cyclinD1蛋白和Rb蛋白表達(dá)狀況與乳腺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系

周 春 (攀枝花學(xué)院醫(yī)學(xué)院外科教研室，四川 攀枝花 617000)

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多步驟、多階段、多途徑、多因子的復(fù)雜漸進(jìn)過程。研究表明，細(xì)胞周期素(cyclin)D1基因編碼的cyclinD1蛋白與抑癌基因Rb編碼的Rb蛋白同在細(xì)胞周期關(guān)鍵調(diào)控點(diǎn)，對(duì)于G1→S轉(zhuǎn)換有重要作用，其致使細(xì)胞增殖周期失調(diào)，進(jìn)而形成腫瘤〔1〕。本研究運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色方法(S-P法)檢測(cè)正常乳腺及乳腺癌組織中的cyclinD1蛋白和Rb蛋白的表達(dá)與乳腺癌生物學(xué)行為的關(guān)系，探討其在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2003～2011年攀枝花學(xué)院附屬醫(yī)院普外科乳腺癌手術(shù)切除乳腺癌組織標(biāo)本120例和乳腺癌旁良性乳腺組織58例，所有標(biāo)本按照常規(guī)取材，采用10%甲醛固定和石蠟切片，常規(guī)蘇木素-伊紅(HE)及免疫組織化學(xué)染色。按照Elston和Ellis改良方法，對(duì)120例乳腺癌進(jìn)行Bloom-Richardsen's組織學(xué)分級(jí)〔2，3〕:Ⅰ + Ⅱ級(jí) 75 例，Ⅲ級(jí) 45 例;而病理分級(jí)參照第6版AJCC分期〔4〕:Ⅰ+Ⅱ級(jí)88例，Ⅲ級(jí)32例。

1.2 儀器與方法 使用即用型兔抗人cyclinD1和即用型鼠抗人Rb單克隆抗體對(duì)所有標(biāo)本進(jìn)行S-P法檢測(cè)，顯色劑采用來自美國(guó)Maxin公司的DAB顯色劑。操作方法按試劑盒說明書進(jìn)行，以已知的陽性乳腺癌標(biāo)本作陽性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞核，以各種抗體在細(xì)胞核或胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性信號(hào)。每張切片隨機(jī)觀察3個(gè)高倍視野(×400)，陽性細(xì)胞數(shù)＜5%為陰性表達(dá)(-)，其他視為陽性表達(dá)(+)。記錄并分析乳腺癌中腋淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS18.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 cyclinD1蛋白和Rb蛋白表達(dá)狀況 cyclinD1蛋白在乳腺癌中呈較高陽性表達(dá)，陽性染色大部分定位于細(xì)胞核，其陽性表達(dá)率〔75.8%(91/120)〕顯著高于良性乳腺組織〔32.8%(19/58)〕(χ2=30.731，P ＜0.001);而 Rb蛋白在乳腺癌中的陽性表達(dá)率〔35.0%(42/120)〕明顯低于良性乳腺組織〔75.9%(44/58)〕(χ2=26.145，P ＜0.001)。

2.2 乳腺癌中cyclinD1蛋白和Rb蛋白陽性表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系 乳腺癌中cyclinD1蛋白和Rb蛋白陽性表達(dá)與其組織學(xué)分級(jí)、病理分級(jí)有關(guān)(P＜0.05)，而與其他臨床病理指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。組織學(xué)分級(jí)越高，cyclinD1蛋白陽性表達(dá)越高，而Rb蛋白陽性表達(dá)越低;病理分級(jí)越高，cyclinD1蛋白和Rb蛋白陽性表達(dá)均越低(P＜0.05)，見表1。

2.3 乳腺癌中cyclinD1蛋白與Rb蛋白表達(dá)之間的關(guān)系 Rb蛋白表達(dá)陽性組的cyclinD1蛋白陽性表達(dá)率〔88.1%(37/42)〕顯著高于Rb蛋白表達(dá)陰性組〔69.2%(54/78)〕(χ2=40.695，P＜0.001)。

表1 乳腺癌中cyclinD1蛋白和Rb蛋白陽性表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系(n)

3 討論

細(xì)胞周期調(diào)節(jié)紊亂是腫瘤發(fā)生的重要環(huán)節(jié)之一，根據(jù)研究報(bào)道，cyclinD1基因位于11q13，乳腺癌中存在擴(kuò)增、重排及異位，其編碼的蛋白作為細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白在G1期發(fā)揮重要正性調(diào)控作用，其異常表達(dá)有可能引起細(xì)胞增殖異常而產(chǎn)生腫瘤〔5〕。Rb抑癌基因編碼的Rb蛋白存在于細(xì)胞周期G1→S期調(diào)控點(diǎn)，是其中心成分，作用位點(diǎn)在cyclinD1-cdk4下游〔6〕。研究發(fā)現(xiàn)，Rb抑癌基因及其蛋白表達(dá)的異常除了與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤密切相關(guān)外，與其他腫瘤關(guān)系也密切。

本研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致〔7，8〕，提示cyclinD1蛋白的過表達(dá)和Rb蛋白的失表達(dá)是乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的重要因素，是腫瘤發(fā)生的一個(gè)早期事件。因此，cyclinD1蛋白和Rb蛋白可視為乳腺癌的重要標(biāo)志物。本研究顯示cyclinD1蛋白的過表達(dá)和Rb蛋白的失表達(dá)提示乳腺癌的惡性程度，國(guó)外研究顯示，乳腺癌中Rb蛋白的陽性表達(dá)下調(diào)為17% ～46%。Dublin等〔9〕的研究也顯示，Rb蛋白的失表達(dá)率在組織學(xué)Ⅲ級(jí)中有增高趨勢(shì)。這進(jìn)一步說明了這兩者是乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的重要標(biāo)志。另外，本研究表明cyclinD1過表達(dá)在乳腺癌中發(fā)揮作用較多依賴于Rb蛋白的存在，間接證實(shí)了“cyclinD1、p16、cdk4及Rb”這一調(diào)節(jié)途徑的存在。

1 Wang MT，Chen G，An SJ，et al.Prognostic significance of cyclinD1 amplification and the co-alteration of cyclinD1/pRb/ppRb in patients with esophageal squamous cell carcinoma〔J〕.Dis Esophagus，2012;25(7):664-70.

2 蔡 媛，翁壽田，車瀟良，等.乳腺癌組織學(xué)類型及分級(jí)對(duì)預(yù)測(cè)新輔助化療療效的價(jià)值〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2013;21(1):78-80.

3 李振洲，劉 倩，羅長(zhǎng)銳，等.乳腺癌超聲特征與組織學(xué)分級(jí)及Ki-67表達(dá)的相關(guān)性研究〔J〕.國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2012;18(9):1211-4.

4 何 健，王杰軍，錢建新，等.第6版和第7版UICC-AJCCTNM分期系統(tǒng)預(yù)測(cè)食管癌根治性切除術(shù)后生存情況的比較:基于400例食管癌患者的臨床分析〔J〕.腫瘤，2013;33(2):164-70.

5 Jiang Q，Zhang H，Zhang P.ShRNA-mediated gene silencing of MTA1 influenced on protein expression of ER alpha，MMP-9，CyclinD1 and invasiveness，proliferation in breast cancer cell lines MDA-MB-231 and MCF-7 in vitro〔J〕.J Exp Clin Cancer Res，2011;30(1):60.

6 馬智勇，芮紅兵.D114對(duì)K562細(xì)胞增殖的影響及Rb蛋白在Notch活化的K562細(xì)胞中的表達(dá)〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2012;32(9):1896-7.

7 李洪利，何艷姣，喬 超，等.乳腺癌β-catenin cyclinD1的表達(dá)及意義〔J〕.山西醫(yī)藥雜志，2011;40(6):558-60.

8 趙云霞，龔曉萌，崔芳芹，等.乳腺癌中PTEN、Rb、C-myc的異常表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2012;32(12):2531-3.

9 Dublin EA，Patel NK，Gillett CE，et al.Retinoblastoma and p16 proteins in mammary carcinoma:their relationship to cyclin D1 and histopathological parameters〔J〕.Int JCancer，1998;79(1):71-5.