥的治療［1］。

《制劑規(guī)范》只對麻杏口服液中黃芩、麻黃、金銀花、枇杷葉等藥材進(jìn)行定性鑒別，無法有效控制制劑質(zhì)量。目前，已有測定麻杏口服液中苦杏仁苷、綠原酸和黃芩苷含量［2，3］的文獻(xiàn)報道。方中麻黃為君藥，在麻杏口服液的藥效作用中占有非常重要的地位，而鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿是麻黃的主要有效成分。本文建立了HPLC法測定麻杏口服液中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量，為麻杏口服液的質(zhì)量控制提供有效、合理的檢測方法。

1 儀器與試藥

1．1儀器 1200型高效液相色譜儀（美國安捷倫）；AL204型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；KQ-800KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1．2試藥 鹽酸麻黃堿（含量：99．7%，中國食品藥品檢定研究院，批號：171241-201007）；鹽酸偽麻黃堿（含量：99．7%，中國食品藥品檢定研究院，批號：171237-200505）；麻杏口服液（自制，批號：130920、130925、130930）；乙腈（色譜純，Sigma-A ldrich公司）；磷酸（分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2．1麻杏口服液的制備 取處方量各藥材，加水浸泡2～4 h后，水蒸氣蒸餾，收集蒸餾液200 m l，備用。取蒸餾后的藥液另存，藥渣加水煎煮2次，每次2 h，合并煎液與上述藥液，置濃縮罐內(nèi)，以0．04～0．07 MPa，60～70℃減壓濃縮至相對密度為1．10（60℃）時，加2倍量乙醇（W／W），靜置24 h以上，取上清液回收乙醇至無醇味，冷處放置24 h以上，離心，上清液加入蒸餾液，混勻，加單糖漿至含糖量達(dá)5%，調(diào)節(jié)pH為5．0～7．0，加水至1 000 m l，濾過，分裝，100℃流通蒸汽滅菌30 m in，即得。

2．2鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的測定

2．2．1 色譜條件 色譜柱：極性乙醚連接苯基鍵合硅膠柱（Phenomenex，4．6 mm×250 mm，4μm）；流動相：乙腈（A相）-0．1%磷酸溶液（含0．1%三乙胺）（B相），梯度洗脫：0～20 m in，3%→10%A；流速：1．0m l／min；檢測波長：210 nm；進(jìn)樣量：20μl。

2．2．2 溶液的制備

2．2．2．1 對照品溶液 取鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對照品適量，精密稱定，分別加0．1 mol／L的鹽酸溶液制成含鹽酸麻黃堿（7μg／m l）和鹽酸偽麻黃堿（4μg／m l）的溶液，即得。

2．2．2．2 供試品溶液 精密量取本品5 m l，置25 m l量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，5 000 r／m in離心5 m in，精密量取上清液5 m l，置25 m l量瓶中，加0．1 mol／L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2．2．2．3 陰性對照品溶液 根據(jù)處方及生產(chǎn)工藝制備缺麻黃的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法，制成陰性對照品溶液。

2．2．3 專屬性試驗 分別取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，陰性對照對鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的測定無干擾（圖1）。在此條件下，鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿與其他色譜峰分離良好，保留時間分別為12．9 m in和13．7 min，分離度為2．1。

2．2．4 線性關(guān)系考察 精密稱取鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿對照品各10 mg，置同一100 m l量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取10、8、5、2、1、0．5、0．25 m l置25 m l量瓶中，以流動相稀釋至刻度，得系列濃度的鹽酸麻黃堿（0．99～39．6μg／m l）、鹽酸偽麻黃堿（1．09～43．6μg／m l）對照品溶液，分別精密吸取上述溶液各20μl，注入高效液相色譜儀中，按照“2．2．1”項下色譜條件進(jìn)行測定，分別以鹽酸麻黃堿、鹽酸偽麻黃堿的濃度（C）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得線性方程分別為鹽酸麻黃堿A＝38．400 2 C－1．436 3（r＝0．999 9）、鹽酸偽麻黃堿A＝43．009 5 C－5．438 2（r＝0．999 9），結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿在0．99～39．6μg／m l、鹽酸偽麻黃堿在1．09～43．6μg／m l濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

圖1 對照品（A）、缺麻黃陰性樣品（B）及供試品（C）HPLC色譜圖

2．2．5 精密度試驗 精密吸取“2．2．2．1”項下鹽酸麻黃堿對照品溶液、鹽酸偽麻黃堿對照品溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，測得鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為1．24%和1．03%，表明儀器的精密度良好。

2．2．6 穩(wěn)定性試驗 取“2．2．2．2”項下同一樣品，分別于配制后0、2、4、6、8、10 h測定峰面積，結(jié)果鹽酸麻黃堿RSD為1．33%，鹽酸偽麻黃堿RSD為1．00%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2．2．7 重復(fù)性試驗 精密量取同一批麻杏口服液（批號：130920），按照“2．2．2．2”項下供試品溶液的制備方法，平行制備6份供試品溶液，濾過，分別精密吸取續(xù)濾液20μl，注入高效液相色譜儀中，按照“2．2．1”項下色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積的RSD分別為1.26%和1.62%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2．2．8 加樣回收率試驗 精密量取同一批麻杏口服液（批號：130920）5 m l，共9份，置25 m l量瓶中，分別精密加入一定量鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對照品（加入量約為樣品含量的80%、100%、120%），用乙腈稀釋至刻度，搖勻，5 000 r／m in離心5 m in，精密量取上清液5 m l，置25 m l量瓶中，加0．1 mol／L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，依法測定各成分含量，計算回收率。該方法回收率符合要求，結(jié)果見表1。

表1 鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿加樣回收率試驗結(jié)果（n＝9）

2．2．9 樣品測定 取自制3批樣品，按“2．2．2．2”項下供試品溶液制備方法制備成溶液，在“2．2．1”項的色譜條件下進(jìn)行測定，計算供試品中各有效成分含量，結(jié)果見表2。

表2 鹽酸麻黃堿與鹽酸偽麻黃堿含量測定結(jié)果（mg／m l，n＝3）

中國藥典2010年版一部中規(guī)定麻黃藥材中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的總量不得少于0．80%。結(jié)合制劑的制備工藝和3批樣品的含量測定結(jié)果，制定制劑中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量限度為：本品每毫升含麻黃以鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的總量計，不得少于0．15 mg。

3 討論

3．1前處理方法的考察 麻杏口服液為復(fù)方制劑，藥味較多，參考2010年版中國藥典一部有關(guān)鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿含量測定的成方口服液制劑，取口服液適量以氨水堿化后分別考察了乙醚［4］、乙酸乙酯、石油醚（30～60℃）為提取溶媒進(jìn)行提取，測得的干擾峰少，但重復(fù)性較差（RSD為6．21%），其原因可能為游離麻黃堿亦可溶于水，水中溶解度為50 mg／m l［5］；又考察了甲醇、乙腈直接稀釋后濾過，取續(xù)濾液進(jìn)樣，但鹽酸偽麻黃堿附近均有雜峰干擾；而以乙腈稀釋后離心，發(fā)現(xiàn)下層有油狀物，此油狀物可透過濾膜，干擾目標(biāo)峰的檢測。故最終以離心后取上清液，用0．01 mol／L的鹽酸溶液稀釋后進(jìn)樣，可達(dá)到較高的回收率和重現(xiàn)性，且兩目標(biāo)峰附近皆無干擾物質(zhì)出現(xiàn)。

3．2色譜柱的確定 選用C18色譜柱進(jìn)行分析［4］，發(fā)現(xiàn)鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的峰寬較大（皆為0．4 min），理論塔板數(shù)只有3 950，二者的分離度為1．2，專屬性不理想，處方中苦杏仁的相關(guān)物質(zhì)對鹽酸偽麻黃堿峰的干擾較大，最后選擇極性乙醚連接苯基鍵合硅膠柱進(jìn)行分析［4］，該色譜柱對鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的分離度高，峰形良好，兩目標(biāo)峰的理論塔板數(shù)皆可達(dá)12000，分離度為2.1，適用于鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的測定。

3．3流動相的確定 采用乙腈-0．2%磷酸溶液、乙腈-含0．3%三乙胺的0．02 mol／L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié)pH至3．0）、乙腈-0．02mol／L磷酸鹽緩沖液及甲醇-0．092%磷酸溶液（含0．04%三乙胺和0．02%二正丁胺）［4］4個流動相系統(tǒng)對鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿分離情況進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)都不能有效分離待測色譜峰且基線波動較大。最終確定了分離度較好的乙腈-0．1%磷酸溶液（含0．1%三乙胺）［4］按梯度進(jìn)行洗脫，達(dá)到滿意分離效果。

［1］ 中國人民解放軍總后勤部．中國人民解放軍醫(yī)療機構(gòu)制劑規(guī)范［S］．北京：人民軍醫(yī)出版社，2002：35-36．

［2］ 李 翔，劉皈陽．HPLC法測定麻杏口服液中苦杏林苷的含量［J］．解放軍藥學(xué)學(xué)報，2013，29（1）：57-59．

［3］ 邊向陽，江希連．高效液相色譜法測定麻杏口服液中綠原酸和黃芩苷的含量［J］．海峽藥學(xué)，2010，22（5）：75-76．

［4］ 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典2010年版一部［S］．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：495-496，300-301．

［5］ 王澤民．當(dāng)代結(jié)構(gòu)藥物全集［M］．北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，1993：1620-1621．

Simultaneous determ ination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Maxing oral solution by HPLC

ZHANG M inxin，HUANG Aiwen，SONG Hongtao（Department of Pharmacy，F(xiàn)uzhou General Hospital of Nanjing Command，PLA，F(xiàn)uzhou 350025，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in Maxing oral solution．MethodsPhenomenex Hydro-RP（250 mm×4．6 mm，4μm）was adopted．Acetonitnile（A）and 0．1%phosphonic acid solution（0．1%triethanolamine solution）（B）was used as gradientmobile phase（0-20m in，3%→10%A）at flow rate was 1．0m l／m in and the program of UV gradientabsorbance detection was 210 nm．The sample volumewas 20μl．ResultsA good linearity was obtained over the concentration range of 0．99-39．6μg／m l for ephedrine hydrochloride（r＝0．999 9）and 1．09-43．6μg／m l for pseudoephedrine hydrochloride（r＝0．999 9）．The average recovery of ephedrine hydrochloride was 101．5%w ith RSD of 1．77%（n＝6），and the average recovery of pseudoephedrine hydrochloride was 100．8%with RSD of 1．96%（n＝6）．ConclusionThismethod was simple，accurate and quick，which could be used for determination and quality control of Maxing oral solution w ith good selectivity and repeatability．

Maxing oral solution；ephedrine hydrochloride；pseudoephedrine hydrochloride；HPLC

R927．2

A

1006-0111（2015）05-0445-03

10．3969／j．issn．1006-0111．2015．05．017

2014-10-13

2015-01-13

［本文編輯］ 顧文華

軍隊醫(yī)療機構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項重點課題

（13ZJ01）

張敏新，本科，藥師．研究方向：中藥制劑質(zhì)量控制方法研究．Tel：（0591）22859169；E-mail：280361089＠qq．com

宋洪濤，博士，主任藥師．研究方向：藥物制劑．Tel：（0591）83712298；E-mail：sohoto＠vip．163．com