參附桃紅承氣湯對多器官功能障礙綜合征模型大鼠肝腎功能及組織病理的影響

趙曉丹鄧 旻陳志明朱仕兵馬 偉張曉潔

參附桃紅承氣湯對多器官功能障礙綜合征模型大鼠肝腎功能及組織病理的影響

趙曉丹1鄧 旻2陳志明2朱仕兵2馬 偉2張曉潔2

目的 觀察參附桃紅承氣湯對多器官功能障礙綜合征（MODS）模型大鼠肝腎功能及組織病理的影響。方法 將50只健康Wistar大鼠隨機(jī)分成空白組，模型組，參附桃紅承氣湯低、中、高劑量組，每組10只。參照文獻(xiàn)方法造模，自造模前3天至處死前，空白組和模型組給予生理鹽水1mL灌胃，1天2次參附桃紅承氣湯組分別給予2、4、8g/mL生藥灌胃，1天2次，觀察各組大鼠造模前后生命體征。造模24h后處死大鼠取血，檢測血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、總膽紅素（TB）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST），摘取肝、腎組織行病理學(xué)檢查。結(jié)果 模型組大鼠血清BUN、Cr、TB、ALT、AST水平明顯高于空白組［（24.26±7.1）mmol/L、（80.02±26.27）μmol/L、（4.51±1.29）μmol/L、（259.90±199.81）U/L、（345.80±209.95）U/L比（6.82±0.62）mmol/L、（45.68±6.69）μmol/L、（0.42±0.14）μmol/L、（55.33±16.43）U/L、（108.44±15.89）U/L，P均＜0.05］；與模型組比較，參附桃紅承氣湯高劑量組BUN、Cr、TB、ALT、AST水平顯著降低［（12.53±3.80）mmol/L、（56.51±14.63）μmol/L、（2.41±0.89）μmol/L、（67.00±36.27）U/L、（135.78±27.03）U/L比（24.26±7.1）mmol/L、（80.02±26.27）μmol/L、（4.51±1.29）μmol/L、（259.90±199.81）U/L、（345.80±209.95）U/L，P均＜0.05］。光鏡下，參附桃紅承氣湯高劑量組肝腎組織較模型組炎性浸潤有明顯改善，出血、水腫及壞死明顯減輕。結(jié)論 高劑量參附桃紅承氣湯能降低MODS模型大鼠血清BUN、Cr、TB、ALT、AST水平，對脂多糖（LPS）介導(dǎo)的MODS模型大鼠肝腎組織病理有改善作用。

大鼠；多器官功能障礙綜合征；參附桃紅承氣湯；肝功能；腎功能；組織病理

多器官功能障礙綜合征（multiple organ dysfunction syndrome，MODS）是臨床常見的急危重癥之一，可發(fā)展為不可逆的多器官衰竭，預(yù)后極差。預(yù)防MODS的發(fā)生和發(fā)展是降低其病死率的最重要的方法。本研究采用脂多糖（LPS）建立大鼠MODS模型，觀察參附桃紅承氣湯對MODS模型大鼠血清BUN、Cr、TB、ALT、AST及肝腎器官病理影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng) 物 清潔級雄性Wistar大鼠50只，委托浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中心定購（生產(chǎn)許可證號：SCXK（滬）2012-0002），體質(zhì)量（200±20）g，屏障環(huán)境中采用獨(dú)立通風(fēng)籠具（IVC）適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。1.2 試 劑 脂多糖（LPS，美國Sigma公司，批號102M4017V）；中性福爾馬林（中國福建東康生物技術(shù)有限公司，批號20140401）；水合氯醛分析純（上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)五聯(lián)化工廠，批號20131106）。

1.3 藥 物 參附桃紅承氣湯:太子參20g，制附子、桃仁、生大黃、芒硝各10g，枳實(shí)、厚樸各15g，桂枝、甘草各10g；以上生藥水煎濃縮至濃度為8g/mL，冷藏保存。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 MODS模型建立 按文獻(xiàn)[1]方法復(fù)制模型，具體診斷參照文獻(xiàn)報(bào)道MODS動(dòng)物模型診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]。造模前12h大鼠禁食不禁水。脂多糖用生理鹽水溶解，濃度1mg/mL。模型組、參附桃紅承氣湯低、中、高劑量組大鼠分別經(jīng)腹腔注射脂多糖（7mg/kg），注射后輕揉大鼠腹部，造模后每隔2h觀察大鼠的體征變化?？瞻捉M大鼠不進(jìn)行任何處理。

2.2 分組及給藥 按隨機(jī)區(qū)組法將50只大鼠隨機(jī)分成空白組10只，模型組10只，參附桃紅承氣湯低、中、高劑量組各10只。自造模前3天至處死前，空白組和模型組給予生理鹽水1mL灌胃，1天2次；參附桃紅承氣湯低、中、高劑量組按2、4、8g/mL生藥濃度給予參附桃紅承氣湯溶液1mL灌胃，1天2次。

2.3 標(biāo)本采集及檢測 ①大鼠處死前12h禁食不禁水，手術(shù)前腹腔注射10%水合氯醛（3mg/kg）麻醉，將大鼠移入超凈臺上，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血，分別置入相應(yīng)離心管，3000轉(zhuǎn)分離血清10min，取血清后置于-80℃冰箱保存，用全自動(dòng)生化分析儀檢測血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、總膽紅素（TB）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）。②大鼠放血至死后，立刻取大鼠肝腎組織放于中性福爾馬林中固定用于做病理切片。病理標(biāo)本制備：將肝、腎組織用石蠟包埋，組織切片機(jī)切片固定，自動(dòng)脫蠟機(jī)脫蠟、HE自動(dòng)染色劑染色、自動(dòng)封片機(jī)封片，光鏡下觀察并照相，留取病理圖片。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s） 表示，采用單因素方差分析和t檢驗(yàn)，各組大鼠死亡率采用卡方檢驗(yàn)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 大體情況 空白組大鼠活動(dòng)正常，生命體征穩(wěn)定，無不適反應(yīng)。模型組大鼠經(jīng)腹腔注射LPS后1h內(nèi)，大鼠煩躁不安，活動(dòng)加劇，呼吸頻率加快；2～4h大鼠呼吸急促，體溫升高，活動(dòng)減少同時(shí)所有大鼠開始扎堆；6～12h大鼠成群蜷縮扎堆，呼吸窘迫，不思飲食，糞便??；18～24h大鼠開始慢慢恢復(fù)，有少許活動(dòng)，個(gè)別大鼠開始飲食飲水。與模型組比較，參附桃紅承氣湯低、中、高劑量組大鼠在同一時(shí)間段內(nèi)上述癥狀相對較輕。

3.2 各組大鼠肝、腎功能指標(biāo)比較 與空白組比較，模型組、參附桃紅承氣湯低、中劑量組BUN、Cr、TB、ALT和AST均顯著升高（P均＜0.05）；參附桃紅承氣湯高劑量組BUN、TB和AST明顯高于空白組（P均＜0.05），Cr、ALT與空白組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，參附桃紅承氣湯高劑量組BUN、Cr、TB、ALT、AST均不同程度降低（P均＜0.05）；參附桃紅承氣湯高劑量組BUN、Cr、TB、ALT、AST顯著低于低、中劑量組（P均＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠肝、腎功能指標(biāo)比較（±s）

表1 各組大鼠肝、腎功能指標(biāo)比較（±s）

注：與空白組比較，△P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05；與高劑量組比較，▲P＜0.05

組別空白組模型組參附桃紅高劑量組參附桃紅中劑量組參附桃紅低劑量組只數(shù)10 10 10 10 10 BUN（mmol/L）6.82±0.62 24.26±7.1△12.53±3.80△* 36.15±9.50△*▲22.09±5.97△▲Cr（μmol/L）45.68±6.69 80.02±26.27△56.51±14.63* 95.22±19.41△▲77.20±12.09△▲TB（μmol/L）0.42±0.14 4.51±1.29△2.41±0.89△* 4.84±1.32△▲3.22±0.67△*▲ALT（U/L）55.33±16.43 259.90±199.81△67.00±36.27* 195.00±76.73△▲412.22±303.73△▲AST（U/L）108.44±15.89 345.80±209.95△135.78±27.03△* 348.00±140.40△▲498.56±216.17△▲

3.3 各組大鼠肝、腎病理鏡檢 光鏡下，空白組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)清楚，肝細(xì)胞排列正常；模型組較對照組損傷明顯加重，可見肝血竇擴(kuò)張淤血，肝細(xì)胞呈放射狀排列，肝細(xì)胞內(nèi)可見小空泡，少數(shù)見點(diǎn)狀壞死，部分匯管區(qū)可見炎癥細(xì)胞浸潤；參附桃紅承氣湯低、中、高劑量組較空白組加重，尤其是低、中劑量組更明顯，高劑量組較模型組明顯減輕?？瞻捉M大鼠腎組織結(jié)構(gòu)清楚，皮髓分界明顯，腎小球內(nèi)毛細(xì)血管正常；模型組較對照組損傷明顯加重，可見腎小球內(nèi)毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，髓質(zhì)血管擴(kuò)張充血，系膜細(xì)胞增生，基質(zhì)增多，部分出現(xiàn)基底膜的增厚和內(nèi)皮細(xì)胞的增生，可見纖維組織增生，有炎癥細(xì)胞浸潤，腎小管上皮細(xì)胞可見腫脹變性；參附桃紅承氣湯低、中、高劑量組較空白組加重，尤其是低、中劑量組更明顯，高劑量組較模型組明顯減輕（封二圖1～2）。

4 討 論

MODS發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前認(rèn)為其本質(zhì)是機(jī)體遭受嚴(yán)重?fù)p害因素打擊后，防御反應(yīng)過強(qiáng)，致大量細(xì)胞因子、炎性介質(zhì)及其它病理產(chǎn)物釋放，損傷細(xì)胞組織，導(dǎo)致器官功能障礙[2-3]。中醫(yī)認(rèn)為，MODS是臟腑氣血陰陽等多方面失調(diào)、紊亂。MODS發(fā)生和發(fā)展主要為毒、瘀、虛貫穿病程始終[3-6]，“毒”致MODS啟動(dòng)，“瘀”致MODS加速發(fā)展，“虛”是MODS較難康復(fù)的本質(zhì)。因此，中醫(yī)防治MODS，宜扶正、祛瘀、通下，三者兼顧。

參附桃紅承氣湯是在大承氣湯基礎(chǔ)上增加益氣補(bǔ)虛、祛瘀之品，方中大黃善于攻下、通臟腑、破留血、利水腫、清熱瀉火、解熱毒、活血、破痰實(shí)；芒硝善于攻積、清熱、消腫；厚樸善于燥濕、除脹滿、消積導(dǎo)滯、消痰、下氣、去留熱、厚腸胃；枳實(shí)善于破氣行滯、除痞、瀉熱、活血、安胃氣、利五臟。大黃、芒硝常相須為用以增強(qiáng)瀉下功效；厚樸、枳實(shí)相伍助大黃蕩積滯、攻下熱結(jié)。藥理研究顯示，大黃可增加腸蠕動(dòng)，抗感染，抑制多種細(xì)菌（如革蘭陽性和陰性菌、葡萄球菌、鏈球菌等），利膽健胃等。芒硝主要成分硫酸鈉的硫酸根離子不易被吸收，留在腸內(nèi)形成高滲溶液，從而阻止腸內(nèi)水分吸收，促進(jìn)腸蠕動(dòng)，以達(dá)到瀉下的目的。厚樸能抗炎，抑制多種細(xì)菌（如肺炎球菌、金葡萄菌等）。枳實(shí)可增加胃腸收縮節(jié)律，增加腦、腎等血流量，降低腦、腎等的血管阻力[7]。桃仁善于去血滯、破血、行血，祛瘀力較強(qiáng)，是臨床上治療瘀血阻滯病的常用藥。藥理研究顯示，桃仁提取液可改善血流動(dòng)力學(xué)，擴(kuò)張血管，增加血流量，改善血液循環(huán)，促進(jìn)病情轉(zhuǎn)歸[7]。太子參善于補(bǔ)陰益氣，健脾胃。附子善于回陽救逆、溫中、益氣補(bǔ)虛。桂枝善于溫經(jīng)通脈、助陽化氣。藥理研究顯示，太子參對淋巴細(xì)胞有明顯的刺激作用；附子可抗炎，強(qiáng)心，抑制毛細(xì)血管通透性的亢進(jìn)；桂枝可解熱、降溫，抑菌（如白葡菌、金葡菌等），健胃，強(qiáng)心，緩解胃腸痙攣[7]。

本研究結(jié)果顯示，高劑量參附桃紅承氣湯能顯著降低由LPS所致MODS大鼠血清BUN、Cr、TB、ALT、AST水平，減輕肝、腎組織病理損傷，有預(yù)防MODS大鼠臟器功能損傷作用。

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（收稿：2015-01-29 修回：2015-04-14）

Effect of Shenfu Taohong Chengqi Decoction on Hepatic and Renal Function and Tissue Pathology of Ratsw ith M ultiple Organ Dysfunction Syndrome

ZHAO Xiaodan1，DENG Min2，CHEN Zhiming2，ZHU Shibing2，MA Wei2，ZHANG Xiaojie2.1Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou (310053),China;2Department of Emergency,Hangzhou City Red Cross Hospital,Hangzhou(310003),China.

Objective To investigate the influence of Shenfu Taohong Chengqi Decoction on hepatic and renal function and histopathology of rats with multiple organ dysfunction syndrome（MODS）.M ethods Fifty healthy Wistar rats were random ly divided into blank group,model group,and low-,medium-and high-dose Shenfu Taohong Chengqi Decoction groups,with 10 rats in each group.MODS model was established according to the literature methods.Shenfu Taohong Chengqi Decoction groups were intragastrically given 2,4,and 8g/mL crude drug from 3d before to 1d after modeling.Other 2 groups were given 1 mL normal saline twice a day for the same period.Vital signs of rats were observed before and after modeling.All rats were sacrificed 24h later after modeling and their blood samples were taken to determine serum urea nitrogen（BUN）,creatinine（Cr）,total bilirubin（TB）,alanine aminotransferase（ALT）,and aspertate aminotransferase（AST）and tissue samples from their liver and kidney were taken for histopathological examination.Results The levels of BUN,Cr,TB,ALT,and AST in model group were significantly higher than those in blank group（24.26±7.1mmol/L,80.02±26.27μmol/L,4.51±1.29μmol/L,259.90± 199.81U/L,345.80±209.95U/L vs 6.82±0.62mmol/L,45.68±6.69μmol/L,0.42±0.14μmol/L,55.33±16.43U/L,108.44± 15.89U/L;all P＜0.05）.Compared with model group,the levels of BUN,Cr,TB,ALT,and AST in high-doseShenfu Taohong Chengqi Decoction group were significantly decreased（12.53±3.80mmol/L,56.51±14.63μmol/L,2.41± 0.89μmol/L,67.00±36.27U/L,135.78±27.03U/L vs 24.26±7.1mmol/L,80.02±26.27μmol/L,4.51±1.29μmol/L,259.90± 199.81U/L,345.80±209.95U/L;all P＜0.05）.Under the microscope,inflammatory infiltrates in hepatic and renal tissues from high-dose Shenfu Taohong Chengqi Decoction group were milder than that in model group,hemorrhage, edema and necrosis were significantly reduced as well.Conclusion High dose of Shenfu Taohong Chengqi Decoction can reduce serum BUN,Cr,TB,ALT,and AST levels of MODS rats,and ameliorate their lipopolysaccharidemediated hepatic and renal histopathological changes.

rats;multiple organ dysfunction syndrome;Shenfu Taohong Chengqi Decoction;liver function; renal function;histopathology

浙江省中醫(yī)藥科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.2010ZA100）

1浙江中醫(yī)藥大學(xué)（杭州 310053）；2杭州市紅十字會醫(yī)院急診科（鄧旻，陳志明，朱仕兵，馬偉，張曉潔）（杭州 310003）

鄧旻，Tel：15858295000；E-mail：dengmin136@126.com