EB病毒LMP1基因XhoⅠ位點(diǎn)缺失與高發(fā)區(qū)鼻咽癌相關(guān)性的Meta分析

王宏，劉芡芡，李斐斐，楊垚，譚沁，王云

(1 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室，山東 青島 266021； 2 濟(jì)南軍區(qū)青島第一療養(yǎng)院檢驗(yàn)科；3 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生系； 4 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院口腔學(xué)院)

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EB病毒LMP1基因XhoⅠ位點(diǎn)缺失與高發(fā)區(qū)鼻咽癌相關(guān)性的Meta分析

王宏1，2，劉芡芡1，李斐斐1，楊垚3，譚沁4，王云1

(1 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室，山東 青島 266021； 2 濟(jì)南軍區(qū)青島第一療養(yǎng)院檢驗(yàn)科；3 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生系； 4 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院口腔學(xué)院)

目的 探討EB病毒(EBV)潛伏膜蛋白1(LMP1)基因XhoⅠ位點(diǎn)缺失突變與高發(fā)區(qū)鼻咽癌(NPC)發(fā)生的關(guān)系。方法 檢索PubMed、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)、萬(wàn)方、維普、中國(guó)知網(wǎng)等數(shù)據(jù)庫(kù)，收集發(fā)表于1990年1月1日—2014年12月31日的與LMP1基因XhoⅠ位點(diǎn)缺失突變相關(guān)的文獻(xiàn)，根據(jù)納入與排除標(biāo)準(zhǔn)納入文獻(xiàn)并提取相關(guān)數(shù)據(jù)。采用Stata 12.0軟件進(jìn)行Meta分析，以比值比(OR)和95%可信區(qū)間(95%CI)為效應(yīng)值，采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行分析，并進(jìn)行發(fā)表文獻(xiàn)偏倚評(píng)估。結(jié)果 納入文獻(xiàn)共8篇，病例349例，對(duì)照150例，入選文獻(xiàn)無(wú)發(fā)表偏倚，各研究之間無(wú)異質(zhì)性，各項(xiàng)研究的合并OR值為26.82(95%CI=8.42～85.40)。結(jié)論 EBV LMP1基因XhoⅠ位點(diǎn)缺失突變與高發(fā)區(qū)NPC可能存在相關(guān)性。

鼻咽腫瘤；皰疹病毒4型,人；膜蛋白質(zhì)類；突變；Meta分析

EB病毒(EBV)與鼻咽癌(NPC)發(fā)生密切相關(guān)，由于EBV感染廣泛存在，而NPC發(fā)病存在明顯的地域性，在我國(guó)華南地區(qū)與東南亞地區(qū)高發(fā)，因此是否存在NPC相關(guān)的EBV變異毒株一直備受關(guān)注。EBV潛伏期基因表達(dá)產(chǎn)物在EBV致癌過(guò)程中可能發(fā)揮重要作用，其中潛伏膜蛋白1(LMP1)是公認(rèn)的EBV轉(zhuǎn)化基因和致癌基因，可以轉(zhuǎn)化B細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和上皮細(xì)胞，抑制人上皮細(xì)胞的分化和凋亡，促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移，而且在NPC和鼻腔NK/T細(xì)胞淋巴瘤等多種腫瘤組織中表達(dá)。LMP1可調(diào)節(jié)多種細(xì)胞通路，在NPC的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[1-2]。不同來(lái)源的EBV毒株LMP1基因存在多處序列差異，最初發(fā)現(xiàn)N端第一外顯子丟失XhoⅠ酶切位點(diǎn)導(dǎo)致的XhoⅠ缺失突變和C端第3外顯子30 bp缺失導(dǎo)致的del-LMP1變異[3-4]；后續(xù)有研究根據(jù)LMP1基因特征性的氨基酸改變，將LMP1分為7個(gè)亞型：B95-8、China 1、China 2、China 3、Med、NC和Alaskan[5]。目前關(guān)于XhoⅠ缺失突變和(或)del-LMP1變異與NPC特別是高發(fā)區(qū)NPC發(fā)生的關(guān)系已有多項(xiàng)研究，但是結(jié)果不完全一致。本研究應(yīng)用Meta分析方法探討XhoⅠ缺失突變與高發(fā)區(qū)NPC發(fā)生的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 文獻(xiàn)檢索

檢索數(shù)據(jù)庫(kù)包括PubMed、維普中文科技期刊數(shù)據(jù)庫(kù)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)(CBM)、中國(guó)知網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(kù)(CNKI)，并輔以追溯法以及手工檢索等方法進(jìn)行文獻(xiàn)檢索，使資料盡可能翔盡，語(yǔ)種為英文和中文。其中英文檢索詞為：nasopharyngeal carcinoma OR NPC、Epstein-Barr virus OR EBV、latent membrane protein l OR LMP1 OR XhoⅠ。中文檢索詞為：鼻咽癌、EB病毒、潛伏膜蛋白1。檢索范圍為1990年1月1日—2014年12月31日。

1.2 文獻(xiàn)納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①研究以NPC病人為病例組，病人均來(lái)源于NPC高發(fā)區(qū)，標(biāo)本為腫瘤組織、咽漱液或外周血；對(duì)照人群來(lái)源于同一地區(qū)，包括健康人群、慢性炎癥和傳染性單核細(xì)胞增多癥病人，標(biāo)本為組織、咽漱液或外周血；②各文獻(xiàn)報(bào)告數(shù)據(jù)完整，有病例組和對(duì)照組的觀察人數(shù)及各組XhoⅠ缺失及非缺失頻數(shù)，可以計(jì)算比值比(OR)與95%可信區(qū)間(95%CI)；③同一研究機(jī)構(gòu)和同一作者的重復(fù)研究文獻(xiàn)，選擇病例數(shù)大或最近發(fā)表的1篇。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①非論著類的文獻(xiàn)；②數(shù)據(jù)不完整、無(wú)法提取相關(guān)數(shù)據(jù)以及引用他人數(shù)據(jù)的文獻(xiàn)；③數(shù)據(jù)無(wú)法計(jì)算效應(yīng)值OR與95%CI的文獻(xiàn)。

1.3 數(shù)據(jù)提取

由2名研究者采用統(tǒng)一的數(shù)據(jù)提取表，獨(dú)立提取數(shù)據(jù)；如意見不一致，通過(guò)討論或由第3名研究者協(xié)助解決，最后所有項(xiàng)目都達(dá)成一致。提取的數(shù)據(jù)包括第一作者、地區(qū)、發(fā)表時(shí)間及標(biāo)本類型等。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用Stata 12.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。對(duì)納入的研究進(jìn)行異質(zhì)性檢驗(yàn)，并采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析。對(duì)各研究的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，計(jì)算各研究中分組數(shù)據(jù)及合并數(shù)據(jù)的OR值及其95%CI，繪制森林圖，進(jìn)行Meta分析。以Egger’s法繪制漏斗圖，評(píng)估發(fā)表偏倚。

2 結(jié) 果

2.1 納入文獻(xiàn)的基本情況

在PubMed、維普中文科技期刊數(shù)據(jù)庫(kù)、萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)、CBM、CNKI分別檢索到文獻(xiàn)442、141、167、176、182篇，排除重復(fù)文獻(xiàn)432篇，經(jīng)閱讀題目和文獻(xiàn)摘要排除僅提供LMP1功能或機(jī)制研究而未涉及LMP1基因多態(tài)性的文獻(xiàn)595篇，通過(guò)閱讀全文獲得涉及NPC與XhoⅠ位點(diǎn)缺失文獻(xiàn)24篇。24篇文獻(xiàn)中排除非病例對(duì)照研究10篇，NPC低發(fā)區(qū)文獻(xiàn)4篇，同一研究機(jī)構(gòu)重復(fù)文獻(xiàn)1篇，獲得高發(fā)區(qū)NPC與XhoⅠ位點(diǎn)缺失的文獻(xiàn)共計(jì)9篇，在統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算時(shí)有1篇文獻(xiàn)病例組與對(duì)照組樣本均為XhoⅠ位點(diǎn)缺失型，無(wú)法計(jì)算效應(yīng)值OR與95%CI，故排除[6]。最終納入分析的文獻(xiàn)共8篇[3,7-13]。入選文獻(xiàn)涵蓋了我國(guó)廣東、香港、臺(tái)灣等地區(qū)以及馬來(lái)西亞等NPC的高發(fā)區(qū)，累計(jì)樣本共499例，其中病例組349例，對(duì)照組150例，具體數(shù)據(jù)見表1。

2.2 發(fā)表偏倚分析

Egger’s檢驗(yàn)，P=0.978，文獻(xiàn)在漏斗圖上的分布基本對(duì)稱，表明納入的文獻(xiàn)無(wú)發(fā)表偏倚(圖1)。

2.3 Meta分析

異質(zhì)性分析顯示各研究之間無(wú)異質(zhì)性(I2=22.8%)。隨機(jī)效應(yīng)模型分析結(jié)果顯示，LMP1基因XhoⅠ缺失與高發(fā)區(qū)NPC發(fā)生相關(guān)(合并OR值為26.82，95%CI=8.42～85.40)。見圖2。

表1 納入文獻(xiàn)的基本資料(例)

3 討 論

自1992年CHEN等[3]首次發(fā)現(xiàn)臺(tái)灣NPC中LMP1基因XhoⅠ位點(diǎn)缺失的檢出率(100%，50/50)高于正常人群(30%，6/20)，陸續(xù)有研究對(duì)來(lái)自我國(guó)NPC高發(fā)區(qū)即廣東、香港和臺(tái)灣等地區(qū)的NPC和非NPC人群中XhoⅠ位點(diǎn)缺失突變進(jìn)行了檢測(cè)，所用方法均為PCR結(jié)合酶切。在包含對(duì)照人群的研究中，有研究表明，NPC中XhoⅠ位點(diǎn)缺失突變的檢出率高于對(duì)照人群，從而認(rèn)為XhoⅠ位點(diǎn)缺失突變與NPC的發(fā)生有關(guān)[3,7-10]；但同時(shí)有研究表明，NPC中XhoⅠ位點(diǎn)缺失突變的檢出率與同一地區(qū)健康人群和其他EBV相關(guān)腫瘤如淋巴瘤中的檢出率類似，認(rèn)為XhoⅠ位點(diǎn)缺失突變與NPC發(fā)生無(wú)關(guān)[11-13]。本研究納入的8篇文獻(xiàn)中，5篇報(bào)告有關(guān)聯(lián)性，3篇報(bào)告無(wú)關(guān)聯(lián)性。對(duì)這8篇文獻(xiàn)研究的異質(zhì)性評(píng)估顯示不存在異質(zhì)性，可以采用固定效應(yīng)模型進(jìn)行計(jì)算，但為了使結(jié)果更具說(shuō)服力，本研究采用隨機(jī)效應(yīng)模型計(jì)算，Meta分析顯示LMP1基因XhoⅠ位點(diǎn)缺失突變與高發(fā)區(qū)NPC的發(fā)生相關(guān)，合并OR值為26.82(95%CI=8.42～85.40)。發(fā)表偏倚檢驗(yàn)未見明顯不對(duì)稱漏斗圖，表明Meta分析結(jié)果可信度高。在NPC非高發(fā)區(qū)亦有研究對(duì)NPC及非NPC人群中XhoⅠ位點(diǎn)缺失突變進(jìn)行了檢測(cè)，但檢測(cè)樣本數(shù)少，且病例對(duì)照研究較少，因此本Meta分析沒(méi)有納入NPC低發(fā)區(qū)的文獻(xiàn)。

圖1 發(fā)表偏倚檢測(cè)的Egger’s漏斗圖

圖2 EBV LMP1基因XhoⅠ位點(diǎn)缺失突變與高發(fā)區(qū)NPC關(guān)系Meta分析的森林圖

本研究Meta分析所涉及的人群均來(lái)源于亞洲NPC高發(fā)區(qū)，排除了人群的遺傳異質(zhì)性和種族差異。由于LMP1、EBV核抗原等多種EBV編碼基因在不同地域或人種來(lái)源的EBV毒株呈現(xiàn)不同的變異類型，EBV變異與地域有關(guān)，查閱NPC非高發(fā)區(qū)XhoⅠ位點(diǎn)缺失突變的文獻(xiàn)可見，亞洲地區(qū)也以XhoⅠ位點(diǎn)缺失突變?yōu)橹?，而美洲、歐洲和非洲則以非缺失突變?yōu)橹?，因此在進(jìn)行Meta分析時(shí)，排除地域或人種差異或依據(jù)地域分層分析是必要的。故基于高發(fā)區(qū)病例對(duì)照研究的Meta分析能對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行更客觀系統(tǒng)地評(píng)價(jià)和總結(jié)，提高統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)的效能，有助于揭示EBV基因變異與EBV相關(guān)腫瘤的關(guān)系。但是，本研究能夠納入的文獻(xiàn)偏少，而且本研究對(duì)照組中，納入人群涉及健康人群、傳染性單核細(xì)胞增多癥和慢性炎癥病人，標(biāo)本包括組織、咽漱液和血液，而病例組除個(gè)別咽漱液和血液標(biāo)本以外，均為NPC組織標(biāo)本。以往有研究表明，同一個(gè)體不同部位(如組織、血液)標(biāo)本檢測(cè)到的EBV亞型相同[14-15]，或者不同[16-17]。因此，盡管Meta分析結(jié)果顯示LMP1基因XhoⅠ位點(diǎn)缺失突變可能與高發(fā)區(qū)NPC相關(guān)，但研究病例偏少和標(biāo)本的不一致提示需客觀地評(píng)估結(jié)論的可靠性。

EBV是NPC發(fā)生的重要因素之一，造成NPC地域性分布的原因，除環(huán)境和遺傳因素外，是否存在高致癌性EBV變異毒株一直是研究的熱點(diǎn)問(wèn)題之一。不同來(lái)源EBV存在多種變異，但對(duì)多數(shù)基因如LMP1、EBV核抗原和BZLF1基因的流行病學(xué)研究均未獲得一致的結(jié)論[18]。造成研究結(jié)果差異的原因包括病例數(shù)少、對(duì)照人群設(shè)置不統(tǒng)一及標(biāo)本來(lái)源不一致等，因此，今后應(yīng)進(jìn)行大樣本、多地區(qū)的病例對(duì)照研究，而且應(yīng)合理設(shè)置病例組和對(duì)照組，病例組和對(duì)照組盡量采用相同的標(biāo)本(可以采用多部位取材來(lái)解決該問(wèn)題)，以進(jìn)一步提高研究的一致性和說(shuō)服力。

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(本文編輯 馬偉平)

CORRELATION BETWEEN XHOⅠ LOSS IN LATENT MEMBRANE 1 GENE OF EPSTEIN-BARR VIRUS AND ENDEMIC NASOPHARYNGEAL CARCINOMA: A META ANALYSIS

WANGHong,LIUQianqian,LIFeifei,YANGYao,TANQin,WANGYun

(Department of Microbiology, Qingdao University Medical College, Qingdao 266021, China)

ObjectiveTo investigate the relationship between XhoⅠ loss in latent membrane 1 (LMP1) gene of Epstein-Barr virus and endemic nasopharyngeal carcinoma (NPC).MethodsThe databases of PubMed, CBM, Wanfang, Weipu and CNKI were searched for the literature regarding XhoⅠ loss in LMP1 gene published from January l, 1990 to December 31, 2014, and the related data were collected according to inclusion-and-exclusion criteria. Odds radio (OR) and 95% confidence interval (95%CI) were used to analyze the correlation between XhoⅠ loss and NPC in random effect pooled measure. Egger’s test was used to assess the publication bias.ResultsEight studies including 349 NPC cases and 150 control cases were pooled in this Meta-analysis and no publication bias was found. The pooledORvalue (95%CI) was 26.82 (8.42-85.40).ConclusionThe Meta-analysis suggests the XhoⅠ loss in LMP1 gene of EBV is probably associated with endemic nasopharyngeal carcinoma.

nasopharyngeal neoplasms; herpesvirus 4, human; membrane proteins; mutation; Meta-analysis

2015-03-16;

2015-06-10

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81171571)和青島市科技局資助項(xiàng)目(13-1-3-50-nsh)

王宏(1984-)，女，碩士研究生。

王云(1970-)，女，博士，教授，碩士生導(dǎo)師。

R739.6

A

1008-0341(2015)04-0398-04