肥大細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長因子β在人慢性根尖周病組織中的表達(dá)*

尹小萍，陳　柯，謝錦強(qiáng)，黃世光△(暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)系，廣東廣州5063;廣州市婦女兒童醫(yī)療中心口腔科，廣東廣州5063)

肥大細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長因子β在人慢性根尖周病組織中的表達(dá)*

尹小萍1，陳柯2，謝錦強(qiáng)1，黃世光1△
(1暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院口腔醫(yī)學(xué)系，廣東廣州510632;2廣州市婦女兒童醫(yī)療中心口腔科，廣東廣州510623)

［摘要］目的:本研究旨在觀察不同類型慢性根尖周病組織中肥大細(xì)胞( mast cells，MCs)的分布，分析轉(zhuǎn)化生長因子β( transforming growth factor-β，TGF-β)在MCs上的表達(dá)情況，探討類胰蛋白酶( tryptase) -TGF-β雙陽性MCs在慢性根尖周病免疫病理中的作用。方法:共收集78例樣本，分為3組: ( 1)根尖肉芽腫組25例; ( 2)根尖囊腫組25例; ( 3)正常對照組28例。組織標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定48 h以上。石蠟包埋、制備組織連續(xù)切片。HE染色，觀察其組織學(xué)改變;采用甲苯胺藍(lán)染色法觀察各組標(biāo)本組織中MCs的數(shù)量及MCs脫顆粒情況;采用免疫熒光雙染色法，在熒光顯微鏡下觀察各組標(biāo)本組織中tryptase-TGF-β雙陽性MCs的數(shù)量。結(jié)果: ( 1)與正常對照組相比，兩組慢性根尖周病組織中tryptase-TGF-β雙陽性MCs密度顯著增多( P＜0. 01) ; ( 2)根尖囊腫組tryptase-TGF-β雙陽性MCs密度明顯高于根尖肉芽腫組( P＜0. 01) ; ( 3)與甲苯胺藍(lán)染色法相比，tryptase-TGF-β免疫熒光雙染色法結(jié)果中各組標(biāo)本組織的MCs密度顯著增多( P＜0. 01)。結(jié)論:慢性根尖周病組織，尤其是根尖囊腫組織中tryptase-TGF-β雙陽性細(xì)胞明顯增多，提示tryptase-TGF-β雙陽性MCs可能在慢性根尖周病中的致病過程，尤其在根尖周囊腫纖維組織形成中發(fā)揮作用。Tryptase免疫熒光染色法比傳統(tǒng)鑒別肥大細(xì)胞的甲苯胺藍(lán)染色法更靈敏。

［關(guān)鍵詞］慢性根尖周病;肥大細(xì)胞;類胰蛋白酶;轉(zhuǎn)化生長因子β

根尖周病是由來源于感染根管的細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物經(jīng)根尖孔擴(kuò)散至根尖周組織所致。機(jī)體的免疫防御機(jī)制無法完全消除根尖周的感染，因而形成伴隨根尖周骨組織吸收破壞的慢性病損［1］。轉(zhuǎn)化生長因子β( transforming growth factor-β，TGF-β)是細(xì)胞生長的雙重調(diào)節(jié)劑，在炎癥、組織修復(fù)、胚胎發(fā)育、細(xì)胞的生長、分化和免疫功能方面都有重要的調(diào)節(jié)作用，與腫瘤發(fā)生發(fā)展、自身免疫和纖維化疾病等均有密切關(guān)系［2］?？紤]到肥大細(xì)胞( mast cells，MCs)在過敏性和炎癥性疾病中的作用及TGF-β對免疫細(xì)胞的抑制作用，TGF-β可能具有通過旁分泌或自分泌方式抑制MCs活性的功能［2］。我們前期研究已經(jīng)表明MCs的募集和脫顆粒［3］、MCs干細(xì)胞因子( stem cell factor，SCF)與根尖周病免疫病理密切相關(guān)［4］，提示MCs及其相關(guān)細(xì)胞因子在根尖周病的發(fā)病及病理過程中起重要作用。目前，有關(guān)參與根尖周病MCs 的TGF-β表達(dá)情況還未見報道。因此，本研究分別采用甲苯胺藍(lán)染色法和免疫熒光雙染色法，觀察不同類型慢性根尖周病組織中MCs的分布，分析TGF-β在MCs上的表達(dá)情況，探討類胰蛋白酶( tryptase) -TGF-β雙陽性MCs在慢性根尖周病免疫病理中的作用。

材料和方法

1研究對象

1.1病例選擇選擇2011年9月～2013年6月期間在暨南大學(xué)荔灣口腔教學(xué)醫(yī)院臨床診斷為根尖囊腫和根尖肉芽腫接受根尖刮治手術(shù)并經(jīng)病理檢查確診的病例50例，其中根尖肉芽腫25例［22～60歲，平均( 43. 2±11. 9)歲］，根尖囊腫25例［24～64歲，平均( 45. 9±11. 8)歲］。正常對照組28例［年齡18～23歲，平均( 20. 5±4. 3)歲］為正常牙周膜，來自2013年6～9月期間因正畸需要拔除的牙周健康的前磨牙，所有這些前磨牙牙根發(fā)育完全并且沒有根尖周病。所有患者均沒有系統(tǒng)性疾病而且至少2個月前停止使用抗生素。樣本收集之前取得患者的書面知情同意書。

1.2分組及取材( 1)正常對照組:因正畸需要拔除的牙周健康的前磨牙牙周膜，共28例; ( 2)根尖肉芽腫組: X線顯示患牙根尖周有圓形或橢圓形密度降低區(qū)，直徑＜1 cm，邊界清楚，組織學(xué)檢查見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤，并無鱗狀上皮襯里; ( 3)根尖囊腫組: X線顯示患牙根尖周有圓形或橢圓形密度降低區(qū)，直徑＞1 cm，邊界清楚有白色射阻線包繞，組織學(xué)檢查見根尖區(qū)組織存在部分或全部上皮覆蓋，囊腫表現(xiàn)為完整的囊腔，囊腔為一定厚度的復(fù)層鱗狀上皮覆蓋。上皮層可見明顯炎癥細(xì)胞浸潤，纖維組織層以膠原纖維為主，未見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1組織標(biāo)本采集、處理與觀察根尖肉芽腫和根尖囊腫標(biāo)本是在進(jìn)行根尖刮治手術(shù)時取得的根尖周病變組織。正常對照組標(biāo)本取自因正畸需要拔除的牙周健康的前磨牙，用無菌刀片將牙周膜從牙根上刮取。標(biāo)本立即固定于4%甲醛溶液中48 h以上，經(jīng)脫水、透明、浸蠟、包埋，制備成5 μm厚度組織連續(xù)切片。由2名病理醫(yī)師盲法觀察各組標(biāo)本的組織學(xué)改變。

2.2甲苯胺藍(lán)染色與觀察組織切片通過常規(guī)脫蠟、酒精復(fù)水，常溫下甲苯胺藍(lán)液染色過夜，最后中性樹膠封片。2名病理醫(yī)師于光學(xué)顯微鏡下觀察組織切片中MCs形態(tài)及脫顆粒情況并計數(shù)。在400倍視野下對每張切片中全部MCs計數(shù)，并記錄每張切片的組織面積大小。計算各組MCs及脫顆粒MCs密度。MCs密度( mm－2) =每張切片中MCs總數(shù)/每張切片的組織面積;脫顆粒MCs密度( mm－2) =每張切片中脫顆粒MCs總數(shù)/每張切片的組織面積。

2.3Tryptase-TGF-β雙陽性MCs免疫熒光雙染色

抗tryptase的I抗( Abcam)，稀釋濃度為1∶200;抗TGF-β的I抗( Santa Cruz)稀釋濃度為1∶100; II抗為山羊抗鼠IgG( H + L) Alex Flour 555( Cell Signaling)，山羊抗兔IgG( H + L) Alex Flour 488( Cell Signaling)，稀釋濃度為1∶200。組織切片通過常規(guī)脫蠟、乙醇復(fù)水，檸檬酸鹽緩沖液微波修復(fù)、山羊血清封閉，I抗孵育，避光條件下II抗孵育熒光染色后，抗熒光淬滅封片液封片，立即在熒光顯微鏡下觀察。2名病理醫(yī)師于免疫熒光顯微鏡下觀察到MCs均表達(dá)有TGF-β，從而對各組實(shí)驗(yàn)標(biāo)本中的tryptase-TGF-β雙陽性MCs計數(shù)并計算各組tryptase-TGF-β雙陽性MCs密度。在400倍視野下對每張切片的tryptase-TGF-β雙陽性MCs計數(shù)，并記錄每張切片的組織面積大小。Tryptase-TGF-β雙陽性MCs密度( mm－2) =每張切片中tryptase-TGF-β雙陽性MCs總數(shù)/每張切片的組織面積。

3統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( mean±SD)表示，采用SPSS 13. 0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。不同組間甲苯胺藍(lán)染色MCs密度及每平方毫米tryptase-TGF-β雙陽性MCs數(shù)目的比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)——Kruskal-Wallis H檢驗(yàn); 3組之間存在差別則進(jìn)行3個獨(dú)立樣本兩兩比較的Nemenyi法檢驗(yàn)。不同組間甲苯胺藍(lán)染色法和免疫熒光雙染色法MCs密度的比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)——配對樣本比較的Wilcoxon符號秩檢驗(yàn)。以P＜0. 05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1組織學(xué)觀察

正常對照組未見明顯炎癥細(xì)胞浸潤;根尖肉芽腫組可見大量炎癥細(xì)胞浸潤，主要為單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞呈灶性浸潤，其中巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞和中性粒細(xì)胞呈散在浸潤;根尖囊腫組上皮層表現(xiàn)為細(xì)胞間水腫，上皮下見大量以中性粒細(xì)胞為主的炎癥細(xì)胞浸潤;纖維組織層以膠原纖維為主，未見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤，見圖1。

Figure 1.The histological changes of the specimens (×400).A: healthy control; B: periapical granuloma; C: the epithelial layer of periapical cyst; D: the fibrous tissue area of periapical cyst.圖1　各組標(biāo)本組織學(xué)觀察

2甲苯胺藍(lán)染色

正常對照組的健康牙周膜組織中可見正常寄居的MCs，數(shù)量極少;根尖肉芽腫組與正常對照組相比，MCs的數(shù)量有所增加，MCs呈圓形或卵圓形，細(xì)胞邊緣整齊光滑，胞質(zhì)顆粒均勻，部分MCs呈輕度、中度脫顆粒;根尖囊腫組可見大量MCs定位于囊性上皮稍下方、結(jié)締組織和上皮內(nèi)區(qū)域，染色較深，形態(tài)多樣，MCs呈明顯脫顆?，F(xiàn)象，部分MCs崩解，異染性顆粒散落在細(xì)胞外，見圖2。

各組標(biāo)本組織中甲苯胺藍(lán)染色MCs及脫顆粒MCs密度比較見圖3。與正常對照組相比，兩組慢性根尖周病組織中MCs密度顯著上升( P＜0. 01)，且根尖囊腫組的MCs密度明顯高于根尖肉芽腫組( P＜0. 05) ;與正常對照組相比，兩組慢性根尖周病組織中脫顆粒MCs密度顯著上升( P＜0. 01)，且根尖囊腫組的脫顆粒MCs密度明顯高于根尖肉芽腫組( P＜0. 05)。

3Tryptase-TGF-β雙陽性MCs免疫熒光雙染色結(jié)果

各組標(biāo)本組織中MCs均表達(dá)有TGF-β。正常對照組的健康牙周膜組織中僅可見少量散在分布的tryptase-TGF-β雙陽性MCs;根尖肉芽腫組的根尖周病變組織中tryptase-TGF-β雙陽性MCs數(shù)目明顯增多;根尖囊腫組的根尖周病變組織囊性上皮稍下方、結(jié)締組織和上皮內(nèi)tryptase-TGF-β雙陽性MCs數(shù)目顯著增多，見圖4。

Figure 2.Representative photomicrographs of MC infiltration with toluidine blue staining.圖2　各組標(biāo)本甲苯胺藍(lán)染色觀察

Figure 3.The densities of MCs and degranulated MCs with toluidine blue staining.Mean±SD.n = 25～28.＊＊P＜0. 01 vs healthy control;△P＜0. 05 vs periapical granuloma.圖3　各組標(biāo)本組織中甲苯胺藍(lán)染色MCs及脫顆粒MCs密度

各組標(biāo)本組織中的tryptase-TGF-β雙陽性MCs密度( mm－2)見圖5，結(jié)果顯示3組標(biāo)本組織中的tryptase-TGF-β雙陽性MCs密度不同( P＜0. 01)，其中根尖囊腫組tryptase-TGF-β雙陽性MCs密度最高。Nemenyi檢驗(yàn)分析結(jié)果顯示:正常對照組與根尖肉芽腫組的tryptase-TGF-β雙陽性MCs密度之間存在顯著差異( P＜0. 01) ;正常對照組與根尖囊腫組的tryptase-TGF-β雙陽性MCs密度之間有顯著差異( P＜0. 01) ;根尖囊腫組的tryptase-TGF-β雙陽性MCs密度明顯高于根尖肉芽腫組( P＜0. 01)。

4甲苯胺藍(lán)染色與免疫熒光雙染色MCs密度的比較

各組標(biāo)本甲苯胺藍(lán)染色與免疫熒光雙染色MCs密度的比較見圖6。結(jié)果顯示與甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果相比，免疫熒光雙染色法結(jié)果中各組標(biāo)本組織的MCs密度顯著增多( P＜0. 01)。這提示trypatse免疫熒光染色法比傳統(tǒng)鑒別肥大細(xì)胞的甲苯胺藍(lán)染色法靈敏度更高。

Figure 4.Representative photomicrographs of MC infiltration with tryptase-TGF-β immunofluorescence double staining (×400).圖4　各組標(biāo)本組織中tryptase-TGF-β陽性MCs

Figure 5.The density of tryptase-TGF-β positive MCs.Mean± SD.n =25～28.＊＊P＜0. 01 vs healthy control;△P ＜0. 05 vs periapical granuloma.圖5　各組標(biāo)本組織中tryptase-TGF-β雙陽性MCs密度

Figure 6.The comparison of the MC densities determined by toluidine blue ( TB) staining and double immunofluorescence ( IF) staining.Mean±SD.n = 25～28.＊＊P＜0. 01 vs MCs-TB.圖6　各組標(biāo)本甲苯胺藍(lán)染色與免疫熒光雙染色MCs密度比較

討論

來源于感染根管的微生物是導(dǎo)致根尖周疾病的主要因素，細(xì)菌及其毒性產(chǎn)物經(jīng)根管系統(tǒng)擴(kuò)散至根尖周組織，啟動機(jī)體免疫防御機(jī)制，導(dǎo)致各種炎癥細(xì)胞及破骨細(xì)胞浸潤，并產(chǎn)生多種CKs，導(dǎo)致根尖周組織的破壞和骨吸收［5］。感染根管中的革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁成分脂多糖( lipopolysaccharide，LPS)能刺激中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和MCs等釋放多種促炎細(xì)胞因子，如IL-1、TNF-α、TGF-β和PGE2等，同時能激活破骨細(xì)胞，導(dǎo)致根尖周牙骨質(zhì)和牙槽骨的吸收［6］。

傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，MCs主要參與I型超敏反應(yīng)，抗原性物質(zhì)與MCs表面的IgE結(jié)合后可導(dǎo)致MCs膜結(jié)構(gòu)變化，發(fā)生脫顆粒釋放組胺、白三烯等一系列生物活性肽，介導(dǎo)速發(fā)型過敏反應(yīng)，從而導(dǎo)致或加劇根尖周組織水腫、疼痛、患牙伸長感、咬合痛等臨床癥狀［7］。在根尖周肉芽腫和囊腫浸潤的炎癥細(xì)胞中，觀察到一定數(shù)量的MCs，提示MCs參與根尖周病的致病機(jī)制［8］。然而，也有學(xué)者并不支持MCs介導(dǎo)的速發(fā)型過敏反應(yīng)在根尖周病中發(fā)揮作用［9-10］。因此，有關(guān)MCs在根尖周疾病中的作用，目前尚無一致的看法。

研究顯示MCs和巨噬細(xì)胞參與根尖囊腫的發(fā)病機(jī)制［11］。Márton等［12］觀察到根尖周病變的纖維囊中存在大量的MCs，而在根尖肉芽腫中沒有發(fā)現(xiàn)MCs。de等［13］在根尖囊腫的炎癥病變區(qū)觀察到MCs數(shù)量增多，同時在病變的深層組織中出現(xiàn)明顯的脫顆?，F(xiàn)象，提示MCs與牙源性病變的炎癥反應(yīng)和囊性病變有關(guān)。Drazic等［14］觀察到根尖囊腫的MCs數(shù)量比肉芽腫多，且MCs主要出現(xiàn)在根尖周病變組織的炎性浸潤和成纖維細(xì)胞區(qū)域。Ledesma-Montes等［15］觀察到MCs在有上皮增生的肉芽腫和炎癥浸潤區(qū)數(shù)量增加，并出現(xiàn)明顯的脫顆粒，提示MCs與根尖周炎癥進(jìn)程的發(fā)生、發(fā)展和持續(xù)存在密切關(guān)系。本研究，我們采用甲苯胺藍(lán)染色法對25例根尖肉芽腫、25例根尖囊腫和28例正常牙周膜進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示兩組慢性根尖周病組織中MCs和脫顆粒MCs數(shù)量較正常對照組明顯增多，且根尖囊腫組MCs和脫顆粒MCs數(shù)量均明顯高于根尖肉芽腫。我們的研究結(jié)果與多數(shù)研究者的結(jié)果一致，提示MCs參與根尖周病變過程。

TGF-β超家族由結(jié)構(gòu)相關(guān)的多肽生長因子組成，是一組調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和分化的蛋白質(zhì)家族。TGF-β在炎癥、組織修復(fù)、胚胎發(fā)育、細(xì)胞生長、分化和免疫功能方面均有重要調(diào)節(jié)作用，參與自身免疫性疾病、動脈粥樣硬化、纖維性病變和腫瘤等的病變過程［2］。TGF-β對多種細(xì)胞的生長、分化具有雙重調(diào)節(jié)性，根據(jù)細(xì)胞的類型及其分化狀態(tài)或試驗(yàn)條件不同，起抑制或激活作用?？紤]到MCs在過敏性和炎癥性疾病中的作用及TGF-β對免疫細(xì)胞的抑制作用，TGF-β可能具有通過旁分泌或自分泌方式抑制MCs活性的功能［2］。研究表明，TGF-β可以根據(jù)MCs的亞型、成熟或激活狀態(tài)，對MCs釋放介質(zhì)產(chǎn)生上調(diào)或減弱的作用［16］。研究表明，由MCs或其它細(xì)胞產(chǎn)生的TGF-β1參與炎癥級聯(lián)反應(yīng)，延遲并可逆性抑制IgE介導(dǎo)的MCs過敏反應(yīng)［17］。TGF-β被認(rèn)為在慢性腎病( chronic kidney disease，CKD)中通過誘導(dǎo)腎結(jié)構(gòu)纖維化發(fā)揮重要作用［18］。TGF-β1能控制腎臟的炎癥反應(yīng)，同時也能促進(jìn)腎臟纖維化的發(fā)展，是減少或干預(yù)慢性腎病惡化的一個潛在藥物學(xué)目標(biāo)［19］。

目前關(guān)于MCs細(xì)胞因子參與根尖周病的致病機(jī)制不詳，對參與根尖周病MCs的TGF-β表達(dá)還未見報道。因此，本研究我們采用免疫熒光雙染色法，分析TGF-β在MCs上的表達(dá)情況。結(jié)果顯示:與正常對照組相比，慢性根尖周病組織中的tryptase-TGF-β雙陽性MCs密度明顯升高;根尖囊腫組的tryptase-TGF-β雙陽性MCs密度明顯高于根尖肉芽腫組，結(jié)果提示tryptase-TGF-β雙陽性MCs可能在慢性根尖周病的致病機(jī)制，尤其在根尖周囊腫的纖維組織形成中發(fā)揮作用。因此，我們可以推斷TGF-β是主要的抗炎因子之一，它在MCs中表達(dá)的生物學(xué)意義可能是穩(wěn)定炎癥反應(yīng)，修復(fù)受損組織。在根尖周疾病中，TGF-β能對抗促炎癥因子IL-1和TNF-α，是巨噬細(xì)胞的滅活劑。研究結(jié)果對于闡明TGF-β陽性MCs在根尖周病的發(fā)病機(jī)制，尤其在根尖周囊腫中的作用具有理論意義和臨床指導(dǎo)價值?？刂芓GF-β陽性的MCs或調(diào)節(jié)MCs的功能可能成為阻止根尖周病發(fā)展的一個治療目標(biāo)。從而，為根尖周病的治療提供新的靶點(diǎn)，為臨床治療根尖周病提供更有效的治療方向。

［參考文獻(xiàn)］

［1］Márton IJ，Kiss C.Protective and destructive immune reactions in apical periodontitis［J］.Oral Microbiol Immunol，2000，15( 3) : 139-150.

［2］Letterio JJ，Roberts AB.Regulation of immune responses by TGF-beta［J］.Annu Rev Immunol，1998，16: 137-161.

［3］潘倩茹，呂芳麗，黃博，等.肥大細(xì)胞脫顆粒在牙周炎病理中的作用［J］.實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2012，28 ( 3) : 316-319.

［4］靳華，施慶顏，梁經(jīng)文，等.肥大細(xì)胞干細(xì)胞因子在人慢性根尖周病中的表達(dá)［J］.中國病理生理雜志，2014，30( 12) : 2243-2248.

［5］Nair PN.Apical periodontitis: a dynamic encounter between root canal infection and host response［J］.Periodontol 2000，1997，13: 121-148.

［6］Wilson M，Reddi K，Henderson B.Cytokine-inducing components of periodontopathogenic bacteria［J］.J Periodontal Res，1996，31( 6) : 393-407.

［7］Fonseca-Silva T，Santos CC，Alves LR，et al.Detection and quantification of mast cell，vascular endothelial growth factor，and microvessel density in human inflammatory periapical cysts and granulomas［J］.Int Endod J，2012，45( 9) : 859-864.

［8］Kabashima H，Nagata K，Maeda K，et al.Involvement of substance P，mast cells，TNF-alpha and ICAM-1 in the infiltration of inflammatory cells in human periapical granulomas［J］.J Oral Pathol Med，2002，31( 3) : 175-180.

［9］Marton I，Nemes Z，Harmati S.Quantitative significance of IgE-producing plasma cells and tissue distribution of mast cells in apical periodontitis［J］.Oral Microbiol Immunol，1990，5( 1) : 46-48.

［10］Colic M，Gazivoda D，Vucevic D，et al.Proinflammatory and immunoregulatory mechanisms in periapical lesions ［J］.Mol Immunol，2009，47( 1) : 101-113.

［11］Bracks IV，Armada L，Gonalves LS，et al.Distribution of mast cells and macrophages and expression of interleukin-6 in periapical cysts［J］.J Endod，2014，40( 1) : 63-68.

［12］Márton I，Nemes Z，Harmati S.Quantitative significance of IgE-producing plasma cells and tissue distribution of mast cells in apical periodontitis［J］.Oral Microbiol Immunol，1990，5( 1) : 46-48.

［13］de Noronha Santos Netto J，Pires FR，da Fonseca EC，et al.Evaluation of mast cells in periapical cysts，dentigerous cysts，and keratocystic odontogenic tumors［J］.J Oral Pathol Med，2012，41( 8) : 630-636.

［14］Drazic R，Sopta J，Minic AJ.Mast cells in periapical lesions: potential role in their pathogenesis［J］.J Oral Pathol Med，2010，39( 3) : 257-262.

［15］Ledesma-Montes C，Garcés-Ortíz M，Rosales-García G，et al.Importance of mast cells in human periapical inflammatory lesions［J］.J Endod，2004，30( 12) : 855-859.

［16］Zhao W，Gomez G，Yu SH，et al.TGF-β1 attenuates mediator release and de novo kit expression by human skin mast cells through a Smad-dependent pathway［J］.J Immunol，2008，181( 10) : 7263-7272.

［17］Gomez G，Ramirez CD，Rivera J，et al.TGF-β1 inhibits mast cell FcεRI expression［J］.J Immunol，2005，174 ( 10) : 5987-5993.

［18］Garcia-Sanchez O，Lopez-Hernandez FJ，Lopez-Novoa JM.An integrative view on the role of TGF-beta in the progressive tubular deletion associated with chronic kidney disease［J］.Kidney Int，2010，77( 11) : 950-955.

［19］Lopez-Novoa JM，Nieto MA.Inflammation and EMT: an alliance towards organ fibrosis and cancer progression［J］.EMBO Mol Med，2009，1( 6-7) : 303-314.

Expression of transforming growth factor-β on mast cells in human chronic periapical diseases

YIN Xiao-ping1，CHEN Ke2，XIE Jin-qiang1，HUANG Shi-guang1
(1Faculty of Dentistry，School of Medicine，Jinan University，Guangzhou 510632，China;2Department of Stomatology，Guangzhou Women and Children Medical Centre，Guangzhou 510623，China.E-mail: thshg@126.com)

［ABSTRACT］AIM: To investigate the distribution of mast cells ( MCs) and the expression of transforming growth factor-β( TGF-β) on tryptase positive MCs in different types of human periapical diseases.METHODS: Total 78 cases of specimens were involved in this study，including healthy control，periapical cyst and periapical granuloma.The tissue samples were fixed in 10% formalin for at least 48 h，stained with hematoxylin and eosin for histopathological examination，stained with toluidine blue staining for identifying MCs and MCs degranulation，and stained with double immunofluorescence for identification of tryptase-TGF-β double positive MCs.RESULTS: The density of tryptase-TGF-β double positive MCs in the periapical lesions was significantly higher than that in the healthy controls ( P＜0. 01).The number of TGF-β positive MCs in the periapical cyst was significantly higher than that in the periapical granuloma ( P＜0. 01).Compared with toluidine blue staining，the number of MCs with double immunofluorescence staining significantly increased ( P＜0. 01).CONCLUSION: The TGF-β positive MCs may play an important role in the pathogenesis of human chronic periapical diseases，particularly in the formation of fibrous tissue in periapical cyst.Double immunofluorescence staining is more sensitive than the traditional toluidine blue staining for identifying MCs.

［KEY WORDS］Chronic periapical diseases; Mast cells; Tryptase; Transforming growth factor-β

通訊作者△Tel: 020-85221165; E-mail: thshg@126. com

*［基金項(xiàng)目］廣東省社會發(fā)展領(lǐng)域科技計劃( No. 2013B021800043)

［收稿日期］2015-01-16［修回日期］2015-03-25

［文章編號］1000-4718( 2015)07-1247-06

［中圖分類號］R781. 34; R392. 3

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A

doi:10.3969/j.issn.1000-4718.2015.07.017