氨氯地平聯(lián)合辛伐他汀對高脂飲食兔肝臟高密度脂蛋白受體的影響

龐 棟 李曉燕 王 輝

·實驗研究·

氨氯地平聯(lián)合辛伐他汀對高脂飲食兔肝臟高密度脂蛋白受體的影響

龐 棟 李曉燕 王 輝

目的 探討高脂飲食及氨氯地平、辛伐他汀對兔肝臟高密度脂蛋白受體的影響。方法 日本長耳兔50只隨機分為對照組、模型組、氨氯地平組、辛伐他汀組、聯(lián)合用藥組, 各10只。分別給予普通飼料及高脂飼料并加用藥物。于實驗開始、24周末測血脂水平, 測定肝臟高密度脂蛋白受體(HDLR)的表達。結(jié)果 模型組兔血漿總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)高于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。氨氯地平組TC、TG、LDL-C高于對照組, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。辛伐他汀組TC、TG、LDL-C降低, 高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)升高, 較模型組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。聯(lián)合用藥組TC、LDL-C、TG降低, HDL-C升高, 較對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05), 較模型組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。結(jié)論 氨氯地平不影響血脂水平, 增加肝臟HDLR表達；辛伐他汀可明顯調(diào)節(jié)血脂, 增加肝臟HDLR表達；辛伐他汀、氨氯地平聯(lián)合應(yīng)用較單藥更明顯增加肝臟HDLR表達。

高脂血癥；氨氯地平聯(lián)合辛伐他汀；高密度脂蛋白受體

作為臨床多發(fā)病, 高血壓、高脂血癥是動脈粥樣硬化的重要危險因素且常合并存在, 如何選擇藥物以更好的控制病情, 預(yù)防并發(fā)癥的發(fā)生尤其重要。大規(guī)模臨床試驗證實氨氯地平聯(lián)合辛伐他汀對改善預(yù)后有協(xié)同作用, 具體機制不明。本文就氨氯地平聯(lián)合辛伐他汀對高脂飲食兔肝臟HDLR的作用進行研究, 為高血壓合并高血脂患者臨床用藥提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 實驗動物為日本長耳兔(雄性)50只, 體重2.0～ 2.5 kg, 購自山東大學(xué)實驗動物中心。

1.2 儀器與試劑 主要儀器：美國羅氏日立生化儀Modular DPP；WMK-08型電熱恒溫培養(yǎng)箱, OLYMPUS BH-2型光學(xué)顯微鏡。主要試劑：HDL-C、LDL-C、TC、TG檢測試劑盒,購自四川省邁克科技有限責(zé)任公司；兔抗HDLR, 生物素化山羊抗兔IgG, SABC免疫組化試劑盒, DAB顯色試劑盒, 均購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.3 方法

1.3.1 動物分組與處理 50只日本長耳兔隨機分為五組,分別為對照組、模型組、氨氯地平組、辛伐他汀組及聯(lián)合用藥組, 每組10只。對照組給予普通飼料；模型組及藥物組(氨氯地平組、辛伐他汀組及聯(lián)合用藥組)給予高膽固醇飼料, 12周后改為普通飼料12周。藥物組中12周后氨氯地平組給予氨氯地平5 mg/(kg· d)；辛伐他汀組給予辛伐他汀2 mg/(kg·d)；聯(lián)合用藥組給予氨氯地平5 mg/(kg·d)+辛伐他汀2 mg/(kg·d)灌胃, 自由飲水。

1.3.2 血脂 實驗前后禁食, 后耳緣靜脈取血, 測HDL-C、LDL-C、TC、TG濃度。

1.3.3 肝臟HDLR表達 抗原修復(fù), 3%H2O2、封閉液孵育,加一抗4℃過夜, 加二抗37℃ 孵育, DAB顯色。按Fromowitz陽性細(xì)胞半定量分級法［1］觀察結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS11.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兔血脂水平比較 對照組兔血脂實驗前、后比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。實驗前模型組與藥物組兔血脂與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。實驗?zāi)? 模型組兔血漿TC、TG、LDL-C高于對照組, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。氨氯地平組TC、TG、LDL-C高于對照組, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。辛伐他汀組TC、TG、LDL-C降低, HDL-C升高, 較模型組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。聯(lián)合用藥組TC、LDL-C、TG降低, HDL-C升高, 較對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05), 較模型組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。見表1。

表1 五組兔血漿脂質(zhì)水平檢測指標(biāo)比較(, mmol/L)

表1 五組兔血漿脂質(zhì)水平檢測指標(biāo)比較(, mmol/L)

注：與對照組比較,aP＜0.01,cP＜0.05；與模型組比較,bP＜0.01

組別 TC HDL-C LDL-C TG實驗前 實驗后 實驗前 實驗后 實驗前 實驗后 實驗前 實驗后對照組 1.65±0.40 1.68±0.38 0.87±0.28 0.90±0.25 0.61±0.11 0.60±0.14 0.85±0.26 0.87±0.22模型組 1.63±0.34 9.07±1.86a 0.83±0.13 0.89±0.16 0.64±0.28 7.96±1.78a 0.78±0.24 1.13±0.32a氨氯地平組 1.73±0.33 8.71±1.81a 0.77±0.16 1.07±0.25 0.79±0.19 7.42±1.55a 0.85±0.25 1.13±0.31a辛伐他汀組 1.67±0.24 2.28±0.34b 0.83±0.19 1.19±0.27b 0.68±0.11 0.86±0.27b 2.28±0.34 1.91±0.35b聯(lián)合用藥組 1.73±0.31 2.08±0.45bc 0.99±0.34 0.93±0.30bc 0.77±0.27 0.68±0.11bc 2.08±0.45 1.96±0.48bc

2.2 肝臟HDLR的表達 光鏡下見胞漿內(nèi)棕色顆粒。對照組陽性率90%, 強陽性率10%；模型組陽性率90%, 強陽性率30%, 較對照組增加, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)；氨氯地平組陽性率100%, 強陽性率40%, 辛伐他汀組陽性率100%,強陽性率30%, 均較模型組增多, 差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；聯(lián)合用藥組陽性率100%, 強陽性率50%, 較模型組增多, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01), 與辛伐他汀組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。

3 討論

高密度脂蛋白主要在肝臟合成, 是機體膽固醇從肝外周組織逆向轉(zhuǎn)運回肝臟的主要形式, 可能通過抗氧化應(yīng)激作用、抗炎作用等［2］發(fā)揮抗動脈粥樣硬化作用。肝內(nèi)HDLR可能通過促進發(fā)生動脈粥樣硬化部位膽固醇的流出, 并攝取高密度脂蛋白(HDL)中氧化膽固醇酯以形成保護體系從而發(fā)揮預(yù)防動脈粥樣硬化的作用, 其表達受多種因素的影響［3］。

氨氯地平是常用的二氫吡啶類長效鈣通道阻滯劑, 既往研究顯示不僅可以平穩(wěn)、高效的降壓, 還可通過改善血管內(nèi)皮功能來抑制動脈粥樣硬化形成, 甚至逆轉(zhuǎn)已形成的動脈粥樣硬化, 更加顯著的減緩頸總動脈內(nèi)-中膜的增厚［4］。他汀類藥物是作用極強的降膽固醇藥物, 有抑制血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)增殖、遷移, 改善內(nèi)皮依賴性血管舒張功能等非調(diào)脂作用［5］, 能有效減緩冠狀動脈病變進展。Oqihara等［6］大規(guī)模臨床試驗顯示, 氨氯地平聯(lián)合他汀類藥物在穩(wěn)定斑塊、治療穩(wěn)定性冠心病等方面有協(xié)同、疊加作用。

綜上所述, 氨氯地平對兔血脂無明顯作用, 但可影響肝臟脂蛋白受體表達；辛伐他汀能升高血漿HDL水平, 使兔肝臟HDLR的表達增加。氨氯地平與辛伐他汀聯(lián)合應(yīng)用對血脂有與辛伐他汀相似的作用, 但對肝臟脂蛋白受體表達的調(diào)節(jié)較單藥明顯, 提示兩者聯(lián)用可以更好的調(diào)節(jié)脂代謝。

［1］ Fromowitz FB, Viola MV, Chao S, et al.Ras p21 expression in the progression of breast cancer.Hum Pathol, 1987, 18(12):1268-1275.

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［3］ 付寶才, 楊林海, 李強, 等.脂蛋白受體與動脈粥樣硬化相關(guān)關(guān)系研究進展.醫(yī)學(xué)綜述, 2005, 11(3): 208-211.

［4］ 陳良, 張梅, 蕭亞偉, 等.超聲技術(shù)評價美托洛爾和氨氯地平對易損斑塊的作用.中華超聲影像學(xué)雜志, 2007, 16(10):898-901.

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10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.28.206

2015-04-02］

250013 濟南醫(yī)院(龐棟 王輝)；榮成市人民醫(yī)院(李曉燕)