飼料膽堿含量對斜帶石斑魚生長性能、體成分、肝臟膽堿含量及脂肪代謝酶活性的影響

覃笛根 董曉慧,2* 譚北平,2 楊奇慧 遲淑艷

劉泓宇1 章 雙1 陳效儒3

(1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料實驗室，湛江524088；2.南海生物資源開發(fā)與利用協(xié)同創(chuàng)新中心，廣州510275；3.通威股份有限公司，成都610041)

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飼料膽堿含量對斜帶石斑魚生長性能、體成分、肝臟膽堿含量及脂肪代謝酶活性的影響

覃笛根1董曉慧1,2*譚北平1,2楊奇慧1遲淑艷1

劉泓宇1章 雙1陳效儒3

(1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料實驗室，湛江524088；2.南海生物資源開發(fā)與利用協(xié)同創(chuàng)新中心，廣州510275；3.通威股份有限公司，成都610041)

本試驗旨在研究飼料膽堿含量對斜帶石斑魚生長性能、體成分、肝臟膽堿含量及脂肪代謝酶活性的影響，并確定斜帶石斑魚對飼料中膽堿的需要量。在基礎(chǔ)飼料中分別添加0、680、1 361、2 041、2 721和4 082 mg/kg的氯化膽堿，配制6種試驗飼料，試驗飼料中膽堿實際含量分別為8.1(對照)、602.5、1 119.0、1 511.5、1 970.0和4 029.0 mg/kg，投喂360尾平均體重為(87.85±0.04) g的斜帶石斑魚10周。每種飼料設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)放養(yǎng)20尾魚。結(jié)果表明：1 119.0 mg/kg組的特定生長率、蛋白質(zhì)效率最高，飼料系數(shù)最低；對照組的成活率顯著低于其他各添加組(P<0.05)。飼料膽堿含量對全魚水分和粗蛋白質(zhì)含量無顯著影響(P>0.05)；4 029.0 mg/kg組的全魚粗脂肪含量顯著高于對照組(P<0.05)；對照組的全魚粗灰分含量與各膽堿添加組差異不顯著(P>0.05)。肝臟膽堿含量隨飼料膽堿含量的增加呈先升高后穩(wěn)定趨勢，且在1 511.5 mg/kg組有最大值。隨飼料膽堿含量的增加，肝臟脂蛋白脂酶和總脂酶活性呈上升趨勢，肝臟脂肪酸合成酶活性先下降后趨于穩(wěn)定；肝臟肝脂酶活性不受飼料膽堿含量的顯著影響(P>0.05)。以特定生長率和肝臟膽堿含量為評價指標(biāo)進行折線模型分析得出，斜帶石斑魚對飼料中膽堿的需要量分別為1 093.7和1 579.7 mg/kg飼料。

斜帶石斑魚；膽堿；生長；體組成；需要量；脂肪代謝

對絕大多數(shù)動物而言，膽堿是飼料中必不可少的維生素之一[1]，可防止脂肪在肝臟中的異常蓄積，對動物脂肪的沉積和轉(zhuǎn)運起著十分重要的作用，具有“抗脂肪肝因子”之稱[2-3]。膽堿具有以下幾個生理功能：1)膽堿是合成各種磷脂(卵磷脂、腦磷脂、神經(jīng)磷脂)所必需的前體，構(gòu)成細胞膜和脂蛋白，維持細胞正常結(jié)構(gòu)和功能[4-5]；2)在神經(jīng)組織中，膽堿與神經(jīng)傳導(dǎo)密不可分，是合成乙酰膽堿的重要組成成分，在神經(jīng)信號傳遞中起重要作用[6]；3)膽堿在代謝中與蛋氨酸和甜菜堿類似，可提供生物化學(xué)過程所需的甲基[7]。

在小白鼠和其他動物的養(yǎng)殖試驗中發(fā)現(xiàn)，膽堿缺乏會誘發(fā)脂肪肝，血漿脂類含量顯著降低[8]。國外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，投喂缺乏膽堿的飼料可導(dǎo)致鱘魚(Acipensertransmontanus)血漿總脂、甘油三酯、總膽固醇和磷脂含量降低[6]。生長遲緩、飼料效率低、脂肪肝、高死亡率以及厭食等膽堿缺乏癥在鯉(Cyprinuscarpio)[9]、湖鱒(Salvelinusnamaycush)[9]和虹鱒(Oncorhynchusmykiss)[9]等水產(chǎn)動物上均有報道。國內(nèi)學(xué)者對羅非魚(Oreochromisniloticus×O.aureus)和黃鱔(Monopterualbus)等進行了研究，當(dāng)飼料中缺乏膽堿時，羅非魚[10]和黃鱔[11]均出現(xiàn)了生長不良、厭食和肝臟脂肪含量升高等膽堿缺乏癥。此外，飼料效率低、肝臟脂肪浸潤以及血漿總脂、甘油三酯、膽固醇和磷脂含量降低等相關(guān)膽堿缺乏癥在草魚的研究中也有報道[12-13]。因此，對于大多數(shù)動物而言，膽堿是一種必需營養(yǎng)素。

斜帶石斑魚(Epinepheluscoioides)隸屬鱸形目(Perciformes)，鱸亞目(Perwidei)，鰭科(Serranidae)，石斑魚屬(Epinephelus)，全世界約100多種，是暖水性中下層的肉食性名貴魚類之一。石斑魚分布于北太平洋的西部，我國常見于南海[14]，因其營養(yǎng)豐富、肉質(zhì)鮮嫩、生長快、經(jīng)濟價值高等優(yōu)點而備受養(yǎng)殖戶和消費者喜愛，被認(rèn)為是精養(yǎng)條件下最具養(yǎng)殖前景的魚類之一。盡管斜帶石斑魚的膽堿需要量已部分見諸報道[15]，但仍缺乏較為系統(tǒng)的研究，不能全面反映其對膽堿的需求狀況。

本試驗主要探討在飼料中添加膽堿(以氯化膽堿形式)對斜帶石斑魚生長、體成分、肝臟膽堿蓄積量以及相關(guān)脂肪代謝酶活性的影響，通過相關(guān)指標(biāo)的測定，尋求斜帶石斑魚飼料中膽堿最適添加量，為膽堿在魚類飼料中的合理使用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

本試驗以脫維酪蛋白、白魚粉和明膠為蛋白質(zhì)源，玉米油和魚油為脂肪源，玉米淀粉為糖源，微晶纖維素為填充劑配制基礎(chǔ)飼料,其組成及營養(yǎng)水平見表1。在基礎(chǔ)飼料中分別添加0、680、1 361、2 041、2 721和4 082 mg/kg的氯化膽堿(固體試劑，純度≥98%)，配制成6種試驗飼料，試驗飼料中膽堿含量(實測值)分別為8.1(對照)、602.5、1 119.0、1 511.5、1 970.0和4 029.0 mg/kg。所有原料粉碎后過60目篩，按配方比例混合均勻，少量組分采用逐級擴大法混合，然后加入預(yù)先混合好的魚油和玉米油，將油脂微小顆粒手工搓散，放入V型立式混合機中混合均勻，緩慢加入所配飼料質(zhì)量30%～40%的水后再次混勻，用F-26型雙螺桿擠條機(華南理工大學(xué))加工成粒徑為3 mm的顆粒飼料，室溫下待其風(fēng)干至水分含量約為10%，封口袋分裝并儲存于-20 ℃冰箱中備用。

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)脫維酪蛋白(CP 94%)購自美國Sigma公司Vitamin-free casein (CP 94%) obtained from Sigma Co., USA。

2)維生素預(yù)混料為每千克飼料提供The vitamin premix provided the following per kg of the diet:硫胺素 thiamine 25.5 mg，核黃素 riboflavin 25 mg，吡哆醇 pyridoxine 50 mg，氰鈷胺素 cyanocobalamine 0.1 mg，葉酸 folic acid 6.25 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 61 mg，肌醇 inositol 800 mg，煙酸 niacin 201 mg，生物素 biotin 2.5 mg，VA 10 mg，VD 120 mg，VE 99 mg，VK 10 mg，纖維素 cellulose 589.65 mg。

3)礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼料提供The mineral premix provided the following per kg of the diet:KIO40.06 mg，CoCl2·6H2O 8.14 mg，CuSO4·5H2O 39.68 mg，檸檬酸鐵 ferric citrate 27.42 mg，ZnSO4·7H2O 56.56 mg，MnSO4·7H2O 0.24 mg，Ca(PO4)2160 mg，MgSO4·H2O 24.86 mg，KCl 30.66 mg，NaSeO34 mg，沸石粉 zeolite powder 1 648.38 mg。

1.2 試驗用魚與養(yǎng)殖管理

試驗用魚購于海南省文昌市某石斑魚苗場。試驗開始前，以商業(yè)飼料(青島七好飼料，含50%粗蛋白質(zhì))飽食投喂至所需規(guī)格，分組前1周改投基礎(chǔ)飼料。

試驗于廣東海洋大學(xué)東海島海洋生物研究基地的室內(nèi)循環(huán)水養(yǎng)殖系統(tǒng)中進行。試驗魚禁食24 h后，挑選規(guī)格一致[平均體重(87.85±0.04) g]、體格健壯的斜帶石斑魚，根據(jù)試驗設(shè)計，共設(shè)6個組，每個組設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)1個1 m3玻璃鋼桶，每桶放20尾魚，飼養(yǎng)周期為10周。飼養(yǎng)期間，每天飽食投喂2次(08:30、16:30)，根據(jù)天氣和攝食情況調(diào)整投喂量。養(yǎng)殖期間不間斷充氣，水溫(30.5±0.8) ℃，溶解氧濃度5～6 mg/L，鹽度28～32，水體氨氮含量<0.2 mg/L；視水質(zhì)情況每天換水或隔天換水，換水量為60%～70%。

1.3 樣品采集及分析

1.3.1 樣品采集

養(yǎng)殖試驗結(jié)束禁食24 h后將各桶試驗魚全部撈出，以丁香酚(1∶10 000)麻醉，稱重并計數(shù)，計算生長性能指標(biāo)。每桶隨機取10尾，分離肝臟，分裝于防凍管中置于-80 ℃冰箱保存，用于肝臟膽堿含量和脂肪代謝酶活性測定；再從每桶中另隨機取4尾，分裝于封口袋中于-20 ℃保存，用于全魚常規(guī)營養(yǎng)成分分析。

1.3.2 飼料和全魚常規(guī)營養(yǎng)成分測定

飼料和全魚常規(guī)營養(yǎng)成分測定采用AOAC(1995)[16]方法進行。其中，水分含量采用105 ℃干燥法測定；粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法測定；粗脂肪含量采用索氏抽提法測定；粗灰分含量采用550 ℃馬福爐灼燒法測定。飼料和肝臟中膽堿含量測定參考Venugopal[17]的方法。

1.3.3 脂肪代謝酶活性測定

肝臟肝脂酶(hepatic lipase,HL)、脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)活性測定樣品制備：稱取肝臟組織適量，并記下其準(zhǔn)確重量，按重量(g)∶體積(mL)=1∶9的比例加入9倍體積生理鹽水，冰水浴條件下勻漿，制成10%組織勻漿液，2 500 r/min、4 ℃條件下離心15 min，小心吸取上清液分裝，置于-80 ℃冰箱保存待測。

肝臟脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)活性測定樣品制備：參考Utter等[18]的方法，并適當(dāng)修正。在2 mL預(yù)冷的0.25 mol/L蔗糖與1 mmol/L乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-2Na)混合液中剪取1 g肝臟，勻漿后，12 000 r/min、4 ℃條件下離心60 min。小心吸取上清液，用0.25 mol/L蔗糖和1 mmol/L EDTA-2Na混合液稀釋3倍后分裝，置-80 ℃冰箱保存?zhèn)錅y。

用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定肝臟肝脂酶、脂蛋白脂酶和脂肪酸合成酶活性，測定方法嚴(yán)格參照說明書進行。按照以下公式計算總脂酶(total lipase,TL)活性：

總脂酶=肝脂酶+脂蛋白脂酶。

1.4 生長性能指標(biāo)計算公式

成活率(survival rate,SR,%)=100×

終末魚尾數(shù)/初始魚尾數(shù)；

特定生長率(specific growth rate,SGR,%/d)=

100×(ln終末體重-ln初始體重)/試驗天數(shù)；

飼料系數(shù)(feed conversion ratio,FCR)=

飼料攝入量/(終末體重-初始體重)；

蛋白質(zhì)效率(protein efficiency rate,PER)=

魚體增重/(飼料攝入量×飼料粗蛋白質(zhì)含量)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

試驗結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，組間若有顯著性差異，再進行Duncan氏法多重比較檢驗，P<0.05表示差異顯著，采用折線模型計算得出斜帶石斑魚對飼料中膽堿的需要量。

2 結(jié) 果

2.1 飼料膽堿含量對斜帶石斑魚生長性能的影響

由表2可知，對照組的成活率顯著低于各膽堿添加組(P<0.05)，各膽堿添加組之間差異不顯著(P>0.05)；1 119.0 mg/kg組的飼料系數(shù)最低，顯著低于1 511.5和1 970.0 mg/kg組(P<0.05)，與其他間差異不顯著(P>0.05)；1 119.0 mg/kg組的特定生長率最高，與1 511.5 mg/kg組差異不顯著(P>0.05)，但顯著高于其他各組(P<0.05)；1 119.0 mg/kg組的蛋白質(zhì)效率最高，顯著高于其他各組(P<0.05)。

飼料膽堿含量(x)與斜帶石斑魚特定生長率(y)的關(guān)系如圖1所示，經(jīng)折線模型擬合后得：y=0.000 2x+1.152 8(R2=0.996 3)和y=-0.000 1x+1.480 9(R2=0.918 4)。以特定生長率為評價指標(biāo)，斜帶石斑魚對飼料中膽堿的需要量為1 093.7 mg/kg飼料。

表2 飼料膽堿含量對斜帶石斑魚生長性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

圖1 飼料膽堿含量與斜帶石斑魚特定生長率關(guān)系的折線模型分析

2.2 飼料膽堿含量對斜帶石斑魚體成分和肝臟膽堿含量的影響

由表3可以看出，飼料膽堿含量對斜帶石斑魚全魚水分和粗蛋白質(zhì)含量無顯著影響(P>0.05)。全魚粗脂肪含量隨飼料膽堿含量的增加基本呈上升趨勢，在4 029.0 mg/kg組有最大值，且顯著高于除1 511.5 mg/kg組以外的其他各組(P<0.05)。1 119.0 mg/kg組的全魚粗灰分含量顯著高于602.5 mg/kg組(P<0.05)，與其他各組差異不顯著(P>0.05)。隨飼料膽堿含量的增加，肝臟膽堿含量先上升后趨于穩(wěn)定，并在1 511.5 mg/kg組有最大值。當(dāng)飼料膽堿含量超過1 511.5 mg/kg后，肝臟膽堿含量無顯著變化(P>0.05)。

表3 飼料膽堿含量對斜帶石斑魚體成分和肝臟膽堿含量的影響(干物質(zhì)基礎(chǔ))

飼料膽堿含量(x)與斜帶石斑魚肝臟膽堿含量(y)的關(guān)系如圖2所示，經(jīng)折線模型擬合后得：y=33.008(R2=1.000 0)和y=0.021 3x-0.639 2(R2=0.994 6)。以肝臟膽堿含量為評價指標(biāo)，斜帶石斑魚對飼料中膽堿的需要量為1 579.7 mg/kg飼料。

圖2 飼料膽堿含量與肝臟膽堿含量關(guān)系的折線模型分析

2.3 飼料膽堿含量對斜帶石斑魚肝臟脂肪代謝酶活性的影響

由表4可以看出，肝臟脂蛋白脂酶和總脂酶活性隨膽堿含量的增加呈先上升后降低趨勢，與對照組相比，1 970.0 mg/kg組的脂蛋白脂酶和總脂酶活性增幅分別為74.48%和43.95%，差異顯著(P<0.05)；肝臟脂肪酸合成酶活性在602.5 mg/kg組有最大值，但隨著膽堿的繼續(xù)添加，脂肪酸合成酶活性呈下降趨勢，在4 029.0 mg/kg組有最低值，較602.5 mg/kg組降幅達34.05%(P<0.05)；盡管肝臟肝脂酶活性隨飼料膽堿含量的增加而增加，但組間差異不顯著(P>0.05)。

3 討 論

3.1 飼料膽堿含量對斜帶石斑魚生長性能的影響

已有研究表明，膽堿對養(yǎng)殖動物生長具有重要的促進作用。Nesheim等[19]在產(chǎn)蛋雞的研究中發(fā)現(xiàn)，在膽堿含量低的純合飼糧中添加膽堿可顯著提高產(chǎn)蛋雞體重、產(chǎn)蛋水平，且降低肝臟脂肪含量。攝食添加膽堿的飼糧可顯著降低黃羽肉雞的死亡率[20]，提高肉仔雞的日增率和飼料轉(zhuǎn)化率[21]，在仔豬[22]的研究中也得出類似的結(jié)果。

3.2 飼料膽堿含量對斜帶石斑魚體成分和肝臟膽堿含量的影響

在本試驗中，飼料膽堿含量對斜帶石斑魚全魚的水分和粗蛋白質(zhì)含量無顯著影響，這與異育銀鯽[30]、軍曹魚[27]的研究結(jié)果相同，但與大菱鲆(ScophthalmusmaximusL.)[32]的研究結(jié)果存在差異；全魚粗脂肪含量隨飼料膽堿含量的增加基本呈上升趨勢，盡管在1 970.0 mg/kg組出現(xiàn)了下降趨勢，但高劑量膽堿的添加仍然使全魚粗脂肪含量上升，類似的結(jié)果在黃鱸[7]的研究中也有報道。在其他的研究中發(fā)現(xiàn)，飼料膽堿的添加顯著降低草魚(Ctenopharyngodonidella)[33]、大口黑鱸(Micropterussalmoide)[34]的全魚粗脂肪含量，但軍曹魚[27]的全魚粗脂肪含量不受飼料膽堿含量的影響。Craig[35]報道，飼料中添加膽堿可促進美國紅魚肝臟中脂肪動員并向肌肉轉(zhuǎn)運。但到目前為止，飼料膽堿含量影響機體內(nèi)脂肪分布的機理研究鮮有報道。

在本試驗中，全魚粗灰分含量隨飼料膽堿含量的增加先上升后下降并趨于穩(wěn)定，飼料膽堿含量在8.1～1 119.0 mg/kg之間時全魚粗灰分含量顯著上升，而當(dāng)膽堿含量超過1 119.0 mg/kg后，全魚粗灰分含量不再發(fā)生顯著變化。另有研究發(fā)現(xiàn)，黃鱸全魚粗灰分含量隨飼料膽堿含量的增加顯著降低[7]，而星斑川鰈(Platichthysstellatus)[36]、建鯉[24]和團頭魴(Megalobramaamblycephala)[37]的全魚粗灰分含量不受飼料膽堿含量的影響。

3.3 飼料膽堿含量對斜帶石斑魚肝臟脂肪代謝酶活性的影響

脂肪酸合成酶是脂肪酸合成過程中的關(guān)鍵酶，能催化丙二醛輔酶A(malonyl CoA)和乙酰輔酶A(acetyl coenzyme A)生成長鏈脂肪酸，從而合成甘油三酯。脂肪酸合成酶的多少和活性的高低對動物體脂沉積具有重要意義[39]。大量研究表明，機體組織中脂肪酸合成酶活性與脂肪調(diào)控間存在重要聯(lián)系，脂肪酸合成酶的活性與體脂水平呈顯著正相關(guān)[39-41]。對于魚類而言，肝臟是脂肪酸合成的主要器官[42]。然而，膽堿對魚類脂肪酸合成酶活性的影響鮮有報道，從本試驗結(jié)果可以看出，肝臟脂肪酸合成酶活性隨飼料膽堿含量的增加先降低后趨于穩(wěn)定，表明膽堿可抑制肝臟脂肪酸合成酶的活性，在一定程度上可以抑制肝臟脂肪的合成。此外，膽堿對脂肪有親合力，可促進脂肪以磷脂形式由肝臟通過血液輸送出去或改善脂肪酸本身在肝臟中的利用，防止脂肪在肝臟里的異常積聚，但高劑量的膽堿勢必會導(dǎo)致肝臟超負荷運轉(zhuǎn)，導(dǎo)致肝臟損傷，因而致使脂肪分解相關(guān)酶的分泌量減少。

已有研究證實，肝臟是魚類脂肪酸β-氧化代謝的重要部位，同時也是魚類隨營養(yǎng)狀況而改變脂肪蓄積的主要調(diào)節(jié)性貯脂器官[39]。機體脂肪主要的分解酶是總脂酶，包括脂蛋白脂酶和肝脂酶。其中，脂蛋白脂酶存在于肝外組織毛細血管內(nèi)表皮細胞，主要催化血漿中乳糜微粒(chylomicron,CM)和極低密度脂蛋白(very low density lipoprotein,VLDL)中的甘油三酯水解，產(chǎn)生甘油并釋放出游離脂肪酸，在乳糜微粒和極低密度脂蛋白的降解中發(fā)揮重要作用[43]；肝脂酶在肝臟中合成，可促進低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterin,LDL-C)和乳糜微粒殘粒進入肝細胞，并直接參與高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)的逆轉(zhuǎn)運及其殘粒的分解[44]。朱瑞俊等[33]在草魚的研究中發(fā)現(xiàn)，氯化膽堿添加量為0.4%或0.6%時，肝臟肝脂酶活性顯著高于對照組，0.6%氯化膽堿的添加可顯著提高肝臟脂蛋白脂酶活性；另有研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加適量膽堿可顯著提高吉富羅非魚肝臟總脂酶的活性[45]。在本試驗中，斜帶石斑魚肝臟脂肪酸合成酶活性的降低減慢了魚類機體脂肪合成的速率，脂肪合成緩慢。此外，肝臟總脂酶活性隨飼料膽堿含量的增加呈上升趨勢，總脂酶活性的升高使血液中脂類物質(zhì)的量減少，使得脂肪合成的原料減少；此外，高活性的總脂酶還可以促進肝臟脂肪的降解，在一定程度上防止肝臟脂肪的沉積。

4 結(jié) 論

① 飼料中適量膽堿的添加可提高斜帶石斑魚的生長性能，提高肝臟脂肪分解酶——總脂酶和脂蛋白脂酶的活性，降低魚體脂肪沉積。

② 以特定生長率和肝臟膽堿含量為評價指標(biāo)，通過折線回歸模型得出斜帶石斑魚對飼料中膽堿的需要量分別為1 093.7和1 579.7 mg/kg飼料。

[1] NRC.Nutrient requirements of fish[S].Washington,D.C.:National Academic Press,1993.

[2] DING L Y,ZHANG L M,WANG J Y,et al.Effect of dietary lipid level on the growth performance,feed utilization,body composition and blood chemistry of juvenile starry flounder (Platichthysstellatus)[J].Aquaculture research,2010,41(10):1470-1478.

[3] ZEISEL S H.Choline:an important nutrient in brain development,liver function and carcinogenesis[J].Journal of the American College of Nutrition,1992,11(5):473-481.

[4] BLUSZTAJN J K.Choline,a vital amine[J].Science,1998,281(5378):794-795.

[5] MEHTA A K,SINGH B P,ARORA N,et al.Choline attenuates immune inflammation and suppresses oxidative stress in patients with asthma[J].Immunobiology,2010,215(7):527-534.

[6] HUNG S S O.Choline requirement of hatchery-produced juvenile white sturgeon (Acipensertransmontanus)[J].Aquaculture,1989,78(2):183-194.

[7] TWIBELL R G,BROWN P B.Dietary choline requirement of juvenile yellow perch (Percaflavescens)[J].The Journal of Nutrition,2000,130(1):95-99.

[8] LUCAS C G.Transmithylation and biosynthesis of the methyl group,progress in chemistry of fats and other lipids[M].London:Pergamon Press,1967.

[9] KETOLA H G.Choline metabolism and nutritional requirement of lake trout (Salvelinusnamaycush)[J].Journal of Animal Science,1976,43(2):474-477.

[10] 黃凱,楊鴻昆,甘暉,等.飼料中添加膽堿預(yù)防羅非魚脂肪肝病變的作用[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2007,14(2):257-262.

[11] 楊代勤,陳芳,阮國良.飼料中添加膽堿對黃鱔生長、組織脂肪含量及消化酶活性的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報,2006,30(5):676-682.

[12] 王道尊,趙亮,譚玉鈞.草魚魚種對膽堿需要量的研究[J].水產(chǎn)學(xué)報,1995,19(2):133-139.

[13] 曹俊明,林鼎,薛華,等.四種抗脂肪肝物質(zhì)降低草魚肝胰臟脂質(zhì)積累的替代關(guān)系[J].水生生物學(xué)報,1999,23(2):102-111.

[14] RUSSELL B C,HOUSTON W.Offshore fishes of the Arafura sea[J].Beagle:Records of the Museums and Art Galleries of the Northern Territory,1989,6:69-84.

[15] 陽會軍,田麗霞,黃俊娃,等.石斑魚的營養(yǎng)需求及飼料營養(yǎng)參數(shù)[J].廣東飼料,2010,19(4):29-34.

[16] AOAC.Official methods of analysis of AOAC International[S].16th ed.Arlington,VA:Association of Analytical Chemists,1995.

[17] VENUGOPAL P B.Choline[M]//AUGUSTIN J,KLEIN B P,BECKER D,et al.Methods of vitamin assay.New York:John Wiley and Sons,1985:555-573.

[18] UTTER M F,KEECH D B.Pyruvate carboxylase Ⅰ.Nature of the reaction[J].The Journal of Biological Chemistry,1963,238(8):2603-2608.

[19] NESHEIM M C,NORVELL M J,CEBALLOS E,et al.The effect of choline supplementation of diets for growing pullets and laying hens[J].Poultry Science,1971,50(3):820-831.

[20] 郭吉余,林映才,蔣守群,等.大豆磷脂與膽堿對黃羽肉雞生長性能、胴體品質(zhì)、營養(yǎng)消化率、血清指標(biāo)的影響[C]//王恬,劉建新.中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物營養(yǎng)學(xué)分會:第四屆全國飼料營養(yǎng)學(xué)術(shù)研討會論文集.南京:中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物營養(yǎng)學(xué)分會,2002:45.

[21] 陳承禎.煙酰胺.膽堿對肉仔雞生長性能及脂肪代謝的影響[D].碩士學(xué)位論文.長春:中國人民解放軍軍需大學(xué),2002.

[22] NEUMANN A L,KRIDER J L,JAMES M F,et al.The choline requirement of the baby pig[J].The Journal of Nutrition,1949,38(2):195-213.

[23] WILSON R P,POE W E.Choline nutrition of fingerling channel catfish[J].Aquaculture,1988,68(1):65-71.

[24] WU P,FENG L,KUANG S Y,et al.Effect of dietary choline on growth,intestinal enzyme activities and relative expressions of target of rapamycin and eIF4E-binding protein 2 gene in muscle,hepatopancreas and intestine of juvenile Jian carp (Cyprinuscarpiovar.Jian)[J].Aquaculture,2011(1/2/3/4):107-116.

[25] GRIFFIN M E,WILSON K A,WHITE M R,et al.Dietary choline requirement of juvenile hybrid striped bass[J].The Journal of Nutrition,1994,124(9):1685-1689.

[26] CRAIG S R,GATLIN D M.Dietary choline requirement of juvenile red drum (Sciaenopsocellatus)[J].The Journal of Nutrition,1996,126(6):1696-1700.

[27] MAI K S,XIAO L D,AI Q H,et al.Dietary choline requirement for juvenile cobia,Rachycentroncanadum[J].Aquaculture,2009,289(1/2):124-128.

[28] 張玲,張衛(wèi)東,張小玲,等.氯化膽堿、肌醇和膽汁酸對鯉魚生長、血清生化及免疫指標(biāo)的影響[J].飼料工業(yè),2008,29(22):14-16.

[30] 段元慧,朱曉鳴,韓冬,等.異育銀鯽幼魚對飼料膽堿最適需求量的研究[C]//中國水產(chǎn)學(xué)會:2009年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集.海口:中國水產(chǎn)學(xué)會,2009:121.

[31] SHIAU S Y,LO P S.Dietary choline requirements of juvenile hybrid tilapia,Oreochromisniloticus×O.aureus[J].The Journal of Nutrition,2000,130(1):100-103.

[32] 李華.半滑舌鰨維生素C及牙鲆、大菱鲆膽堿營養(yǎng)生理研究[D].碩士學(xué)位論文.青島:中國海洋大學(xué),2011.

[33] 朱瑞俊,李小勤,謝駿,等.飼料中添加氯化膽堿對草魚成魚生長、脂肪沉積和脂肪代謝酶活性的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2010,17(3):527-535.

[34] 周明.飼料中添加膽堿和卵磷脂對大口黑鱸生長、體組成和肝臟的影響[D].碩士學(xué)位論文.廣州:中山大學(xué),2007.

[35] CRAIG S R,GATLIN D M.Growth and body composition of juvenile red drum (Sciaenopsocellatus) fed diets containing lecithin and supplemental choline[J].Aquaculture,1997,151(1/2/3/4):259-267.

[36] 帥繼祥,張利民,王際英,等.星斑川鰈幼魚膽堿需求量的研究[J].水生生物學(xué)報,2011,35(2):365-371.

[37] JIANG G Z,WANG M,LIU W B,et al.Dietary choline requirement for juvenile blunt snout bream,Megalobramaamblycephala[J].Aquaculture Nutrition,2013,19(4):499-505.

[38] ZHANG Z,WILSON R P.Reevaluation of the choline requirement of fingerling channel catfish (Ictaluruspunctatus) and determination of the availability of choline in common feed ingredients[J].Aquaculture,1999,180(1/2):89-98.

[39] LOFTUS T M,JAWORSKY D E,FREHYWOT G L,et al.Reduced food intake and body weight in mice treated with fatty acid synthase inhibitors[J].Science,2000,288(5475):2379-2381.

[40] 熊文中,楊鳳,周安國.豬重組生長激素對不同雜交肥育豬脂肪代謝調(diào)控的研究[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報,2001,32(1):1-4.

[41] 田維熙,董妍,權(quán)暉,等.不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關(guān)系[J].生物化學(xué)雜志,1996,12(2):234-236.

[42] GREENE D H S,SELIVONCHICK D P.Lipid metabolism in fish[J].Progress in Lipid Research,1987,26(1):53-85.

[43] 張曉剛.肝脂酶與脂蛋白代謝[J].國外醫(yī)學(xué):臨床生物化學(xué)與檢驗學(xué)分冊,2002,23(1):48-49.

[44] CHOI S Y,GOLDBERG I J,CURTISS L K,et al.Interaction between ApoB and hepatic lipase mediates the uptake of ApoB-containing lipoproteins[J].Journal of Biological Chemistry,1998,273(32):20456-20462.

[45] 劉康.飼料脂肪和膽堿水平對吉富羅非魚幼魚生長性能及生理機能的影響[D].碩士學(xué)位論文.南寧:廣西大學(xué),2014.

*Corresponding author, professor, E-mail: dongxiaohui2003@163.com

(責(zé)任編輯 菅景穎)

Effects of Dietary Choline Content on Growth Performance,Body Composition, and Choline Content and Lipid Metabolism Enzyme Activities in Liver of Orange-Spotted Grouper (Epinepheluscoioides)

QIN Digen1DONG Xiaohui1,2*TAN Beiping1,2YANG Qihui1CHI Shuyan1LIU Hongyu1ZHANG Shuang1CHEN Xiaoru3

(1.LaboratoryofAquaticAnimalNutritionandFeed,CollegeofFisheries,GuangdongOceanUniversity,Zhanjiang524088,China; 2.SouthChinaSeaBio-ResourceExploitionandUtilizationCollaborativeInnovationCenter,Guangzhou510275,China; 3.TongweiCo.,Ltd.,Chengdu610041,China)

A 10-week feeding trial was carried out to investigate the effects of dietary choline content on growth performance, body composition, and choline content and lipid metabolism enzyme activities in liver of orange-spotted grouper (Epinepheluscoioides). Choline chloride was added to the basal diet to formulate six experimental diets with the adding levels were 0, 680, 1 361, 2 041, 2 721 and 4 082 mg/kg, which contained 8.1 (control), 602.5, 1 119.0, 1 511.5, 1 970.0 and 4 029.0 mg/kg (all were measured values) choline, respectively. Each diet was randomly assigned to three replicates and each replicate had 20 fish [average body weight of (87.85±0.04) g]. Results showed that the maximum specific growth rate and protein efficiency rate and minimum feed conversion ratio were reached at 1 119.0 mg/kg group. Survival rate in control group was significantly lower than that in other groups (P<0.05). No significant differences in moisture and crude protein content of whole-body were found among the groups (P>0.05), and ether extract content of whole-body in 4 029.0 mg/kg group was significantly higher than that in control group (P<0.05). No significant difference in ash content of whole-body was obversed between the control group and choline added groups (P>0.05). The choline content in liver was progressively increased and then leveled off with the increasing of dietary choline content and a maximum value was occurred in 1 511.5 mg/kg group (P<0.05). Liver lipoprotein lipase and total lipase activities were tended to increase, but liver fatty acid synthetase activity was tend to decrease and then stable with the increasing of dietary choline content; no significant difference was observed in hepatic lipase activity in liver among all groups (P>0.05). Base on the specific growth rate and liver choline content as evaluation indexes, the choline requirement for orange-spotted grouper determined by broken-line model analysis is 1 093.7 and 1 579.7 mg/kg diet, respectively.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2015, 27(12)：3812-3820]

orange-spotted grouper (Epinepheluscoioides); choline; growth; body composition; requirement; lipid metabolism

10.3969/j.issn.1006-267x.2015.12.021

2015-06-03

公益性行業(yè)(農(nóng)業(yè))科研專項(201003020)；廣東省高等學(xué)校珠江學(xué)者特聘教授基金(GDUPS2011)；廣東省教育廳科技創(chuàng)新基金(2013KJCX0096)

覃笛根(1990—)，男，布依族，貴州荔波人，碩士研究生，研究方向為水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料。E-mail: qindigen@126.com

*通信作者：董曉慧，教授，碩士生導(dǎo)師，E-mail: dongxiaohui2003@163.com

S963

A

1006-267X(2015)12-3812-09