苯扎氯銨貼薄膜過濾無菌檢查方法的建立及驗(yàn)證

林小暉　田翠　曹克任

摘要：目的：建立苯扎氯銨貼薄膜過濾無菌檢查方法。并驗(yàn)證其準(zhǔn)確性和可靠性。方法：按照《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄XI H無菌檢查法項(xiàng)下薄膜過濾法，取10片苯扎氯銨貼做無菌檢查。結(jié)果：48h內(nèi)6種陽性菌生長(zhǎng)良好。結(jié)論：經(jīng)驗(yàn)證，該方法準(zhǔn)確可靠，在本文檢驗(yàn)條件下，苯扎氯銨貼可用薄膜過濾法進(jìn)行無菌檢查。

關(guān)鍵詞：苯扎氯銨貼 薄膜過濾法 無菌檢查 方法驗(yàn)證

中圖分類號(hào)：R614 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2015）02-0019-01

苯扎氯銨貼，是皮膚用藥類非處方藥品，為家庭常備藥物。是由一塊吸收墊和一層隔離滲透膜組成的保護(hù)性復(fù)合墊，吸收墊里含有苯扎氯銨，苯扎氯銨為陽離子表面活性劑類廣譜殺菌劑，對(duì)革蘭氏陽性菌作用較強(qiáng)。目前，苯扎氯銨貼無菌檢查標(biāo)準(zhǔn)與現(xiàn)行《中國(guó)藥典》2010年版不符。本文按照《中國(guó)藥典》2010年版二部的規(guī)定，對(duì)其進(jìn)行薄膜過濾法無菌檢查方法的建立及驗(yàn)證。

1 試驗(yàn)材料與儀器

（1）供試品：苯扎氯銨貼，批號(hào)141027M 1231，上海強(qiáng)生有限公司。

（2）培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（130312）、改良馬丁培養(yǎng)基（1306032）、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基（130911）、硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（3102622），均購(gòu)自北京三藥科技開發(fā)公司；pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液（022116），購(gòu)自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；0.9%無菌氯化鈉溶液按《中國(guó)藥典》2010年版附錄中有關(guān)規(guī)定進(jìn)行配置、分裝和滅菌。

（3）驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)用菌種：大腸埃希菌（Escherichia coli） [CMCC（B）44102]、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）[CMCC（B）260003]、枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis ）[CMCC（B）63 501]、生孢梭菌（Clostridium sporogenes） [CMCC（B）64 941]、白色念珠菌（canidia Albicans） [CMCC（F）98001]、黑曲霉（Aspergillus niger）[CMCC（F）98 003]，均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

（4）儀器：生物安全柜，無菌檢測(cè)隔離器，高壓蒸汽滅菌器，電熱恒溫培養(yǎng)箱，電子天平，集菌培養(yǎng)器。

2 方法

2.1 菌液的制備

取金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物接種至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，34℃培養(yǎng)24小時(shí)，取白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物接種至改良馬丁培養(yǎng)基中，26℃培養(yǎng)24小時(shí)。上述培養(yǎng)物用0.9%的無菌氯化鈉溶液制成小于100cfu/ml的菌懸液，備用；另將黑曲霉孢子懸液用0.9%無菌氯化鈉溶液制成小于100cfu/ml，備用。

2.2 方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)組

取苯扎氯銨貼10貼，加至裝有200ml無菌pH7.0 氯化鈉-蛋白胨緩沖液的三角瓶中，用力振搖30min，取浸提液按薄膜過濾法過濾至集菌培養(yǎng)器中，每個(gè)濾筒用600ml pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液分三次沖洗濾膜，在最后一次的沖洗液中，分別加入小于100cfu/ml的相應(yīng)菌液，過濾，然后加相應(yīng)培養(yǎng)基100ml，置適宜培養(yǎng)條件下（硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基為34℃，改良馬丁培養(yǎng)基為26℃）培養(yǎng)，并逐日觀察其結(jié)果。

2.3 方法驗(yàn)證陽性對(duì)照組

不加供試品，直接用pH7.0 氯化鈉-蛋白胨緩沖液，沖洗程序和沖洗量、加入陽性菌、加入培養(yǎng)基均與“2.2方法驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)組”項(xiàng)下方法相同。與實(shí)驗(yàn)組在相同條件下培養(yǎng)，并逐日觀察其結(jié)果。

2.4 供試品的無菌檢查

取苯扎氯銨貼10貼，加至裝有200ml無菌pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液的三角瓶中，用力振搖30min，取浸提液至集菌培養(yǎng)器中，過濾，然后用600ml pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液分三次沖洗濾膜。沖洗后每個(gè)濾筒中加入相應(yīng)培養(yǎng)基100ml，陽性組加入金黃色葡萄球菌作為對(duì)照，在相應(yīng)培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，逐日觀察其結(jié)果。

2.5 陰性對(duì)照組

取沖洗液按薄膜過濾法過濾，沖洗后每個(gè)濾筒中加入相應(yīng)培養(yǎng)基100ml，在相應(yīng)培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，逐日觀察其結(jié)果。

3 結(jié)果與分析

3.1 無菌檢查方法的驗(yàn)證

按照文中驗(yàn)證的沖洗量和沖洗方法操作，其結(jié)果顯示陽性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組培養(yǎng)基均在48h內(nèi)變渾濁，且2組之間在培養(yǎng)時(shí)間方面無顯著差異，表明苯扎氯銨貼在該條件下無抑菌活性或抑菌活性可以忽略不計(jì)。無菌檢查方法驗(yàn)證情況，見表1。

3.2 供試品的無菌檢查

按“3.1無菌檢查方法的驗(yàn)證”項(xiàng)下的驗(yàn)證方法，用薄膜過濾法對(duì)樣品做無菌檢查發(fā)現(xiàn)：陽性對(duì)照組培養(yǎng)基在24h內(nèi)變渾濁，培養(yǎng)14d后，陰性對(duì)照組和供試品組均無菌生長(zhǎng)，培養(yǎng)基澄清。供試品無菌檢查經(jīng)培養(yǎng)14d后的情況，見表2。

4 討論

苯扎氯銨貼無菌檢查標(biāo)準(zhǔn)為《國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)》新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第30冊(cè)，其對(duì)于無菌檢查取樣量為7片，與現(xiàn)行《中國(guó)藥典》2010年版標(biāo)準(zhǔn)不同，本文取樣量為10貼，經(jīng)驗(yàn)證在本文檢驗(yàn)條件下苯扎氯銨貼可用薄膜過濾法進(jìn)行無菌檢查。

參考文獻(xiàn)

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