CD4⁺T細(xì)胞在抗腫瘤過繼性免疫治療中作用的分析

[摘要] 目的 觀察并分析CIK細(xì)胞中CD4+T細(xì)胞的Th1/Th2亞群分布情況。方法 采用體外試驗(yàn)大規(guī)模擴(kuò)增CIK細(xì)胞，采用磁珠法對其中的CD4+T細(xì)胞進(jìn)行純化處理。然后采用熒光定量RT-PCR、ELISA以及胞內(nèi)染色法對培養(yǎng)前后Th1/Th2類細(xì)胞因子的基因表達(dá)變化和分泌量、Th1/Th2細(xì)胞亞群定的比例進(jìn)行檢測。結(jié)果 富集CD4+T細(xì)胞的純度高達(dá)96%，在CIK細(xì)胞中，Th2亞群較PBMC顯著降低，而Th0和Th1亞群的比例顯著升高（P<0.05）。在CD4+TCIK細(xì)胞中，TGF-β和IL-10等Th2類細(xì)胞因子的分泌量明顯降低（P<0.05），而IFN-γ和IL-2等Th1類細(xì)胞因子的分泌量明顯增高（P<0.05）。結(jié)論 CIK細(xì)胞中的CD4+T細(xì)胞具有明顯的Th1優(yōu)勢，有利于推動抗腫瘤免疫反應(yīng)的發(fā)展。

[關(guān)鍵詞] CD4+T細(xì)胞；抗腫瘤過繼性免疫治療；臨床作用分析

[中圖分類號] R730.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2015）05（c）-0173-02

[Abstract] Objective Observation and analysis of CIK cells of Th1/Th2 CD4+T cell subsets distribution. Methods Large-scale expansion by in vitro test of CIK cells， by using the method of magnetic beads purification processing CD4+T cells. Then using fluorescence quantitative rt-pcr and ELISA and intracellular staining method to cultivate the Th1/Th2 cytokines gene expression before and after the change and production， the proportion of Th1/Th2 cells subsets for testing. Results Concentration is as high as 96%， the purity of CD4+T cells in CIK cells， the Th2 subsets， no significant change in the PBMC and Th0 and a significant increase in the proportion of Th1 subsets（P<0.05）. In TCIK CD4+cells， the TGF-beta and IL-10 Th2 type cytokines secretion decreased obviously（P<0.05）， while IFN-gamma and IL-2 class Th1 cytokine secretion increased obviously（P<0.05）. Conclusion CIK cells of CD4+T cells has obvious advantages of Th1， is beneficial to promote the development of antitumor immune responses.

[Key words] CD4+T cells；Anti-tumor adoptive immunotherapy； Clinical effect analysis

CIK細(xì)胞是一種群異質(zhì)細(xì)胞，具有較高的殺瘤活性且增值速度非?？?，幾乎不會影響人體的正常造血，正因?yàn)閼{借著這些特征，在臨床治療血液系統(tǒng)疾病時，CIK細(xì)胞顯著優(yōu)于其他過繼性免疫治療方式，并且在臨床治療部分感染性疾病的過程中表現(xiàn)出了強(qiáng)大的優(yōu)勢[1]。為觀察并分析CIK細(xì)胞中CD4+T細(xì)胞的Th1/Th2亞群分布情況，該研究選取2013年7月—2014年7月在該院進(jìn)行治療的20例惡性實(shí)體瘤患者為研究對象進(jìn)行分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選取2013年7月—2014年7月在該院進(jìn)行治療的20例惡性實(shí)體瘤患者為研究對象，其中男性患者12例，女性患者8例，年齡分布為40～75歲，平均年齡為（57.5±0.5）歲。所有患者的腫瘤類型為：甲狀腺癌患者2例、直腸癌患者3例、乳腺癌患者4例、腎癌患者5例、肺癌患者6例。術(shù)后9例，晚期轉(zhuǎn)移11例。

1.2 方法

采用CS3000plus血細(xì)胞分離機(jī)富集所有患者的自體外周血于單個核細(xì)胞之后，用Ficoll淋巴細(xì)胞分離液把PBMC分離出來，應(yīng)用濃度為5%的AB血清的1 640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞的濃度為1～3×106/mL。培養(yǎng)的第一天，加入1 000 u/mL的人重組IFN-γ、100 u/mL的人重組IL-1α以及100 ng/mL的抗人CD3單抗；在培養(yǎng)的第一天，加入300 u/mL的人重組IL-2，連續(xù)培養(yǎng)11 d左右之后進(jìn)行細(xì)胞的收集。

1.3 統(tǒng)計方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件對該研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，計量數(shù)據(jù)用（x±s）進(jìn)行表示，組間比較采用t值進(jìn)行檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義[2]。

2 結(jié)果

2.1 CIK細(xì)胞中CD4+T細(xì)胞的純化以及Th1/Th2亞群的分布

經(jīng)過純化，富集CD4+T細(xì)胞的亞群純度達(dá)到96%，存活率為95%。對比CIK和PBMC的CD4+T細(xì)胞中的Th1/Th2亞群分布情況：Th0和Th1亞群的比例顯著升高，數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但Th2亞群無顯著變化（P<0.05），見表1。

2.2 CIK和PBMC細(xì)胞中CD4+T細(xì)胞培養(yǎng)上清中多種細(xì)胞因子的含量變化

在CD4+TCIK細(xì)胞中，TGF-β和IL-10等Th2類細(xì)胞因子的分泌量明顯降低（P<0.05），而IFN-γ和IL-2等Th1類細(xì)胞因子的分泌量明顯增高（P<0.05），見表2。

3 討論

Schmidt-Wolf GD等研究人員發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞亞群同樣存在于小鼠體內(nèi)，其功能各不相同，還能夠各自分泌出不同的細(xì)胞因子，該細(xì)胞亞群被稱之為輔助性T細(xì)胞（Th）[3]。之后，F(xiàn)iorentino DF等研究人員進(jìn)一步證實(shí)在人體內(nèi)同樣存在和小鼠體內(nèi)相似的Th細(xì)胞亞群[4]。也是因?yàn)樵摷?xì)胞亞群具有不同的功能，因而使得它們在部分疾病的病情發(fā)展變化當(dāng)中具有不同的表現(xiàn)，該研究人員構(gòu)思期望利用對細(xì)胞分化調(diào)控來打破細(xì)胞亞群的平衡狀態(tài)，通過這種方式實(shí)現(xiàn)預(yù)防某些疾病和治療某些疾病的目的[5-6]。

該研究結(jié)果顯示，20例惡性實(shí)體瘤患者經(jīng)過11 d左右的多因子體外誘導(dǎo)之后，在CIK細(xì)胞中，Th2亞群中的TGF-β和IL-10含量分別為（302.0±61.9）和（530.4±407.0），較PBMC顯著降低，而Th0和Th1亞群的比例較PBMC顯著升高（P<0.05），特別是CD3+CD56+細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的比例，對比培養(yǎng)前，數(shù)量顯著升高。由此表明，在CIK細(xì)胞中，CD4+T細(xì)胞具有明顯的Th1優(yōu)勢。相關(guān)研究證明，張瑞萍等[7]研究人員證明，在CIK細(xì)胞中，殺傷性CD8+T細(xì)胞和雙陽性CD3+CD56+細(xì)胞屬于主要的效應(yīng)細(xì)胞，能夠構(gòu)成CIK細(xì)胞的強(qiáng)大殺瘤活性。但從目前的實(shí)際來看，在整個CIK細(xì)胞中，通過培養(yǎng)之后迅速升高的CD4+T細(xì)胞的作用機(jī)制還沒有得到充分明確，因而需要研究人員對CD4+T細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步地研究[8]。

綜上所述，在CIK細(xì)胞中，CD4+T細(xì)胞具有顯著的Th1優(yōu)勢，與更大的數(shù)量相結(jié)合，從而顯著提高實(shí)體瘤患者體內(nèi)各種免疫效應(yīng)細(xì)胞的功能，有助于促進(jìn)抗腫瘤免疫反應(yīng)的發(fā)展。

[參考文獻(xiàn)]

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[7] 張瑞萍，金增強(qiáng).表達(dá)嵌合T細(xì)胞受體的T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤過繼性免疫治療作用研究[J].腫瘤，2011，41（10）：55-57.

[8] 任秀寶.樹突狀細(xì)胞對CIK細(xì)胞中CD4+CD25+T細(xì)胞數(shù)量及免疫調(diào)節(jié)作用的影響[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，2012，66（44）：83-85.

（收稿日期：2015-02-21）