液相色譜法檢測(cè)食品中氯霉素殘留的方法分析

譚勝軍

摘要：氯霉素殘留不僅會(huì)威脅畜牧養(yǎng)殖業(yè)的生產(chǎn)，還會(huì)對(duì)其他以畜牧養(yǎng)殖業(yè)為基礎(chǔ)的食品產(chǎn)業(yè)造成嚴(yán)重危害，對(duì)食用這些食品的人類也會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用。本文結(jié)合實(shí)驗(yàn)對(duì)液相色譜法在食品氯霉素殘留檢測(cè)中的應(yīng)用問題進(jìn)行了探討，以期對(duì)進(jìn)一步提高液相色譜在氯霉素檢測(cè)中的應(yīng)用水平和成效能夠有所借鑒。

關(guān)鍵詞：液相色譜法 氯霉素殘留 檢測(cè)

中圖分類號(hào)：TS207 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2015）02-0018-01

1 氯霉素的危害

氯霉素的本質(zhì)是抗生素，長(zhǎng)期濫用不僅不會(huì)降低病原菌的危害，反而還會(huì)導(dǎo)致病原菌的抗藥性增強(qiáng)。此外，長(zhǎng)期使用氯霉素還會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)造成殘留，而這會(huì)嚴(yán)重?fù)p害動(dòng)物的生殖系統(tǒng)，主要表現(xiàn)為生育力降低、產(chǎn)仔數(shù)減少、流產(chǎn)等，進(jìn)而嚴(yán)重威脅到畜牧養(yǎng)殖業(yè)的生產(chǎn)。一旦動(dòng)物體內(nèi)出現(xiàn)氯霉素殘留，就可能隨著由這些動(dòng)物制成的肉制食品或其衍生物乳制品而進(jìn)入人體，因?yàn)槁让顾赜袊?yán)重的副作用，進(jìn)而對(duì)人體健康就會(huì)產(chǎn)生很大的危害。例如氯霉素對(duì)人體造血系統(tǒng)危害極大，能導(dǎo)致可逆性骨髓抑制和不可逆性再生障礙性貧血等疾病。又例如新生兒因服用含有氯霉素殘留的乳制品后，極易引發(fā)“灰嬰綜合征”等疾病。

2 實(shí)驗(yàn)材料與方法

2.1 主要儀器

實(shí)驗(yàn)主要用到的儀器有：液相色譜儀（waters 600-996二極管陣列檢測(cè)器）、紫外可見分光光度計(jì)（島津 UV-2450）、超聲波清洗器（DL-120B）、高速臺(tái)式離心機(jī)（TDL-100）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（Heidolph-4000型號(hào)）、周轉(zhuǎn)式振蕩器（MSI）以及0.45μm的有機(jī)微孔濾膜。

2.2 試驗(yàn)試劑

實(shí)驗(yàn)主要用到的試劑有：氯霉素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（純度≥98.5%）、乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）以及由實(shí)驗(yàn)室自制的超純水。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

精密稱取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品50mg并置于50mL容量瓶中，然后用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制成濃度為1.0mg/L的儲(chǔ)備液，貯存于4℃冰箱中。儲(chǔ)備液待使用時(shí)再配制成相應(yīng)濃度的溶液。

2.4 牛奶試樣配制

選用牛奶為待檢測(cè)食品，將一定量的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液添加到不含氯霉素的牛奶樣品中，分別配制成1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L和10.0 mg/L 的供試樣品。

2.5 供試樣品提取

精密吸取牛奶供試樣品10.00mL，置于離心管中，加入乙腈定容，渦旋振蕩1min后，超聲提取10min。然后以5000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10min，移取上清液至100mL蒸發(fā)瓶中，重復(fù)提取2次，合并上清液，上清液使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于35℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用甲醇定容至5.0mL，經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過濾，試液供液相測(cè)定。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果討論

3.1 液相色譜條件的建立

取氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液進(jìn)行相應(yīng)的稀釋，然后在紫外分光光度計(jì)上掃描石英比色皿。由試驗(yàn)分析可以看出，氯霉素在278 nm處有吸收峰，故選擇氯霉素檢測(cè)波長(zhǎng)為278nm。

液相色譜條件為：色譜柱采用島津Shim-Pack VP-ODS（150.0×4.6 mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇-水溶液（體積比為40∶60），流速1.0mL/min；波長(zhǎng)278nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量10μL。

3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取一定量的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液并稀釋成質(zhì)量濃度分別為1mg/L、5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L、25mg/L以及30 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。經(jīng)過計(jì)算可知，在1～30mg/L的范圍內(nèi)，氯霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=0.2027X+0.4474，相關(guān)系數(shù)r2=0.9994。

3.3 方法回收率與精密度

按第3節(jié)所述進(jìn)行牛奶的供試樣品提取，測(cè)定氯霉素含量并計(jì)算回收率，每個(gè)水平進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn)，結(jié)果見表1。

由表1可知，樣品平均回收率在85.67%～98.20%的范圍內(nèi)，RSD為2.81%～8.76%。

4 結(jié)語(yǔ)

采用液相色譜法檢測(cè)食品中的氯霉素殘留具有快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，并且在氯霉素檢測(cè)中得到了廣泛的應(yīng)用。而為了實(shí)現(xiàn)更加高效精確的檢測(cè)，還需要相關(guān)技術(shù)人員作更進(jìn)一步的研究和努力。

參考文獻(xiàn)

[1] 張杰，許家勝，劉連利.高效液相色譜法測(cè)定牛奶中的氯霉素殘留[J].化學(xué)研究與應(yīng)用，2013（4）：593-595.