正交試驗法確定金蓮花中總黃酮最佳提取工藝

張黎黎++胡雪芬++王秀麗

摘 要：目的 研究金蓮花提取工藝。方法 采用正交試驗法對金蓮花中總黃酮進行提取，以出膏率和紫外分光光度法測定的總黃酮得率為指標，考察乙醇濃度（A）、回流時間（B、回流次數(shù)（C）、料液比（D）4個因素。檢測波長為500 nm。結(jié)果 優(yōu)化的金蓮花提取條件為A2B1C3D2。結(jié)論 采用65%乙醇，料液比為1∶10，回流3次，每次2小時為最佳工藝，其中回流次數(shù)為顯著性因素。黃酮最高含量為15.74%，最高出膏率為45.72%。

關(guān)鍵詞：金蓮花 總黃酮 紫外分光光度法 正交試驗法

中圖分類號：S859 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2015）02（a）-0001-02

金蓮花為毛茛科植物金蓮花屬植物金蓮花的干燥花，又名旱金蓮、旱地蓮、金芙蓉等，為多年生草本植物。在我國金蓮花有著悠久的藥用歷史，史載于清代。主要分布于東北、華北、西北，野生資源十分豐富[1]，具有清熱、解毒、抑菌作用。趙學敏所著《本草綱目拾遺》，其謂“金蓮花出五臺山，又名旱地蓮，一名金芙蓉，色深黃，味滑苦，無毒，性寒，治口瘡喉腫，伏熱牙宣，耳痛目痛，明目，解嵐瘴，疔瘡，大毒諸風”?？梢娊鹕徎ㄋ幚碜饔脧V泛，其臨床主要用于治療上呼吸道感染、咽炎、扁桃腺炎等疾病[2]。金蓮花所含成分主要有葒草苷、牡荊苷等黃酮類化學物及Trollioside、2"-O-（2"-methylbutyry1）isoswertisin等有機酸類成分[3]。目前的研究多數(shù)認為黃酮類化合物是金蓮花主要抗菌消炎的有效活性成分之一，因此高效率地提取金蓮花中的黃酮類成分、確定最佳的提取純化方法，是人們研究的焦點[4]。該文采用正交試驗對金蓮花進行提取并以蘆?。ㄒ蛱J丁母核與葒草苷相似）為對照品對提取物中總黃酮進行測定，依據(jù)黃酮類化合物含量及提取物出膏率確定最佳提取工藝。

1 樣品、儀器與藥品

1.1 樣品

金蓮花采自大興安嶺地區(qū)，經(jīng)大興安嶺藥檢所鑒定確定為正品金蓮花。

1.2 樣品

UV-260紫外可見分光光度計（日本島津）；SC202-00型電熱恒溫干燥器（上海醫(yī)療器械五廠）；超級恒溫水浴鍋（江蘇金壇環(huán)宇科學儀器廠）JPCQ0628型超聲波清洗機（超聲波頻率28 kHz，武漢嘉鵬電子有限公司）。

1.3 標準品

蘆丁購自中國藥品生物制品鑒定所。

1.4 藥品

所用試劑亞硝酸鈉、氫氧化鈉、硝酸鋁均為分析純。

2 提取方法

2.1 標準曲線的制定

2.1.1 標準液的配制

精密稱取120 ℃干燥至恒重的蘆丁標準品13.0 mg，置于100 mL容量瓶中，加30%乙醇適量，微熱，使蘆丁溶解，冷卻后用30%乙醇定容至刻度，搖勻，備用。

2.1.2 蘆丁標準曲線的繪制

精密吸取蘆丁的標準液0、0.50、0.75、1.00、1.5、2.0 mL置于10 mL容量瓶中，用30%乙醇補充至5 mL，再分別加入5%NaNO2溶液0.3 mL、搖勻放置6 min，再加入10%Al（NO3）3溶液0.3 mL，搖勻放置6 min，加入4%NaOH溶液2 mL，此時溶液呈紅色，搖勻，加入30%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min，以0號為空白，以500 nm波長處測定吸光度值[5]，得數(shù)據(jù)圖1所示。

由圖1得標準曲線方程為：Y=2.5198X

-0.0049；相關(guān)系數(shù)r=0.9998，標準品在0～0.26 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系?？砂礃藴是€法進行定量分析。

2.1.3 穩(wěn)定性

用與繪制吸收曲線配制相同的方法配制的樣品進行穩(wěn)定性實驗，結(jié)果表明：樣品放置30 min，測得其吸光度值幾乎不變。

2.2 正交試驗工藝優(yōu)化

2.2.1 因素水平表的制定

以乙醇濃度、回流時間、回流次數(shù)、料液比為考察因素，每個因素設(shè)定三水平安排正交試驗，見表1。

根據(jù)表1因素水平表制定L9（34）正交表，進行9次試驗，為保證實驗重現(xiàn)性，每次實驗平行3次，確定最佳提取工藝。

2.2.2 樣品液的制備

精密稱取100 ℃恒溫干燥至恒重的金蓮花藥材5 g，用萬能粉碎機打成20目左右的粗粉，置于圓底燒瓶中，取適量所用濃度的乙醇溶液浸泡1 h，按規(guī)定時間回流，過濾得提取液。將提取液濃縮至50 mL，取1 mL，置50 mL容量瓶中，定容，取1 mL按照2.1.1方法操作，得數(shù)據(jù)如表2所示。

3 結(jié)果與討論

由表3可以看出，實驗4的黃酮含量最高，經(jīng)方差分析得出回流次數(shù)影響最顯著，最佳工藝為A2B1C3D2，即采用65%乙醇，料液比為1∶10，回流3次，每次2小時為最佳工藝，其中回流次數(shù)為顯著性因素。在本實驗中黃酮含量最高可達15.74%，遠高于藥典標準；同時在9次試驗中，煎煮時間對出膏率影響最大，最高可達45.72，也高于藥典標準。通過本實驗可為金蓮花總黃酮最佳提取工藝提供理論依據(jù)，同時說明大興安嶺地區(qū)野生金蓮花總黃酮含量高，藥效佳，大興安嶺地區(qū)野生金蓮花具有巨大的開發(fā)價值。

參考文獻

[1] 北京師范大學生物系.北京植物志（下冊）[M].北京出版社，1993：224.

[2] 王平.金蓮花沖劑治療上呼吸道感染療效觀察[J].中成藥，1996，18（3）：50.

[3] 李勝銀，蔡金娜，劉江云等.金蓮花化學成分研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2008，4（7）：18.

[4] 王建萍，陳治宇.不同提取純化工藝對金蓮花總黃酮含量的影響[J].承德醫(yī)學院學報，2008，25（4）：356.

[5] 譚曉虹，方秀梅.金蓮花中總黃酮含量的測定[J].張家口醫(yī)學院學報，2002，19（6）：37.endprint