IBA>KT,最佳芽誘導(dǎo)優(yōu)化培養(yǎng)基為MS+1.0mg/L6-BA+0"/>
  • <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    懷牛膝組織培養(yǎng)和快速繁殖體系的優(yōu)化

    2016-10-20 01:38:32劉穎李冬杰王沛沛
    江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2016年7期
    關(guān)鍵詞:快速繁殖懷牛膝組織培養(yǎng)

    劉穎 李冬杰 王沛沛

    摘要:為優(yōu)化懷牛膝(Achyranthes bidentata BL.)組織培養(yǎng)和快速繁殖體系,以懷牛膝莖段作為外植體,選擇MS為基本培養(yǎng)基,研究不同激素配比對(duì)組培快繁的影響。結(jié)果表明,3種激素對(duì)于外植體芽誘導(dǎo)中影響順序依次為6-BA>IBA>KT,最佳芽誘導(dǎo)優(yōu)化培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA+0.2 mg/L KT。誘導(dǎo)叢生芽增殖的培養(yǎng)基以MS+1.3 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA+0.2 mg/L KT為最優(yōu),增殖系數(shù)達(dá)6.03。優(yōu)化生根培養(yǎng)以1/2 MS+0.5 mg/L IBA效果最佳,生根率最高,達(dá)95.1%。組培苗移栽至炭灰 ∶ 營養(yǎng)土 ∶ 蛭石(體積比1 ∶ 2 ∶ 1)的基質(zhì)中,成活率達(dá)到100%,且植株生長健壯。

    關(guān)鍵詞:懷牛膝;組織培養(yǎng);快速繁殖;優(yōu)化

    中圖分類號(hào): Q945.5;S567.23+9.043 文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A 文章編號(hào):1002-1302(2016)07-0083-04

    懷牛膝(Achyranthes bidentata BL.)屬莧科牛膝屬多年生草本植物,高70~120 cm,生長于河南沁陽、武陟、修武、溫縣一帶,為中國著名的“四大懷藥”之一[1]。其根呈圓柱形,直徑5~10 mm,土黃色;莖有棱角或四方形,綠色,有的還帶有紫色;葉片一般是橢圓形或是橢圓披針形,基部呈楔形或是寬楔形。懷牛膝因其根含皂苷元、齊墩果酸、蛻皮激素、牛膝多糖等有效成分,具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、通血脈、降血壓、鎮(zhèn)痛、引藥下行和瀉濁通淋等功效[2],所以越來越受到人們的青睞,具有廣闊的開發(fā)利用前景。為了滿足市場需求,須要對(duì)其進(jìn)行大規(guī)模的培養(yǎng)栽培。近年來,對(duì)于牛膝的組織培養(yǎng)研究也有相關(guān)報(bào)道[3-5],但對(duì)于外植體選擇、激素配比及叢生芽分化上還存在一些問題[6-7]。本研究選取懷牛膝莖段為外植體,建立并優(yōu)化懷牛膝的組織培養(yǎng)及快繁體系,以期獲得最佳的組培條件,整體提高懷牛膝組培的效率,為其藥用成分的長期工廠化生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    供試材料由河北科技大學(xué)植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室提供,以含有1~2個(gè)芽眼的懷牛膝2 cm幼嫩莖段為外植體。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 外植體處理 選取懷牛膝2 cm帶腋芽莖段,先用去離子水沖洗,再加入稀釋的洗潔精清洗,之后置于超凈工作臺(tái)上。用75%乙醇浸泡30 s,無菌水沖洗3次,然后用0.1%氯化汞消毒3 min,最后用無菌水沖洗3次,用消毒濾紙吸干水分,在無菌條件下,把消毒后的莖段切成0.5 cm 的小段待接種。

    1.2.2 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的優(yōu)化 以MS為基本培養(yǎng)基(蔗糖3%、瓊脂0.8%,pH值為5.7~5.8),添加不同濃度的6-BA、IBA、KT,采用L9(34)正交設(shè)計(jì)表(表1),以篩選出最佳的激素組合,確定最佳的誘導(dǎo)培養(yǎng)基。將消毒處理后的外植體置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,每種培養(yǎng)基中接種3個(gè),重復(fù)3次,置于培養(yǎng)室中,進(jìn)行培養(yǎng)并定期觀察不同外植體的誘導(dǎo)及分化情況,14 d后統(tǒng)計(jì)每個(gè)外植體誘導(dǎo)出的叢生芽數(shù)。

    1.2.3 叢生芽增殖培養(yǎng)基的優(yōu)化 以MS為基本培養(yǎng)基(蔗糖3%、瓊脂0.8%,pH值為5.7~5.8),添加IBA 0.5 mg/L、KT 0.2 mg/L及3種不同濃度梯度的6-BA(表2),以篩選出最佳的6-BA濃度,確定最優(yōu)的增殖培養(yǎng)基。切取1 cm長的單芽接種至3種增殖培養(yǎng)基上,每種培養(yǎng)基接種30個(gè),置于培養(yǎng)室中進(jìn)行增殖培養(yǎng),觀察叢生芽增殖及生長情況,25 d后統(tǒng)計(jì)叢生芽的增殖系數(shù)(增殖系數(shù)=叢生芽分化的個(gè)數(shù)/叢生芽分化的外植體數(shù))。

    1.2.4 生根培養(yǎng)基的優(yōu)化 切取生長較粗壯的叢生芽接種于1/2 MS培養(yǎng)基 (蔗糖3%、瓊脂0.8%,pH值5.7~5.8) 上,并添加不同濃度的激素 (表3)進(jìn)行生根誘導(dǎo)培養(yǎng),每種培養(yǎng)基接種約30個(gè)叢生芽。觀察根的萌發(fā)及生長情況,統(tǒng)計(jì)根長、生根數(shù)和生根率(生根率=生根的組培苗數(shù)/接種的組培苗數(shù)×100%)。

    1.2.5 培養(yǎng)條件 培養(yǎng)室的溫度為(25±2) ℃,光照強(qiáng)度為2 000 lx,光照時(shí)間為14 h/d。

    1.2.6 練苗與移栽的優(yōu)化 當(dāng)生根苗長至5 cm時(shí),置于溫室中揭去瓶蓋練苗4 d。然后用鑷子取出小植株,流水洗凈根部附著的培養(yǎng)基,移栽至苗床上,苗床基質(zhì)采用4種處理,分別為(1)草炭土;(2)營養(yǎng)土;(3)草炭土+營養(yǎng)土+蛭石(體積比1 ∶ 2 ∶ 1);(4)營養(yǎng)土+蛭石(體積比2 ∶ 1)。將移栽苗置于相對(duì)濕度80%~90%、溫度(25±2) ℃的環(huán)境中遮陰培養(yǎng)。培養(yǎng)期間,用1/2 MS的大量元素的營養(yǎng)液潤濕基質(zhì),觀察懷牛膝苗的生長情況,30 d后統(tǒng)計(jì)成活率,并比較生長狀態(tài)。

    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

    利用SPSS 20.0軟件統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 外植體芽誘導(dǎo)的優(yōu)化

    將處理后的懷牛膝帶芽莖段分別接種于不同激素濃度組合的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,在相同條件下進(jìn)行離體培養(yǎng),比較不同激素濃度配比對(duì)外植體芽誘導(dǎo)的影響,正交試驗(yàn)結(jié)果見表4,方差分析結(jié)果見表5。

    從表4可以看出,試驗(yàn)中選取的3種激素,即6-BA、IBA、KT對(duì)懷牛膝外植體的誘導(dǎo)均具有影響。通過極差分析得出,3種激素對(duì)于叢生芽誘導(dǎo)的影響從強(qiáng)到弱依次為 6-BA>IBA>KT,3種激素最優(yōu)水平的組合是A2B1C2。方差分析結(jié)果表明,3種影響因素的不同水平之間均存在極顯著差異,3種激素的不同濃度配比對(duì)外植體的誘導(dǎo)具有極顯著的影響。

    在9種不同濃度的激素組合培養(yǎng)基中外植體芽的誘導(dǎo)和生長情況不同(表4、圖1)。接種在4號(hào)培養(yǎng)基中的外植體出芽數(shù)最高,平均達(dá)到3.25;4號(hào)培養(yǎng)基中外植體芽的生長狀態(tài)最好。培養(yǎng)7 d后,9種培養(yǎng)基中的外植體均于切口處萌發(fā)側(cè)芽,使其出現(xiàn)了啟動(dòng)現(xiàn)象。但隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長,不同培養(yǎng)基中的外植體芽生長情況出現(xiàn)了差異。5號(hào)、6號(hào)培養(yǎng)基中莖段基部愈傷組織生長旺盛,叢生芽數(shù)量少,而4號(hào)培養(yǎng)基中莖段的腋芽著生處膨大變綠,在切口處形成少量的綠色愈傷組織;并在莖節(jié)或莖尖端緊靠莖節(jié)上、下的部位分化出側(cè)芽,且生長旺盛;14 d形成叢生芽。

    結(jié)合正交試驗(yàn)分析結(jié)果及外植體芽誘導(dǎo)和生長情況,4號(hào)培養(yǎng)基的激素濃度配比為1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA+0.2 mg/L KT,為懷牛膝外植體芽誘導(dǎo)的最佳激素配比方案。

    2.2 叢生芽增殖的優(yōu)化

    正交試驗(yàn)結(jié)果表明,影響懷牛膝叢生芽誘導(dǎo)分化的主要因素是6-BA,試驗(yàn)設(shè)計(jì)了6-BA 3個(gè)不同濃度梯度的增殖培養(yǎng)基。將懷牛膝單芽接種至3種不同的增殖培養(yǎng)基中,觀察叢生芽的增殖及生長情況,培養(yǎng)30 d后統(tǒng)計(jì)叢生芽的增殖

    系數(shù)及株高,比較不同6-BA濃度對(duì)叢生芽增殖的影響(表6)。結(jié)果表明,在Z2培養(yǎng)基中,即添加1.3 mg/L 6-BA時(shí),叢生芽的增殖系數(shù)最高,平均為6.03,叢生芽生長最快,且植株總體生長狀況最佳,整體表現(xiàn)均勻、壯實(shí),植株株高達(dá)4.12 cm(圖2)。培養(yǎng)基6-BA濃度增加1.5 mg/L或濃度減少至1.0 mg/L,叢生芽增殖系數(shù)和株高均偏低,且3種不同濃度的6-BA誘導(dǎo)叢生芽增殖的效果差異顯著。牛膝叢生芽增殖最適的6-BA濃度為1.3 mg/L,最優(yōu)的增殖培養(yǎng)基為Z2,即MS+1.3 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA+0.2 mg/L KT。

    2.3 誘導(dǎo)生根的優(yōu)化

    選取生長健壯且長勢一致、高3~5 cm的叢生芽接入4種不同生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)。7 d可見根已長出,11 d根長可達(dá)約5 cm,根數(shù)最多達(dá)到8條,單芽長高變大,逐漸長成苗。從表7可以看出,在1/2 MS培養(yǎng)基中添加一定濃度的NAA或IBA都可以誘導(dǎo)懷牛膝叢生芽生根,但不同激素種類和濃度對(duì)生根誘導(dǎo)的影響不同(圖3)。多重比較分析結(jié)果顯示,4種不同生根培養(yǎng)基中叢生芽的根長、平均生根數(shù)、生根率均存在顯著差異。整體來看,在添加NAA的G1、G2培養(yǎng)基中,懷牛膝叢生芽生根速度慢,根粗且短,生根率低;而在添加IBA的G3、G4培養(yǎng)基中,叢生芽生根速度較快,生根率較高。在G4培養(yǎng)基中生根效果最好,生根率最高,為95.1%,并且生根速度快,根多而長,粗細(xì)適中。所以,懷牛膝叢生芽誘導(dǎo)生根的最佳培養(yǎng)基為G4培養(yǎng)基,即1/2 MS+0.5 mg/L IBA。

    2.4 組培苗練苗移栽的優(yōu)化

    懷牛膝生根苗經(jīng)過練苗4 d后移栽至4種基質(zhì)中,比較在不同的基質(zhì)中組培苗的生長情況,結(jié)果(表8)表明,懷牛膝的生根苗移栽至草炭灰 ∶ 營養(yǎng)土 ∶ 蛭石(體積比1 ∶ 2 ∶ 1)的基質(zhì)中成活率最高,達(dá)100%,且15 d后幼苗長出新葉(圖4),植株壯實(shí)。

    3 結(jié)論與討論

    植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)植物細(xì)胞的分裂、分化產(chǎn)生影響。一定濃度配比的細(xì)胞分裂素和生長素對(duì)叢生芽的誘導(dǎo)與增殖發(fā)揮著重要作用。不同激素濃度組合的正交試驗(yàn)及極差分析結(jié)果表明,3種激素對(duì)于叢生芽誘導(dǎo)的影響從強(qiáng)到弱依次為6-BA>IBA>KT,3種激素最優(yōu)水平的組合是A2B1C2。以此激素組合的培養(yǎng)基誘導(dǎo)懷牛膝外植體出芽數(shù)最多,平均值達(dá)3.25,并且外植體芽生長健壯、長勢好,綜合正交試驗(yàn)結(jié)果和外植體芽的誘導(dǎo)分化,篩選出懷牛膝外植體芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA+0.2 mg/L KT。結(jié)果表明,細(xì)胞分裂素6-BA在叢生芽誘導(dǎo)中最為重要,它可以促進(jìn)細(xì)胞分裂,使芽分化,促進(jìn)萌發(fā)[8],特別是與一定濃度的生長素協(xié)同作用時(shí)會(huì)加速細(xì)胞分裂,加快叢生芽分化生長的速度。增加6-BA濃度,外植體的出芽數(shù)會(huì)增加,但當(dāng)6-BA濃度達(dá)到1.5 mg/L時(shí),外植體的出芽數(shù)呈減少的趨勢,外植體芽的誘導(dǎo)受到了抑制,本結(jié)論與劉堅(jiān)等的研究結(jié)果[9]一致,可能與試驗(yàn)材料自身生理特性及細(xì)胞分裂素和生長素的交互作用有關(guān)[10]。在叢生芽增殖誘導(dǎo)中,設(shè)計(jì)6-BA的3個(gè)濃度梯度[11],獲得最佳的增殖培養(yǎng)基為MS+1.3 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA+0.2 mg/L KT,增殖系數(shù)最高達(dá)6.03。

    生根過程起始于莖內(nèi)已分化潛伏的根原基,研究表明,生長素IBA和NAA對(duì)根的形成均發(fā)揮著重要作用。IBA可以促進(jìn)根原基的產(chǎn)生,激活不定根[12],加快不定根生長的速度,且形成的不定根細(xì)而長,在根與莖之間連接緊密,有利于組培苗大范圍吸收營養(yǎng)及水分。而NAA作用機(jī)理主要是為根的形成提供能源和碳源。通過不同濃度IBA、NAA的對(duì)比試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),IBA在生根速度、生根條數(shù)及生根率上均優(yōu)于NAA。生根培養(yǎng)以培養(yǎng)基1/2 MS+0.5 mg/L IBA效果最佳,生根率最高,達(dá)95.1%,且每株組培苗平均生根數(shù)約為8條。

    栽培基質(zhì)是組培苗移栽成活的基礎(chǔ),在保水性能好且通風(fēng)透氣的栽培基質(zhì)中,組培苗成活率較高[13]。通過不同基質(zhì)的配比試驗(yàn)得出練苗后置于草炭灰 ∶ 營養(yǎng)土 ∶ 蛭石(體積比1 ∶ 2 ∶ 1)的基質(zhì)中,組培苗成活率可以達(dá)到100%,且植株生長健壯。

    本研究從外植體芽誘導(dǎo)、叢生芽增殖、叢生芽生根、組培苗練苗移栽4個(gè)階段優(yōu)化懷牛膝組織培養(yǎng)和快速繁殖體系,整體提高組培效率,為實(shí)現(xiàn)懷牛膝工廠化快速繁育奠定基礎(chǔ)。

    參考文獻(xiàn):

    [1]董誠明,張麗萍,劉 杰,等. 懷牛膝組織培養(yǎng)的研究[J]. 河南中醫(yī),2002,22(4):63-64.

    [2]趙興梅,徐光忠,李建利,等. 川牛膝和懷牛膝的現(xiàn)代藥理研究概況[J]. 華西藥學(xué)雜志,2004,19(3):205-207.

    [3]Mareone M F,Jahaniaval F,Alice H,et al. Chemical characterization of Achyranthes bidentata seed[J]. Food Chemistry,2003,81(1):7.

    [4]Sun H X. Adjuvant effect of Achyranthes bidentata saponins on specific antibody and cellular response to ovalbumin in mice[J]. Vaccine,2006,24(17):3432-3439.

    [5]張麗萍,董誠明,金蓋宇. 懷牛膝組織培養(yǎng)及齊墩果酸定量分析的研究[J]. 河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2003,18(4):32-33.

    [6]李明軍,李 萍,洪森榮,等. 懷牛膝愈傷組織誘導(dǎo)及分化的研究[J]. 河南師范大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2005,33(4):118-121.

    [7]劉葉蔓,謝果珍. 粗毛牛膝帶腋芽莖段的植株再生研究[J]. 中國藥房,2011,22(35):3286-3287.

    [8]劉中兵,孟 媛. 南天竹離體初代培養(yǎng)條件優(yōu)化[J]. 北方園藝,2015(5):93-96.

    [9]劉 堅(jiān),張 挺,陳德茜,等. 川牛膝組織培養(yǎng)快繁技術(shù)研究[J]. 中藥材,2006,29(5):425-426.

    [10]黎海利,譚飛理,劉鍇棟,等. 聚花過路黃的組織培養(yǎng)和快速繁殖[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,43(6):51-53.

    [11]Kang B K,Lim C W,Chung K H,et al. Plant regeneration from cotyledon and hypocotyl tissues of Chinese cabbage[J]. Korean Journal of Horticultural Science & Technology,2001,19(3):315-319.

    [12]陳 慧,李順福,劉 翔,等. 不同濃度IBA和NAA對(duì)藍(lán)莓組培苗瓶外扦插生根的影響[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2015,43(3):15-17.

    [13]陳寶玲,陳 爾,王華新,等. 不同基質(zhì)配比對(duì)鐵皮石斛試管苗移栽的影響[J]. 北方園藝,2014(23):57-61.

    猜你喜歡
    快速繁殖懷牛膝組織培養(yǎng)
    基于偏最小二乘回歸分析法懷牛膝藥材抗炎鎮(zhèn)痛譜效關(guān)系
    中成藥(2018年12期)2018-12-29 12:26:04
    紅花木蓮組織培養(yǎng)外植體消毒方法初步研究
    文心蘭切花無病毒種苗組培快繁生產(chǎn)技術(shù)
    瀕危植物南川木菠蘿組織培養(yǎng)技術(shù)研究
    天然植物激素對(duì)鐵皮石斛組培苗誘導(dǎo)芽分化的影響
    科技視界(2016年22期)2016-10-18 14:55:15
    迷你觀賞植物的組織培養(yǎng)與銷售
    懷牛膝與川牛膝功效小考
    中藥與臨床(2015年5期)2015-12-17 02:39:31
    鐵皮石斛抗寒品種的快速繁殖
    互葉白千層的快繁技術(shù)
    門九章教授運(yùn)用懷牛膝經(jīng)驗(yàn)
    精品少妇久久久久久888优播| 国产黄片视频在线免费观看| 男女那种视频在线观看| 久久国产乱子免费精品| 精品熟女少妇av免费看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 春色校园在线视频观看| 国产成人freesex在线| 国产精品三级大全| 欧美 日韩 精品 国产| 久久精品人妻少妇| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产永久视频网站| 下体分泌物呈黄色| 国产永久视频网站| 一级黄片播放器| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 国产美女午夜福利| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 人妻少妇偷人精品九色| 午夜福利高清视频| 麻豆成人午夜福利视频| 91久久精品电影网| 99久国产av精品国产电影| 成人亚洲精品一区在线观看 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 中国国产av一级| 亚洲,欧美,日韩| av在线播放精品| 看十八女毛片水多多多| 午夜福利视频精品| 18禁在线播放成人免费| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲成人av在线免费| 欧美潮喷喷水| 久久久久久久国产电影| 少妇的逼好多水| 高清视频免费观看一区二区| 精品久久久久久久末码| 三级国产精品欧美在线观看| 高清毛片免费看| 亚洲综合色惰| 黄色欧美视频在线观看| 国产男女内射视频| av在线亚洲专区| 久久韩国三级中文字幕| 欧美一区二区亚洲| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产精品.久久久| 日韩电影二区| 美女视频免费永久观看网站| 国产老妇伦熟女老妇高清| 69人妻影院| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | av天堂中文字幕网| 最近2019中文字幕mv第一页| 亚洲成人中文字幕在线播放| 在线观看人妻少妇| 一级毛片电影观看| 看十八女毛片水多多多| 国产人妻一区二区三区在| 欧美日韩在线观看h| videos熟女内射| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 亚洲最大成人中文| 最近手机中文字幕大全| 只有这里有精品99| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产男女内射视频| 国产毛片a区久久久久| 热99国产精品久久久久久7| 中文欧美无线码| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 亚洲内射少妇av| 免费看光身美女| 卡戴珊不雅视频在线播放| 日本黄大片高清| 丝袜脚勾引网站| 欧美bdsm另类| 亚洲人成网站在线播| 大片电影免费在线观看免费| 国产成人freesex在线| 麻豆成人午夜福利视频| 婷婷色综合大香蕉| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 国产乱人偷精品视频| 国产视频首页在线观看| 国产老妇女一区| 性色av一级| 777米奇影视久久| 成人免费观看视频高清| 97精品久久久久久久久久精品| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 人人妻人人看人人澡| 一本久久精品| 日日啪夜夜撸| av线在线观看网站| 一级二级三级毛片免费看| 欧美三级亚洲精品| 嘟嘟电影网在线观看| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲成色77777| 久久人人爽人人片av| 黑人高潮一二区| www.av在线官网国产| 亚洲精品第二区| 日日撸夜夜添| 伊人久久精品亚洲午夜| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 人体艺术视频欧美日本| 高清毛片免费看| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲内射少妇av| 国产有黄有色有爽视频| 美女视频免费永久观看网站| 久久久久久国产a免费观看| 网址你懂的国产日韩在线| 免费在线观看成人毛片| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 天天一区二区日本电影三级| 精品一区二区三区视频在线| 久久久久久久久大av| 日韩国内少妇激情av| 久久精品夜色国产| 91精品伊人久久大香线蕉| 亚洲人与动物交配视频| 亚洲最大成人手机在线| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 最近中文字幕高清免费大全6| 欧美性感艳星| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 尾随美女入室| a级毛色黄片| 亚洲最大成人av| 亚洲精品视频女| a级一级毛片免费在线观看| 在现免费观看毛片| 国产男人的电影天堂91| 在线天堂最新版资源| 国产大屁股一区二区在线视频| 国产免费视频播放在线视频| 久久久精品欧美日韩精品| 国产视频首页在线观看| 久久久久久国产a免费观看| 国产男女内射视频| 九色成人免费人妻av| 亚洲av免费在线观看| 在线观看国产h片| 中文字幕av成人在线电影| 人妻 亚洲 视频| 少妇熟女欧美另类| 国产高清国产精品国产三级 | 内射极品少妇av片p| 热re99久久精品国产66热6| 一级二级三级毛片免费看| 国产精品福利在线免费观看| 色5月婷婷丁香| 欧美丝袜亚洲另类| 色哟哟·www| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 欧美变态另类bdsm刘玥| 少妇人妻精品综合一区二区| a级毛片免费高清观看在线播放| 精品国产露脸久久av麻豆| 久久久a久久爽久久v久久| 最近手机中文字幕大全| 亚洲国产欧美在线一区| 1000部很黄的大片| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲欧美一区二区三区国产| 97在线视频观看| av在线观看视频网站免费| 搞女人的毛片| 国产爽快片一区二区三区| 成人无遮挡网站| 最近最新中文字幕免费大全7| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | av卡一久久| 少妇人妻久久综合中文| 永久网站在线| 久久久精品免费免费高清| 最近的中文字幕免费完整| 18禁在线播放成人免费| 3wmmmm亚洲av在线观看| 成人亚洲欧美一区二区av| av在线app专区| 在现免费观看毛片| 亚洲av国产av综合av卡| 中国美白少妇内射xxxbb| 嘟嘟电影网在线观看| 国产精品久久久久久av不卡| 中国三级夫妇交换| 国产高潮美女av| 久久久欧美国产精品| 国产v大片淫在线免费观看| 毛片一级片免费看久久久久| 少妇人妻久久综合中文| 寂寞人妻少妇视频99o| 日韩一区二区视频免费看| 日本黄色片子视频| 91精品伊人久久大香线蕉| 五月伊人婷婷丁香| 国产男女超爽视频在线观看| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲精品第二区| 日本爱情动作片www.在线观看| 久久99热这里只有精品18| 我的老师免费观看完整版| 国产伦理片在线播放av一区| 久久久久久久国产电影| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲自偷自拍三级| 免费高清在线观看视频在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 国产淫片久久久久久久久| 成人漫画全彩无遮挡| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 日韩欧美 国产精品| 91狼人影院| 国产乱人偷精品视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 色视频在线一区二区三区| 欧美bdsm另类| av网站免费在线观看视频| 精品少妇黑人巨大在线播放| 国产日韩欧美亚洲二区| 三级国产精品片| 亚洲欧美清纯卡通| 一级毛片久久久久久久久女| 日本wwww免费看| 国产精品久久久久久久电影| 午夜免费观看性视频| 99热这里只有精品一区| 亚洲欧美清纯卡通| 深爱激情五月婷婷| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 一级黄片播放器| 亚洲国产精品国产精品| 男人添女人高潮全过程视频| 91狼人影院| 亚洲成人av在线免费| 日韩av不卡免费在线播放| 少妇丰满av| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 日本熟妇午夜| 亚洲人成网站在线观看播放| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲成人一二三区av| av女优亚洲男人天堂| 久久精品久久精品一区二区三区| 一级a做视频免费观看| 日韩制服骚丝袜av| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 高清午夜精品一区二区三区| 十八禁网站网址无遮挡 | 一级毛片我不卡| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 精品人妻视频免费看| av免费在线看不卡| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 国产老妇伦熟女老妇高清| 午夜免费鲁丝| 国产成人精品婷婷| 亚洲av.av天堂| 哪个播放器可以免费观看大片| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲经典国产精华液单| 国产毛片在线视频| 国产淫语在线视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲成人一二三区av| 熟女人妻精品中文字幕| 国产亚洲av嫩草精品影院| 高清欧美精品videossex| 亚洲av一区综合| 精品久久国产蜜桃| 国产精品一及| 国产一区二区在线观看日韩| 神马国产精品三级电影在线观看| 日本免费在线观看一区| 网址你懂的国产日韩在线| 在线精品无人区一区二区三 | 成人二区视频| 99热全是精品| 午夜爱爱视频在线播放| 国产在视频线精品| 丝袜美腿在线中文| 色视频在线一区二区三区| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲自偷自拍三级| 日韩大片免费观看网站| 精品久久久久久电影网| 少妇丰满av| 3wmmmm亚洲av在线观看| 精品人妻视频免费看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 精品人妻偷拍中文字幕| 色网站视频免费| 亚洲成色77777| www.av在线官网国产| 伊人久久精品亚洲午夜| 91狼人影院| 日韩成人伦理影院| 少妇的逼水好多| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产探花在线观看一区二区| 国产成人精品一,二区| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 久久97久久精品| 国产大屁股一区二区在线视频| 免费观看在线日韩| 在线天堂最新版资源| 在线天堂最新版资源| 亚洲国产高清在线一区二区三| 熟女电影av网| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲av二区三区四区| 国产男女超爽视频在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 一个人看的www免费观看视频| 看十八女毛片水多多多| 国产精品一区二区在线观看99| 国产高清不卡午夜福利| 人体艺术视频欧美日本| 精品国产露脸久久av麻豆| 国产有黄有色有爽视频| 日本-黄色视频高清免费观看| 全区人妻精品视频| 免费观看av网站的网址| 日本免费在线观看一区| 国产精品一区二区性色av| 边亲边吃奶的免费视频| 午夜福利高清视频| 久久久午夜欧美精品| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产精品成人在线| 日韩伦理黄色片| av免费在线看不卡| 亚洲av福利一区| 激情五月婷婷亚洲| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 午夜免费鲁丝| 美女内射精品一级片tv| av卡一久久| 2021少妇久久久久久久久久久| 男人爽女人下面视频在线观看| 精品人妻熟女av久视频| 少妇 在线观看| 国产一级毛片在线| 国产中年淑女户外野战色| 亚洲综合精品二区| 亚洲人与动物交配视频| 国产精品久久久久久精品古装| 九九爱精品视频在线观看| 一级爰片在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲在久久综合| 最近中文字幕2019免费版| 成人毛片60女人毛片免费| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 在线观看一区二区三区| 搡女人真爽免费视频火全软件| 亚洲国产欧美在线一区| 青春草亚洲视频在线观看| 91久久精品国产一区二区成人| 国产亚洲av嫩草精品影院| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 我的老师免费观看完整版| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 97热精品久久久久久| 午夜精品国产一区二区电影 | 国产成人福利小说| 搡老乐熟女国产| 天天躁日日操中文字幕| 国产黄色视频一区二区在线观看| 18禁动态无遮挡网站| 国产免费又黄又爽又色| 中国美白少妇内射xxxbb| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲av.av天堂| 在线观看国产h片| 一本久久精品| 亚洲精品成人av观看孕妇| 18禁动态无遮挡网站| 一级毛片aaaaaa免费看小| 色综合色国产| 亚洲精品aⅴ在线观看| 欧美国产精品一级二级三级 | 天堂中文最新版在线下载 | 日韩欧美精品免费久久| 男女那种视频在线观看| 欧美精品一区二区大全| 欧美zozozo另类| 秋霞在线观看毛片| 99热这里只有是精品50| 黄色一级大片看看| 久久精品人妻少妇| 成人国产av品久久久| 嘟嘟电影网在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 色综合色国产| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 成人亚洲精品一区在线观看 | www.色视频.com| 99久国产av精品国产电影| 亚洲最大成人手机在线| 国产91av在线免费观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 色网站视频免费| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲自偷自拍三级| 一个人观看的视频www高清免费观看| 午夜激情福利司机影院| 日本一本二区三区精品| 伦理电影大哥的女人| 亚洲av中文av极速乱| 高清日韩中文字幕在线| 久久97久久精品| 久久精品国产亚洲网站| 国产免费又黄又爽又色| 最近中文字幕2019免费版| 免费观看a级毛片全部| 搡老乐熟女国产| 在线免费十八禁| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲最大成人中文| 国产乱人视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 嫩草影院入口| 欧美极品一区二区三区四区| 色5月婷婷丁香| 身体一侧抽搐| 国产成人91sexporn| 日日摸夜夜添夜夜爱| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产精品国产av在线观看| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 视频区图区小说| 亚洲色图综合在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产精品一区二区性色av| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国精品久久久久久国模美| 亚洲成人一二三区av| 尾随美女入室| 日日啪夜夜撸| 精品一区在线观看国产| 下体分泌物呈黄色| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 成年女人看的毛片在线观看| 亚洲av成人精品一二三区| 97热精品久久久久久| videossex国产| 别揉我奶头 嗯啊视频| 白带黄色成豆腐渣| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 欧美国产精品一级二级三级 | 韩国高清视频一区二区三区| 黄色欧美视频在线观看| 欧美区成人在线视频| 亚洲怡红院男人天堂| 欧美成人a在线观看| 丝瓜视频免费看黄片| 黄色一级大片看看| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 黄色怎么调成土黄色| 色视频www国产| 两个人的视频大全免费| 一本久久精品| 国产精品.久久久| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 中文字幕免费在线视频6| 国产欧美亚洲国产| 亚洲美女视频黄频| 丰满少妇做爰视频| 国产 一区 欧美 日韩| 免费观看av网站的网址| 啦啦啦在线观看免费高清www| 国内精品宾馆在线| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 欧美精品一区二区大全| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 综合色丁香网| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 欧美3d第一页| 久久久久国产网址| 久久99热这里只有精品18| 插阴视频在线观看视频| 青春草视频在线免费观看| 日韩av不卡免费在线播放| 婷婷色综合www| 亚洲经典国产精华液单| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 亚洲国产最新在线播放| 国产色爽女视频免费观看| 身体一侧抽搐| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲精品456在线播放app| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲国产高清在线一区二区三| av国产精品久久久久影院| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日日撸夜夜添| 国产精品伦人一区二区| 1000部很黄的大片| 成人无遮挡网站| 欧美激情国产日韩精品一区| 综合色av麻豆| 亚洲欧美成人精品一区二区| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 亚洲国产精品国产精品| 欧美精品一区二区大全| 观看美女的网站| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲av欧美aⅴ国产| 久久久久久久精品精品| 涩涩av久久男人的天堂| 男女边摸边吃奶| 国产免费视频播放在线视频| 国产免费又黄又爽又色| 黄片无遮挡物在线观看| 丰满少妇做爰视频| 人人妻人人看人人澡| 精品国产三级普通话版| 在线免费十八禁| 亚洲最大成人中文| 国产av国产精品国产| 久久女婷五月综合色啪小说 | 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 七月丁香在线播放| 国产免费又黄又爽又色| 中国三级夫妇交换| 国产伦精品一区二区三区四那| 我要看日韩黄色一级片| 伊人久久精品亚洲午夜| 在线观看免费高清a一片| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲精品影视一区二区三区av| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 五月天丁香电影| 日本黄大片高清| 在线免费观看不下载黄p国产| 日日啪夜夜撸| 国产精品蜜桃在线观看| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲精品一区蜜桃| 美女国产视频在线观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 成人综合一区亚洲| 国产精品三级大全| 97超碰精品成人国产| 国产亚洲最大av| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 欧美日韩视频精品一区| 亚洲不卡免费看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲国产精品成人综合色| 色网站视频免费| 男人爽女人下面视频在线观看| 国产黄色免费在线视频| 久久久久性生活片| 一区二区三区精品91| 直男gayav资源| 国产精品人妻久久久影院| 日韩一区二区视频免费看| 天美传媒精品一区二区| .国产精品久久| 国产淫片久久久久久久久| 国产黄色免费在线视频| 久久久久久久国产电影| 国产成年人精品一区二区| 97超碰精品成人国产| 青青草视频在线视频观看| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲精品成人av观看孕妇| 26uuu在线亚洲综合色| 国产 一区 欧美 日韩| 精品一区在线观看国产| 亚洲欧美日韩东京热| 禁无遮挡网站| 国产极品天堂在线| 久热久热在线精品观看| 免费高清在线观看视频在线观看| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲内射少妇av| 精品酒店卫生间| 国产淫片久久久久久久久| 日日啪夜夜撸| 直男gayav资源| 日韩三级伦理在线观看| 欧美高清成人免费视频www| 天天躁日日操中文字幕|