依達(dá)拉奉對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用研究

[摘要] 目的 探討依達(dá)拉奉對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法 將36只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、NS組及依達(dá)拉奉組，制備SD腦缺血再灌注模型，依達(dá)拉奉組在造模后即刻和12h分別給予依達(dá)拉奉腹腔注射，假手術(shù)組和NS組分別給予生理鹽水腹腔注射，比較3組神經(jīng)功能缺損評(píng)分及SOD、MDA含量。結(jié)果 與假手術(shù)組比較，NS組與依達(dá)拉奉組神經(jīng)功能缺損評(píng)分分別為（2.74±0.56）、（1.38±0.22）分均明顯升高（P<0.05），而與NS組比較，依達(dá)拉奉組神經(jīng)功能缺損評(píng)分則明顯下降（P<0.05）；與假手術(shù)組比較，NS組與依達(dá)拉奉組SOD活性分別為（113.29±7.61）、（144.93±10.48）U/mL明顯下降（P<0.05），而與NS組相比較，依達(dá)拉奉組SOD活性明顯增高（P<0.05）；與假手術(shù)組比較，NS組與依達(dá)拉奉組MDA水平分別為（3.71±1.24）、（2.25±0.98）nmol/mL明顯升高（P<0.05），而與NS組相比較，依達(dá)拉奉組MDA水平明顯下降。結(jié)論 依達(dá)拉奉對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷具有明顯的保護(hù)作用。

[關(guān)鍵詞] 依達(dá)拉奉；大鼠；腦缺血再灌注損傷；保護(hù)作用

[中圖分類號(hào)] R96 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2015）05（c）-0114-02

[Abstract] Objective To investigate the protective effect of edaravone on cerebral ischemia reperfusion injury in rats. Methods 36 SD rats were randomly divided into sham operation group， NS group and edaravone group， preparation of SD in cerebral ischemia reperfusion model group， edaravone immediately after modeling and 12 h were given intraperitoneal injection of edaravone， sham operation group and NS group were given intraperitoneal injection of normal saline， neural function defect score and SOD， the content of MDA of 3 groups. Results The Compared with the sham operation group， NS group and edaravone group， the score of neural function defect were （2.74±0.56）， （1.38±0.22） were significantly increased （P<0.05）， compared with NS group， the score of neural function defect edaravone group decreased significantly （P<0.05）； compared with the sham operation group NS group and edaravone group， the activity of SOD were （113.29±7.61）， （144.93±10.48） U/ml decreased significantly （P<0.05）， and compared with the NS group， edaravone group SOD activity obviously increased （P<0.05）； compared with the sham operation group， NS group and edaravone group MDA horizontal don't as （3.71±1.24）， （2.25±0.98） nmol/ml increased significantly （P<0.05）， and compared with the NS group， the levels of MDA of edaravone group decreased significantly. Conclusion edaravone on cerebral ischemia reperfusion injury has obvious protective effect.

[Key words] Edaravone； Rat； Cerebral ischemia reperfusion injury； Protective effect

近年來(lái)的研究表明自由基的連鎖反應(yīng)是腦缺血的核心病理環(huán)節(jié)，過(guò)多的自由基在腦缺血再灌注損傷中占據(jù)極其重要地位，可加重腦缺血損傷而導(dǎo)致神經(jīng)功能損害[1]。依達(dá)拉奉是一種由日本Mitsubishi-Tokyo公司研制開發(fā)的新型自由基清除劑，其血腦屏障通透性高，可通過(guò)清除自由基、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)等來(lái)發(fā)揮強(qiáng)大的腦缺血保護(hù)作用，目前認(rèn)為依達(dá)拉奉的作用機(jī)制極為復(fù)雜，很多機(jī)制仍未完全闡明[2]。該研究選取2012年6月—2013年2月間健康雄性SD大鼠為研究對(duì)象，主要從抗自由基損傷方面來(lái)初步探討依達(dá)拉奉對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，為該藥物在腦缺血治療上提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取健康雄性SD大鼠共36只，體重250～300 g。將大鼠隨機(jī)分為3組，每組12只，分別為假手術(shù)組、NS組及依達(dá)拉奉組。依達(dá)拉奉注射液由江蘇先聲藥業(yè)有限公司提供，超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）試劑盒均由上海杰美基因醫(yī)藥科技有限公司提供。

1.2 腦缺血再灌注模型的制備

采用Longa線栓法[3]制備大鼠局灶性腦缺血模型。先以10%水合氯醛（0.35ml/100g）腹腔注射麻醉，再參照Longa的大鼠中動(dòng)脈內(nèi)栓線阻斷法，阻塞大腦中動(dòng)脈，2 h后拔出線栓實(shí)現(xiàn)再灌注。假手術(shù)組除了不插入線栓外，其他操作均相同。依達(dá)拉奉組分別在再灌注即刻以及再灌注后12 h給予依達(dá)拉奉（3 mg/kg）腹腔內(nèi)注射，假手術(shù)組與NS組均在相同時(shí)間給予等量0.9%生理鹽水腹腔內(nèi)注射。

1.3 觀察項(xiàng)目

再灌注后24 h對(duì)大鼠神經(jīng)行為進(jìn)行觀察，參照Longa等[3]制定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分：無(wú)神經(jīng)功能缺失為0分；不能完全伸展對(duì)側(cè)前爪為1分；爬行時(shí)出現(xiàn)對(duì)側(cè)轉(zhuǎn)圈為2分；行走時(shí)出現(xiàn)對(duì)側(cè)傾倒為3分；意識(shí)喪失，無(wú)法自行行走為4分。

神經(jīng)功能缺損評(píng)分后斷頭取腦，將腦組織剪碎后勻漿，勻漿液離心去上清液，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書嚴(yán)格操作，分別采用黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法測(cè)定SOD與MDA含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)或者單因素方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P<0.05時(shí)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 神經(jīng)功能缺損評(píng)分

與假手術(shù)組比較，NS組與依達(dá)拉奉組神經(jīng)功能缺損評(píng)分均明顯升高（P<0.05），而與NS組比較，依達(dá)拉奉組神經(jīng)功能缺損評(píng)分則明顯下降（P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2 SOD與MDA含量比較

與假手術(shù)組比較，NS組與依達(dá)拉奉組SOD活性明顯下降，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而與NS組相比較，依達(dá)拉奉組SOD活性明顯增高，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；與假手術(shù)組比較，NS組與依達(dá)拉奉組MDA水平明顯升高，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而與NS組相比較，依達(dá)拉奉組MDA水平明顯下降，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

急性腦缺血時(shí)在局部血管閉塞后，在周圍缺血半暗帶區(qū)由于存在側(cè)枝循環(huán)，因此仍有大量可存活的神經(jīng)元存在，因此需盡快恢復(fù)血供以保護(hù)和促進(jìn)這些認(rèn)可存活的神經(jīng)元，但同時(shí)閉塞的腦血管再通后可能會(huì)進(jìn)一步加重缺血所致的損傷，臨床稱之為腦缺血再灌注損傷現(xiàn)象[4]。大量的的研究顯示腦缺血再灌注時(shí)可產(chǎn)生大量的有毒自由基，導(dǎo)致生物膜結(jié)構(gòu)脂質(zhì)過(guò)氧化，引起膜結(jié)構(gòu)破壞、膜通透性改變，從而進(jìn)一步加重神經(jīng)細(xì)胞、血管細(xì)胞的損傷[5]。SOD是一種能夠在細(xì)胞內(nèi)對(duì)抗氧自由基的金屬蛋白酶，能通過(guò)歧化方式來(lái)清除生物體內(nèi)氧自由基，減少或避免生物體受到氧自由基損傷，目前認(rèn)為SOD的活力能在一定程度上反映體積清除氧自由基的能力及腦損傷情況[6]。MDA則是氧自由基與不飽和脂肪酸脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的最終代謝產(chǎn)物，其含量能間接反應(yīng)組織中氧自由基含量及脂質(zhì)過(guò)氧化程度[7]。本研究中發(fā)現(xiàn)NS組MDA含量明顯高于假手術(shù)組，SOD活性則明顯降低，提示在缺血再灌注發(fā)生后氧自由基大量產(chǎn)生，機(jī)體無(wú)法完全清除引起脂質(zhì)過(guò)氧化而導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞損傷、凋亡。

依達(dá)拉奉是一種以陰離子形式存在且具有捕獲自由基能力的活性氧化劑，其提供腦保護(hù)的機(jī)制的多方面的，一方面可將一個(gè)電子轉(zhuǎn)移至自由基后形成依達(dá)拉奉基團(tuán)而破壞脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)；另一方面其作為一種自由基清除劑能有效抑制黃嘌呤與次黃嘌呤氧化酶活性，提高SOD活性和細(xì)胞抗氧化能力，抑制和減少缺血再灌注后自由基的產(chǎn)生[9]；此外，依達(dá)拉奉還能減少白三烯、TNF-α等炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，提高細(xì)胞膜穩(wěn)定性，緩解炎癥反應(yīng)所致的腦損傷，從而有效保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞損傷[9]。本研究結(jié)果顯示依達(dá)拉奉組SOD活性雖然仍未達(dá)到假手術(shù)組的水平，但與NS組相比較已明顯增高，而MDA水平則明顯下降，同時(shí)神經(jīng)功能缺損評(píng)分也明顯降低，提示依達(dá)拉奉能有效對(duì)抗氧自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，從而有效緩解腦缺血再灌注損傷、保護(hù)腦神經(jīng)細(xì)胞。

本研究中，與假手術(shù)組比較，NS組與依達(dá)拉奉組神經(jīng)功能缺損評(píng)分分別為（2.74±0.56）、（1.38±0.22）分均明顯升高（P<0.05），而與NS組比較，依達(dá)拉奉組神經(jīng)功能缺損評(píng)分則明顯下降（P<0.05），提示腦缺血后腦組織神經(jīng)功能受到明顯損傷，而經(jīng)依達(dá)拉奉治療后神經(jīng)功能缺損雖然未能達(dá)到正常情況，但較未治療的NS組有了明顯改善。此外我們采用黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法測(cè)定了大鼠缺血腦組織中的SOD和MDA的表達(dá)，結(jié)果顯示與假手術(shù)組比較，NS組與依達(dá)拉奉組SOD活性分別為（113.29±7.61）、（144.93±10.48）U/mL明顯下降（P<0.05），而與NS組相比較，依達(dá)拉奉組SOD活性明顯增高（P<0.05）；與假手術(shù)組比較，NS組與依達(dá)拉奉組MDA水平分別為（3.71±1.24）、（2.25±0.98）nmol/mL明顯升高（P<0.05），而與NS組相比較，依達(dá)拉奉組MDA水平明顯下降，提示經(jīng)依達(dá)拉奉治療后，缺血腦組織中異常表達(dá)的SOD和MDA獲得了明顯改善，與金培彧等[10]、封亮等[11]的研究結(jié)論相一致。

綜上所述，依達(dá)拉奉作為一種新型的自由基清除劑，在神經(jīng)保護(hù)以及減少腦缺血-再灌注后SOD與MDA異常表達(dá)的改善方面具有顯著作用，值得臨床推廣應(yīng)用。

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（收稿日期：2015-02-26）