• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚生長性能、血清生化指標(biāo)及脂肪代謝的影響

    2015-05-09 08:43:40翟少偉孫秀文
    動物營養(yǎng)學(xué)報 2015年12期
    關(guān)鍵詞:血清

    翟少偉 李 劍 孫秀文

    (集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院,廈門361021)

    ?

    飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚生長性能、血清生化指標(biāo)及脂肪代謝的影響

    翟少偉 李 劍 孫秀文

    (集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院,廈門361021)

    本試驗旨在研究飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚生長性能、血清生化指標(biāo)及脂肪代謝的影響。將240尾吉富羅非魚[平均體重為(12.0±0.1) g],隨機(jī)分為4組,每組4個重復(fù),每個重復(fù)15尾魚,分別投喂表面活性素添加水平為0(對照組)、50、100和200 mg/kg的試驗飼料7周。結(jié)果表明:飼料中添加表面活性素顯著提高吉富羅非魚的終末體重、增重率和特定生長率(P<0.05),且上述指標(biāo)50 mg/kg添加組顯著高于200 mg/kg添加組(P<0.05),同時顯著降低飼料系數(shù)(P<0.05),但對攝食率和存活率無顯著影響(P>0.05)。飼料中添加表面活性素顯著提高腸道脂肪酶(50 mg/kg添加組除外)活性(P<0.05),對淀粉酶和蛋白酶活性無顯著影響(P>0.05)。飼料中添加表面活性素后血清尿素氮水平降低,但僅50 mg/kg添加組與對照組有顯著差異(P<0.05);各添加組血清白蛋白和游離脂肪酸水平顯著高于對照組(P<0.05),總膽固醇(200 mg/kg添加組除外)、甘油三酯水平顯著低于對照組(P<0.05);各組間血清酸性磷酸酶和堿性磷酸酶活性無顯著差異(P>0.05);各添加組血清溶菌酶活性顯著高于對照組(P<0.05),其中以50 mg/kg添加組活性最高。飼料中添加表面活性素顯著提高肝胰臟脂肪酸合成酶水平(P<0.05),對肝胰臟乙酰輔酶A羧化酶水平無顯著影響(P>0.05);各添加組肝胰臟肝脂酶和脂蛋白脂酶活性顯著高于對照組(P<0.05),但各添加組之間2種酶活性無顯著差異(P>0.05)。由此可見,飼料中添加表面活性素可提高吉富羅非魚腸道脂肪酶活性、改善血清生化指標(biāo)、調(diào)節(jié)脂肪代謝酶水平或活性,進(jìn)而促進(jìn)其生長。本試驗條件下,建議吉富羅非魚飼料中表面活性素添加水平為50 mg/kg。

    表面活性素;吉富羅非魚;生長性能;脂肪代謝

    魚類可以有效利用脂肪,具有節(jié)約蛋白質(zhì)的效應(yīng)。適當(dāng)提高飼料中油脂水平,可一定程度減少蛋白質(zhì)作為能量的消耗。但飼料中添加過多的油脂會導(dǎo)致魚體脂肪沉積過多,影響魚類健康和產(chǎn)品品質(zhì)[1-3]。飼料中添加具有表面活性作用的乳化劑,能夠使進(jìn)入動物腸道的油脂分散形成乳糜微粒,擴(kuò)大油脂與脂肪酶的接觸面積,從而提高油脂的消化吸收[4]。水產(chǎn)飼料中常用的乳化劑有膽汁酸鹽類、磷脂類和糖苷酯類等單一或復(fù)合的乳化劑,這些乳化劑多為動、植物直接提取或化學(xué)合成而來[5-7]。而微生物源的乳化劑在飼料中的應(yīng)用還鮮見報道。近年來,枯草芽孢桿菌分泌的表面活性物質(zhì)——表面活性素(surfactin)成為表面活性劑領(lǐng)域的研究熱點。它具有特殊的兩親性化學(xué)結(jié)構(gòu),其表面活性強(qiáng)于常見的乳化劑,是最強(qiáng)的生物表面活性劑之一[8-9]。表面活性素不僅具有廣譜高效的抗菌活性,而且對病毒、支原體和原蟲等也具有顯著的抑制效果,又被稱為抗菌脂肽[9-10]。目前,表面活性素在動物飼料中的應(yīng)用還處于初步階段,以往研究主要關(guān)注表面活性素的抗菌活性方面。研究表明,表面活性素適量添加到飼料中可提高愛拔益加(AA)肉雞、斷奶仔豬對脂肪的利用效率,促進(jìn)蛋白質(zhì)的沉積和動物生長[11-12]。而表面活性素在水產(chǎn)動物方面,僅有含表面活性素的復(fù)合物添加在點帶石斑魚(Epinepheluscoioides)[13]和凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)[14]飼料中的報道,以及表面活性素添加在吉富羅非魚飼料中的初步研究[15]。鑒于此,本文擬通過研究在飼料中添加不同水平的表面活性素對吉富羅非魚(genetically improved farmed tilapia,GIFT,Oreochromisniloticus)生長性能、血清生化指標(biāo)及脂肪代謝的影響,探討表面活性素的促生長效果以及對脂肪代謝的影響,為表面活性素作為新型水產(chǎn)飼料乳化劑的應(yīng)用提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗動物與試驗設(shè)計

    飼養(yǎng)試驗在集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院生態(tài)實驗室進(jìn)行。吉富羅非魚購買于漳州市水產(chǎn)開發(fā)中心,飼喂基礎(chǔ)飼料暫養(yǎng)馴化15 d之后,選取240尾體格健壯、規(guī)格均一、平均體重為(12.0±0.1) g的試驗魚,隨機(jī)分成4組,分別投喂在基礎(chǔ)飼料中添加0(對照組)、50、100和200 mg/kg表面活性素(由福建正源飼料有限公司提供,有效含量為80%)的試驗飼料。每組4個重復(fù),每個重復(fù)15尾魚。試驗期為7周。

    1.2 基礎(chǔ)飼料組成與飼養(yǎng)管理

    基礎(chǔ)飼料配方根據(jù)SC/T 1025—2004《羅非魚配合飼料》配制,其組成及營養(yǎng)水平見表1。

    飼料原料粉碎過60目篩,各原料混合均勻后,分別添加0、50、100和200 mg/kg表面活性素,用雙螺桿制粒機(jī)(CD4×1TS型,華南理工大學(xué)科技實業(yè)總廠)常溫加工成直徑為2.5 mm的顆粒飼料,自然風(fēng)干后置于已編號的自封袋中,于-20 ℃冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

    試驗魚養(yǎng)殖于室內(nèi)具有循環(huán)水的水族箱(75 cm×55 cm×60 cm,加水量約為120 L)中。每天08:30和17:30定時投喂,達(dá)表觀飽食,記錄每箱飼料投喂量。投喂0.5 h后吸出殘料和糞便,并記錄殘餌量。試驗用水為曝氣自來水,每天換水2次,每次換水量約30%。光照為自然光源,增氧機(jī)24 h持續(xù)增氧。試驗期間維持水溫(27±2) ℃,pH 7.3±0.2,溶氧濃度高于6.0 mg/L,氨氮濃度低于0.2 mg/L。

    表1 基礎(chǔ)飼料組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

    1)維生素預(yù)混料為每千克飼料提供Vitamin premix provided the following per kg of the diet:VA 25 000 IU,VD33 500 IU,VE 20 mg,VK 5 mg,VB12.5 mg,VB22.5 mg,VB31.0 mg,VB60.2 mg,生物素 biotin 0.03 mg,葉酸 folic acid 0.75 mg,VB120.05 mg,VC 5 mg,泛酸鈣 calcium pantothenate 10 mg,肌醇 inositol 100 mg。

    2)礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼料提供Mineral premix provided the following per kg of the diet:NaCl 50 mg,MgSO4·7H2O 25 mg,NaH2PO4·2H2O 25 mg,KH2PO432 mg,Ca(H2PO4)2·H2O 20 mg,F(xiàn)eSO4250 mg,Ca(C3H5O3)235 mg,ZnSO4·7H2O 3.5 mg,MnSO4·4H2O 16 mg,CuSO4·5H2O 3 mg,CoCl2·6H2O 5 mg,KIO30.3 mg。

    1.3 樣品采集與組織勻漿液的制備

    飼養(yǎng)試驗結(jié)束后,試驗魚禁食24 h,稱量每個水族箱中全部試驗魚總重,隨機(jī)取規(guī)格相近6尾魚,用60 mg/L丁香酚進(jìn)行麻醉處理,測量體重,尾靜脈取血,4 ℃靜置30 min后離心(3 000 r/min,10 min)取血清,保存于-80 ℃冰箱,待測血清生化指標(biāo)。采血后的試驗魚解剖,分離出肝胰臟和腸道,保存于-80 ℃冰箱,待測消化酶、脂肪代謝關(guān)鍵酶的水平或活性。

    組織勻漿液制備時,將冷凍于-80 ℃的吉富羅非魚肝胰臟和腸道組織取出,先放入4 ℃冰箱中解凍,然后在冰浴的0.86%生理鹽水中漂洗,去除血液,濾紙拭干,稱重,按組織重(g)與0.86%生理鹽水體積(mL)比(m/v)=1∶9在冰浴條件下制成10%的組織勻漿液(勻漿時間10 s/次,間隙20 s,連續(xù)5~7次),再將10%的組織勻漿液在4 ℃條件下以3 000 r/min離心10 min,取上清液分裝到1.5 mL離心管中于-20 ℃冰箱保存待測。

    1.4 測定指標(biāo)與方法

    1.4.1 生長性能指標(biāo)

    根據(jù)記錄的試驗數(shù)據(jù),按下列公式計算各生長性能指標(biāo):

    增重率(weight gain rate,WGR,%)=

    100×(Wt-W0)/W0;

    特定生長率(specific growth rate,SGR,%/d)=

    100×(lnWt-lnW0)/t;

    飼料系數(shù)(feed conversion ratio,FCR)=

    FC/(Wt-W0);

    攝食率(feeding rate,FR,%)=100×FC/

    [(W0+Wt)/2]/t;

    日攝食量(daily feed intake,DFI,g/尾)=

    FC/t;

    存活率(survival rate,SR,%)=100×

    Nf/Ni。

    式中:W0為每尾魚平均初始體重(initial body weight,IBW),g/尾;Wt為每尾魚平均終末體重(final body weight,FBW),g/尾;t為飼喂天數(shù),d;FC為平均每尾魚攝食飼料總量(feed consumption)(風(fēng)干樣重),g;Ni為初始魚尾數(shù),尾;Nf為終末魚尾數(shù),尾。

    1.4.2 腸道消化酶活性

    腸道脂肪酶和淀粉酶活性采用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒進(jìn)行測定。腸道蛋白酶活性的測定采用福林-酚試劑法,以磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液調(diào)節(jié)pH,680 nm處測吸光度值。

    1.4.3 血清生化指標(biāo)

    血清尿素氮(urea nitrogen,UN)、白蛋白(albnmin,ALB)、甘油三酯(triglyceride,TG)、總膽固醇(total cholesterol,TC)、游離脂肪酸(free fatty acid,FFA)水平分別用Fearon法、溴甲酚綠法、酶偶聯(lián)比色法、甘油磷酸氧化酶-過氧化物酶(GPO-PAP)法、銅試劑法測定;酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)和堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性均采用磷酸苯二鈉比色法測定;溶菌酶(lysozyme,LZM)活性采用比濁法,利用南京建成生物工程研究所提供的試劑盒測定。

    1.4.4 肝胰臟脂肪代謝關(guān)鍵酶的水平或活性

    肝胰臟脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,FAS)和乙酰輔酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase,ACC)水平采用雙抗體酶聯(lián)免疫分析法測定;肝脂酶(hepatic lipase,HL)和脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,LPL)活性均采用銅試劑法測定,試劑盒由南京建成生物工程研究所提供,具體操作步驟見說明書。

    1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

    所有試驗數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。原始數(shù)據(jù)用Excel 2010整理后,采用SPSS 19.0進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA),若組間存在顯著差異,則采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較,P<0.05表示差異顯著。

    2 結(jié) 果

    2.1 飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚生長性能的影響

    由表2可知,各添加組的FBW、WGR和SGR均顯著高于對照組(P<0.05),同時50 mg/kg添加組顯著高于200 mg/kg添加組(P<0.05)。各添加組的FCR均顯著低于對照組(P<0.05),各添加組之間無顯著差異(P>0.05)。50 mg/kg添加組的DFI顯著高于對照組和200 mg/kg添加組(P<0.05),與100 mg/kg添加組無顯著差異(P>0.05)。各組間FR和SR無顯著差異(P>0.05)。

    表2 飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚生長性能的影響

    同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

    In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

    2.2 飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚腸道消化酶活性的影響

    由表3可知,飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚腸道淀粉酶和蛋白酶活性無顯著影響(P>0.05)。隨著表面活性素添加水平的升高,吉富羅非魚腸道脂肪酶活性呈現(xiàn)上升趨勢,除50 mg/kg添加組外,其余各添加組均顯著高于對照組(P<0.05),但各添加組之間無顯著差異(P>0.05)。

    表3 飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚腸道消化酶活性的影響

    2.3 飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚血清生化指標(biāo)的影響

    由表4可知,50 mg/kg添加組血清UN水平顯著低于對照組(P<0.05),其他添加組與對照組相比無顯著差異(P>0.05)。各添加組血清ALB水平均顯著高于對照組(P<0.05),但各添加組之間差異不顯著(P>0.05)。除200 mg/kg添加組外,其他添加組血清TC水平顯著低于對照組(P<0.05)。各添加組血清TG水平均顯著低于對照組(P<0.05),但各添加組之間差異不顯著(P>0.05)。各添加組血清FFA水平顯著高于對照組(P<0.05),但各添加組之間無顯著差異(P>0.05)。各添加組血清ACP和AKP活性與對照組均無顯著差異(P>0.05)。各添加組血清LZM活性均顯著高于對照組(P<0.05),以50 mg/kg添加組血清LZM活性最高。

    2.4 飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚肝胰臟脂肪代謝關(guān)鍵酶水平或活性的影響

    由表5可知,各添加組肝胰臟FAS水平顯著低于對照組(P<0.05),各添加組肝胰臟ACC水平與對照組無顯著差異(P>0.05);各添加組肝胰臟HL和LPL活性顯著高于對照組(P<0.05),各添加組間這2種酶活性無顯著差異(P>0.05)。

    表4 飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚血清生化指標(biāo)的影響

    表5 飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚肝胰臟脂肪代謝關(guān)鍵酶水平或活性的影響

    3 討 論

    3.1 飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚生長性能及消化酶活性的影響

    本試驗中,吉富羅非魚飼料中添加50~200 mg/kg表面活性素均提高了FBW、WGR和SGR,降低了FCR,表明表面活性素具有促生長作用;其中50 mg/kg添加組的效果最佳。目前,關(guān)于表面活性素在水產(chǎn)飼料中應(yīng)用的報道較少。研究表明,在吉富羅非魚飼料中添加12.5~50.0 mg/kg抗菌脂肽(即表面活性素),以50.0 mg/kg添加組促生長效果最好[15];在點帶石斑魚(Epinepheluscoioides)飼料中添加2%含表面活性素的黃豆粉可顯著提高其WGR[13];添加100 mg/kg的NT-6抗菌脂肽(以表面活性素、芬薺素和伊枯草菌素為活性成分)可顯著提高凡納濱對蝦(Litopenaeusvannamei)的WGR和SGR[14]。此外,在AA肉雞飼糧中添加4 000 U/kg抗菌脂肽對肉雞的生長發(fā)育和免疫機(jī)能具有較好的調(diào)節(jié)和促進(jìn)作用[11];在斷奶仔豬飼糧中添加4 000 U/kg抗菌脂肽能夠提高其生長性能,減少斷奶應(yīng)激造成的腹瀉,抑制腸道有害微生物,對有益微生物也有一定的抑制作用,顯著影響血液激素水平和某些生化指標(biāo),能夠提高機(jī)體對脂類的轉(zhuǎn)化利用能力和蛋白質(zhì)的沉積能力[12]。本試驗中表面活性素促生長的添加水平與前人報道存在較大差異,這可能是動物的種類、試驗條件、表面活性素有效含量等不同所致。

    本研究中,飼料中添加表面活性素提高了吉富羅非魚腸道脂肪酶活性(50 mg/kg添加組除外)。這可能與飼料中添加表面活性素后,吉富羅非魚腸道絨毛高度和黏膜基層厚度顯著增加,隱窩深度變淺,小腸成熟吸收細(xì)胞的數(shù)量顯著增多有關(guān)[16]。小腸絨毛高度越高,隱窩深度越淺,即兩者比值變大時,其對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力逐漸增強(qiáng)[16-17];腸道成熟細(xì)胞數(shù)量與腸道消化酶活性呈正相關(guān)[18],腸道成熟細(xì)胞數(shù)量增加能提高消化酶活性,進(jìn)而促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的消化[19]。

    表面活性素是由一個手性序列為L-L-D-L-L-D-L的七肽和一個含13~15個碳原子的β-羥基脂肪酸構(gòu)成的復(fù)合物,分子質(zhì)量約為1 036 u[20];其長脂肪酸鏈及肽鏈上的L-亮氨酸2、D-亮氨酸3、L-纈氨酸4、D-亮氨酸6、L-亮氨酸7構(gòu)成了親油基團(tuán),環(huán)鏈骨架與L-谷氨酸1和L-天冬氨酸52個酸性氨基酸殘基構(gòu)成親水基團(tuán)[21],少量表面活性素即可起到良好的乳化、起泡和增溶等效果[10]。因此,飼料中添加表面活性素可能發(fā)揮與飼用乳化劑類似的作用。此外,表面活性素還具有抗菌、抗病毒和抗氧化等生物活性,其不僅可以阻止引起飼料變質(zhì)的致病菌和腐生菌的滋生,還可能抑制吉富羅非魚腸道中有害菌的繁殖,改善腸道健康狀況[16,22-23],從而促進(jìn)魚體生長。

    然而,隨著表面活性素添加水平的增加,吉富羅非魚生長指標(biāo)并未呈上升趨勢,200 mg/kg添加組吉富羅非魚的FBW、WGR和SGR顯著低于50 mg/kg添加組。研究表明,表面活性素的多種生物學(xué)活性以表面活性作用為基礎(chǔ)。當(dāng)表面活性素發(fā)揮表面活性作用時,其乳化效果與用量直接相關(guān),在臨界膠束濃度(critical micelle concentration,CMC)以下時,其乳化能力隨著用量的增加而增加;但超過CMC后,乳化性能趨于穩(wěn)定,即使加大用量,乳化效果也不會有太大變化[24]。因此,本試驗中添加200 mg/kg表面活性素可能已超過其CMC,乳化作用不再顯著增強(qiáng)。此外,過量的外源乳化劑可能對機(jī)體自身膽汁酸分泌產(chǎn)生抑制作用,導(dǎo)致機(jī)體生長受到影響[25]。

    3.2 飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚血清生化指標(biāo)的影響

    魚類血清生化指標(biāo)的變化能夠動態(tài)反映魚體的營養(yǎng)物質(zhì)代謝和生理健康狀況。當(dāng)魚類健康狀況良好時,體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝正常,血清UN處于較低水平[26-27]。本研究結(jié)果顯示,飼料中添加表面活性素顯著降低了吉富羅非魚血清中UN水平,表明其有利于改善蛋白質(zhì)的代謝,提高蛋白質(zhì)沉積率[28]。ALB是魚類血清中重要的運(yùn)輸?shù)鞍?,能維持魚類血液中膠體滲透壓和免疫球蛋白水平穩(wěn)定。當(dāng)肝胰臟功能受損時,血清中ALB比例會下降[29]。本試驗中,飼料中添加表面活性素提高了吉富羅非魚血清中ALB水平,表明表面活性素可以維持魚類肝胰臟健康。

    血液中的TG、TC、FFA和磷脂等脂類物質(zhì)總稱為血脂,其水平的變化常用來反映機(jī)體脂類代謝狀況和健康水平[30]。TG是魚類重要的能源物質(zhì),主要參與體內(nèi)能量的產(chǎn)生與儲存,血清中TG水平較高表明肝胰臟中脂肪的分解代謝較低[31]。TC是合成膽汁酸、維生素D和甾體激素的主要原料,并參與形成細(xì)胞膜[32]。血清中FFA水平可衡量機(jī)體脂肪動員的程度[33]。本研究中,飼料中添加表面活性素后吉富羅非魚血清中TG、TC水平顯著降低,F(xiàn)FA水平顯著升高,表明添加表面活性素可促進(jìn)機(jī)體對脂類物質(zhì)的轉(zhuǎn)化和利用,加速TC分解代謝,抑制TC在血液中的沉積,提高TG的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝,具有明顯的降血脂作用。

    魚類體內(nèi)的特異性免疫機(jī)制不完善,維持機(jī)體健康主要依賴于非特異性免疫機(jī)制[34]。血清中ACP、AKP和LZM活性等是常用來評價魚類免疫功能狀況的非特異性免疫指標(biāo)。本試驗中,飼料中添加表面活性素后吉富羅非魚血清中AKP活性有增強(qiáng)的趨勢,說明表面活性素一定程度地提高了機(jī)體的免疫力[35]。LZM是一種具有溶菌活性的堿性蛋白,具有抵抗病原微生物感染的作用,是魚類生理防御水平的重要指標(biāo)之一[36]。本研究中,飼料中添加表面活性素提高了吉富羅非魚血清中LZM活性,表明非特異性免疫功能增強(qiáng)??梢?,飼料中添加表面活性素可提高吉富羅非魚的非特異性免疫功能,這可能與表面活性素具有抗菌、抗病毒活性有關(guān)[15-16]。

    3.3 飼料中添加表面活性素對吉富羅非魚肝胰臟脂肪代謝關(guān)鍵酶水平或活性的影響

    魚類的脂肪代謝主要在肝胰臟中完成,包括合成代謝、體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)以及分解代謝等過程。肝胰臟中相關(guān)代謝酶的水平或活性可以反映出魚類體內(nèi)脂肪的代謝狀況[37]。FAS是催化乙酰輔酶A酶促系列反應(yīng)合成棕櫚酸的關(guān)鍵酶,ACC是催化乙酰輔酶A形成丙二酰輔酶A反應(yīng)最關(guān)鍵的酶,兩者在脂肪酸合成過程中起著重要作用,控制著體內(nèi)脂肪合成的強(qiáng)弱,從而影響機(jī)體脂肪沉積[38]。飼料中添加表面活性素后,吉富羅非魚肝胰臟FAS水平顯著降低,表明脂肪的合成代謝受到抑制,但是對ACC水平無顯著影響。HL和LPL是魚類肝臟中參與脂肪降解的2種關(guān)鍵酶。HL作為配體,還可促進(jìn)低密度脂蛋白和乳糜微粒殘粒進(jìn)入肝細(xì)胞,參與高密度脂蛋白膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)和高密度脂蛋白殘粒的分解[37]。LPL是一種糖蛋白,存在于多種細(xì)胞和組織中,主要催化血漿中乳糜微粒和極低密度脂蛋白中的TG分解[39],產(chǎn)生甘油并釋放出FFA,從而控制TG在各組織的量[40]。本研究中,飼料中添加表面活性素后吉富羅非魚肝胰臟HL和HPL活性顯著升高,表明脂肪分解代謝增強(qiáng)。這可能與表面活性素促進(jìn)載脂蛋白表達(dá)激活以及肝細(xì)胞中HL合成有關(guān)[10,41]。

    4 結(jié) 論

    飼料中添加表面活性素可提高吉富羅非魚腸道脂肪酶活性、改善血清生化指標(biāo)、調(diào)節(jié)脂肪代謝酶水平或活性,進(jìn)而促進(jìn)吉富羅非魚生長。本試驗條件下,建議吉富羅非魚飼料中表面活性素添加水平為50 mg/kg。

    [1] 程漢良,夏德全,吳婷婷.魚類脂類代謝調(diào)控與脂肪肝[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2006,18(4):294-298.

    [2] BORGES P,OLIVEIRA B,CASAL S,et al.Dietary lipid level affects growth performance and nutrient utilisation of senegalese sole (Soleasenegalensis) juveniles[J].The British Journal of Nutrition,2009,102(7):1007-1014.

    [3] ANDREWS J T,GIESEN A F,SCOTT F R.Antioxidants manage effects of oxidation on feeds,feed ingredients[J].Global Aquaculture Advocate,2004,12(6):66,68.

    [4] 牛福來,郭建來,胡迎利.乳化劑的作用機(jī)理及其在飼料工業(yè)中的應(yīng)用研究進(jìn)展[J].飼料工業(yè),2013,34(7):13-16.

    [5] OLSEN R E,KIESSLING A,MILLEY J E,et al.Effect of lipid source and bile salts in diet of atlantic salmon,SalmosalarL.,on astaxanthin blood levels[J].Aquaculture,2005,250(3/4):804-812.

    [6] 李紅霞,劉文斌,李向飛,等.飼料中添加氯化膽堿、甜菜堿和溶血卵磷脂對異育銀鯽生長、脂肪代謝和血液指標(biāo)的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報,2010,34(2):292-299.

    [7] 馮偉,王玲,張春曉,等.飼料脂肪源和乳化劑對牛蛙生長性能、腸道消化酶活力及肝臟生化指標(biāo)的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2015,27(6):1954-1962.

    [8] SHALIGRAM N S,SINGHAL R S.Surfactin—a review on biosynthesis,fermentation,purification and applications[J].Food Technology and Biotechnology,2010,48(2):119-134.

    [9] MEENA K R,KANWAR S S.Lipopeptides as the antifungal and antibacterial agents:applications in food safety and therapeutics[J].BioMed Research International,2014,48(6):1-25.

    [11] 都海明,戚廣州,王建軍,等.抗菌脂肽對肉雞生產(chǎn)性能和免疫機(jī)能的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報,2010,26(5):1009-1014.

    [12] 都海明,戚廣州,王建軍,等.抗菌脂肽對斷奶仔豬生長性能、腸道微生物及血液指標(biāo)的影響研究[J].中國糧油學(xué)報,2011,26(5):76-82.

    [13] 林逸朋.以半固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)表面素最適條件之探討與作為飼料添加劑之研究[D].碩士學(xué)位論文.基隆:國立臺灣海洋大學(xué),2013.

    [14] 石廣舉,孫力軍,王雅玲,等.NT-6抗菌脂肽對凡納濱對蝦生長性能及養(yǎng)殖源頭弧菌數(shù)的影響[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué),2014(12):119-122.

    [15] 史慶超,盧俊姣,陸鵬,等.飼料中添加抗菌脂肽對吉富羅非魚生長性能和腸道消化酶活性的影響[J].飼料工業(yè),2014,35(12):6-10.

    [16] 史慶超.抗菌肽Surfactin對吉富羅非魚生長及腸道健康的影響[D].碩士學(xué)位論文.廈門:集美大學(xué),2015.

    [17] 李晉南,徐奇友,王常安,等.谷氨酰胺及其前體物對松浦鏡鯉腸道消化酶活性及腸道形態(tài)的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2014,26(5):1347-1352.

    [18] CASPARY W F.Physiology and pathophysiology of intestinal absorption[J].The American Journal of Clinical Nutrition,1992,55(Suppl.1):299S-308S.

    [19] 劉莉如,楊開倫,滑靜,等.抗菌肽對海蘭褐仔公雞小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)及免疫活性細(xì)胞數(shù)量的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2013,25(1):190-197.

    [20] KAKINUMA A,HORI M,ISONO M,et al.Determination of amino acid sequence in surfactin,a crystalline peptidelipid surfactant produced byBacillussubtilis[J].Agricultural and Biological Chemistry,1969,33(6):991-992.

    [21] KAKINUMA A,SUGINO H,ISONO M,et al.Determination of fatty acid in surfactin and elucidation of the total structure of surfactin[J].Agricultural and Biological Chemistry,1969,33(6):973-976.

    [22] 劉建新.動物營養(yǎng)研究進(jìn)展(2012年版)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社,2012:327-337.

    [23] 翟少偉,李劍,史慶超.抗菌脂肽Surfactin的抗菌活性及應(yīng)用[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2015,27(5):1333-1340.

    [24] 李翌,鄒愛華,葉汝強(qiáng),等.表面活性素分子結(jié)構(gòu)對其膠束化行為的影響[J].物理化學(xué)學(xué)報,2011,27(5):1128-1134.

    [25] BAUER E,JAKOB S,MOSENTHIN R.Principles of physiology of lipid digestion[J].Asian Australasian Journal of Animal Sciences,2005,18(2):282-295.

    [26] 張媛媛,劉波,戈賢平,等.不同脂肪源對異育銀鯽生長性能、機(jī)體成分、血清生化指標(biāo)、體組織脂肪酸組成及脂質(zhì)代謝的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報,2012,36(7):1111-1118.

    [27] 周曉波,黃燕華,曹俊明,等.5種乳酸菌對羅非魚生長性能、體成分、血清生化指標(biāo)及腸道菌群的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2014,26(7):2009-2017.

    [28] 毛盼,胡毅,郇志利,等.投喂蠶豆飼料和去皮蠶豆飼料對草魚生長性能、肌肉品質(zhì)及血液生理生化指標(biāo)的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2014,26(3):803-811.

    [29] 林麗花,柯芙容,詹湉湉,等.凝結(jié)芽孢桿菌對黃羽肉雞生產(chǎn)性能、血清生化指標(biāo)及抗氧化功能的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2014,26(12):3806-3813.

    [30] 鄒思湘.動物生物化學(xué)[M].4版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2008:205-209.

    [31] WAGNER T,CONGLETON J L.Blood chemistry correlates of nutritional condition,tissue damage,and stress in migrating juvenile chinook salmon (Oncorhynchustshawytscha)[J].Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences,2014,61(7):1066-1074.

    [32] 宋理平,冒樹泉,馬國紅,等.飼料脂肪水平對許氏平鲉脂肪沉積、血液生化指標(biāo)及脂肪代謝酶活性的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報,2014,38(11):1879-1888.

    [33] 鄭銀樺,彭聰,吳秀峰,等.酵母酶解物對大口黑鱸生長性能、脂類代謝及腸道組織結(jié)構(gòu)的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2015,27(5):1605-1612.

    [34] 王自蕊,譙仕彥,李波,等.飼料中添加天蠶素抗菌肽對湘云鯽生長性能、非特異性免疫功能及抗病力的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2014,26(7):1856-1863.

    [35] 毛述宏,林鑫,楊陽,等.甘露聚糖酶對羅非魚生長性能、消化代謝和非特異性免疫力的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2013,25(7):1641-1647.

    [36] 陳曉瑛,曹俊明,黃燕華,等.飼料中添加低聚木糖對凡納濱對蝦幼蝦生長性能、非特異性免疫力、抗氧化功能及抗對蝦白斑綜合征病毒能力的影響[J].動物營養(yǎng)學(xué)報,2014,26(8):2397-2407.

    [37] 朱瑞俊,李小勤,謝駿,等.飼料中添加氯化膽堿對草魚成魚生長、脂肪沉積和脂肪代謝酶活性的影響[J].中國水產(chǎn)科學(xué),2010,17(3):527-535.

    [38] TIAN J J,JI H,OKU H,et al.Effects of dietary arachidonic acid (ARA) on lipid metabolism and health status of juvenile grass carp,Ctenopharyngodonidellus[J].Aquaculture,2014,430:57-65.

    [39] WANG A M,HAN G M,QI Z T,et al.Cloning of lipoprotein lipase (LPL) and the effects of dietary lipid levels onLPLexpression in GIFT tilapia (Oreochromisniloticus)[J].Aquaculture International,2013,21(6):1219-1232.

    [40] 孫建珍,王際英,張利民,等.不同脂肪水平下添加膽汁酸對大菱鲆(Scophthalmusmaximus)幼魚生長、體組成和脂肪代謝的影響[J].海洋與湖沼,2014,45(3):617-625.

    [41] DONG G F,ZOU Q,WANG H,et al.Conjugated linoleic acid differentially modulates growth,tissue lipid deposition,and gene expression involved in the lipid metabolism of grass carp[J].Aquaculture,2014,432:181-191.

    Author, ZHAI Shaowei, associate professor, E-mail: shaoweizhai@163.com

    (責(zé)任編輯 菅景穎)

    Effects of Surfactin Supplementation on Growth Performance,Serum Biochemical Indexes and Lipid Metabolism of Genetically Improved Farmed Tilapia (Oreochromisniloticus)

    ZHAI Shaowei LI Jian SUN Xiuwen

    (FisheriesCollegeofJimeiUniveristy,Xiamen361021,China)

    A 7-week feeding trial was conducted to evaluate the effects of surfactin supplementation on growth performance, serum biochemical indexes and lipid metabolism of genetically improved farmed tilapia (GIFT,Oreochromisniloticus). Two hundred and forty GIFT with the average body weight of (12.0±0.1) g were randomly divided into four groups with four replicates in each group and 15 fish in each replicate. The fish of four groups were fed experimental diets supplemented with 0 (control group), 50, 100 and 200 mg/kg surfactin, respectively. Results showed as follows: the final body weight, weight gain rate and specific growth rate were significantly increased by surfactin supplementation (P<0.05), and final body weight, weight gain rate and specific growth rate of 50 mg/kg supplementation group were significantly higher than those of 200 mg/kg supplementation group (P<0.05); the feed conversion ratio was significantly decreased by surfactin supplementation (P<0.05). Feeding rate and survival rate of all groups were similar (P>0.05). The lipase activity (except the 50 mg/kg supplementation group) in intestinal tract was significantly increased by surfactin supplementation (P<0.05), but the activities of amylase and protease were not significantly different among all groups (P>0.05). The serum urea nitrogen level was decreased by surfactin supplementation, and the significant difference was found between 50 mg/kg supplementation group and control group (P<0.05). The levels of serum albnmin and free fatty acid of supplementation groups were significantly higher than those of control group (P<0.05). The levels of serum total cholesterol (except the 200 mg/kg supplementation group) and triglyceride of supplementation groups were significantly lower than those of control group (P<0.05). The activities of serum acid phosphatase and alkaline phosphatase were not significantly different among all groups (P>0.05). The serum lysozyme activity of surfactin supplementation groups were significantly higher than that of control group (P<0.05), and the lysozyme activity of 50 mg/kg supplementation group was the highest among all groups. Compared with control group, the fatty acid synthetase level in hepatopancreas of supplementation groups were significantly decreased (P<0.05), while the acetyl CoA carboxylase level in hepatopancreas was not affected by surfactin supplementation (P>0.05). The activities of hepatic lipase and lipoprotein lipase in hepatopancreas were significantly increased by surfactin supplementation (P<0.05), but no significant differences of those two enzymes were found among all supplementation groups (P>0.05). In conclusion, the recommended dietary surfactin supplementation level is 50 mg/kg, which can increase the intestinal lipase activity, improve the serum biochemical indexes and regulate the enzyme levels/activities of lipid metabolism, and then improve the growth of GIFT under present experimental condition.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2015, 27(12):3959-3967]

    surfactin; genetically improved farmed tilapia; growth performance; lipid metabolism

    10.3969/j.issn.1006-267x.2015.12.038

    2015-06-04

    科技部國際科技合作與交流專項“海洋生物表面活性素應(yīng)用于水產(chǎn)動物飼料的研究”(2014DFT30150)

    翟少偉(1973—),男,河北晉州人,副教授,碩士生導(dǎo)師,博士,研究方向為動物營養(yǎng)與飼料資源開發(fā)。E-mail: shaoweizhai@163.com

    S963

    A

    1006-267X(2015)12-3959-09

    猜你喜歡
    血清
    血清免疫球蛋白測定的臨床意義
    中老年保健(2021年3期)2021-08-22 06:50:04
    Meigs綜合征伴血清CA-125水平升高1例
    慢性腎臟病患者血清HIF-1α的表達(dá)及臨床意義
    慢性鼻-鼻竇炎患者血清IgE、IL-5及HMGB1的表達(dá)及其臨床意義
    血清H-FABP、PAF及IMA在冠心病患者中的表達(dá)及其臨床意義
    血清IL-6、APC、CRP在膿毒癥患者中的表達(dá)及臨床意義
    血清HBV前基因組RNA的研究進(jìn)展
    血清馴化在豬藍(lán)耳病防控中的應(yīng)用
    LC-MS/MS法同時測定養(yǎng)血清腦顆粒中14種成分
    中成藥(2017年8期)2017-11-22 03:18:47
    血清胱抑素C與小動脈閉塞型卒中的關(guān)系
    窝窝影院91人妻| 观看美女的网站| 大型黄色视频在线免费观看| 99热这里只有是精品50| 一边摸一边抽搐一进一小说| 久久精品国产自在天天线| 日韩欧美精品v在线| 999久久久精品免费观看国产| av视频在线观看入口| 老鸭窝网址在线观看| 久久久久国内视频| 亚洲人与动物交配视频| 国产单亲对白刺激| 99久国产av精品| 日本三级黄在线观看| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产综合懂色| av女优亚洲男人天堂| 亚洲18禁久久av| 两个人的视频大全免费| 久久久久久久久中文| 国产69精品久久久久777片| 两个人视频免费观看高清| www日本黄色视频网| 亚洲最大成人中文| 国产精品久久电影中文字幕| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产精品av视频在线免费观看| 又黄又粗又硬又大视频| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品久久视频播放| 18禁国产床啪视频网站| 三级国产精品欧美在线观看| 国产av麻豆久久久久久久| xxxwww97欧美| 久久久久久久精品吃奶| 国产免费av片在线观看野外av| 九九在线视频观看精品| 欧美最黄视频在线播放免费| 最新在线观看一区二区三区| 欧美成人性av电影在线观看| 久久99热这里只有精品18| 全区人妻精品视频| 国产 一区 欧美 日韩| 最近在线观看免费完整版| 国产精品三级大全| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 日本熟妇午夜| 男女那种视频在线观看| 午夜激情欧美在线| 超碰av人人做人人爽久久 | 全区人妻精品视频| 午夜视频国产福利| 最新在线观看一区二区三区| 日日夜夜操网爽| 亚洲精华国产精华精| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 日本五十路高清| 网址你懂的国产日韩在线| 看黄色毛片网站| 国产高清videossex| 色视频www国产| 免费观看的影片在线观看| 日韩欧美免费精品| 在线免费观看的www视频| 久久人人精品亚洲av| 麻豆久久精品国产亚洲av| 搞女人的毛片| 欧美最黄视频在线播放免费| 特大巨黑吊av在线直播| 一级作爱视频免费观看| 在线观看午夜福利视频| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 一进一出好大好爽视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产一区二区三区视频了| 日本熟妇午夜| 色综合婷婷激情| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 免费在线观看成人毛片| 午夜福利在线观看吧| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 淫妇啪啪啪对白视频| av片东京热男人的天堂| 一边摸一边抽搐一进一小说| a级毛片a级免费在线| 国产真人三级小视频在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 内射极品少妇av片p| 国产成人av激情在线播放| 欧美一级毛片孕妇| 亚洲欧美日韩高清专用| 一个人免费在线观看的高清视频| 久久久久久大精品| 亚洲精品粉嫩美女一区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲片人在线观看| 国产真实伦视频高清在线观看 | 精品免费久久久久久久清纯| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲欧美日韩无卡精品| 我的老师免费观看完整版| 国内精品一区二区在线观看| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 欧美大码av| 国产精品久久久久久久久免 | 国产成人系列免费观看| 国产乱人视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 在线观看66精品国产| 国产熟女xx| 一级毛片女人18水好多| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 国产亚洲精品久久久久久毛片| 欧美精品啪啪一区二区三区| 午夜日韩欧美国产| 国产成人av激情在线播放| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 夜夜夜夜夜久久久久| 99在线视频只有这里精品首页| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 国产高清有码在线观看视频| 欧美一区二区亚洲| 亚洲av电影在线进入| 国产黄a三级三级三级人| 男女床上黄色一级片免费看| 丰满的人妻完整版| 一区福利在线观看| av国产免费在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产高清视频在线播放一区| 全区人妻精品视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 色老头精品视频在线观看| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日本一本二区三区精品| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 国产精品亚洲一级av第二区| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲国产精品合色在线| 一本综合久久免费| 亚洲国产欧美网| 成人精品一区二区免费| 中文字幕av在线有码专区| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 成人欧美大片| 久久久精品大字幕| 亚洲在线观看片| 国产在线精品亚洲第一网站| 欧美大码av| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产精品一区二区免费欧美| 久久久久久久亚洲中文字幕 | 欧美一级毛片孕妇| 国产中年淑女户外野战色| 精品熟女少妇八av免费久了| tocl精华| 一本一本综合久久| 久久久久九九精品影院| 中亚洲国语对白在线视频| 69av精品久久久久久| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 日韩欧美三级三区| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲精品成人久久久久久| 2021天堂中文幕一二区在线观| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产三级中文精品| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产99白浆流出| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲成人久久性| 大型黄色视频在线免费观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 精品人妻1区二区| 在线视频色国产色| 午夜福利欧美成人| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 久久久成人免费电影| 18禁国产床啪视频网站| 波多野结衣高清作品| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产高清激情床上av| 黄色女人牲交| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲精品成人久久久久久| 草草在线视频免费看| 香蕉av资源在线| 亚洲精品国产精品久久久不卡| av视频在线观看入口| 老鸭窝网址在线观看| 99久久无色码亚洲精品果冻| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲七黄色美女视频| 狠狠狠狠99中文字幕| 两个人视频免费观看高清| av视频在线观看入口| 日韩av在线大香蕉| 青草久久国产| 国内精品久久久久久久电影| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产久久久一区二区三区| 日本一本二区三区精品| 18+在线观看网站| 日韩精品中文字幕看吧| 欧美日韩综合久久久久久 | 国产av在哪里看| 在线视频色国产色| 免费av毛片视频| 国产三级黄色录像| 日韩欧美免费精品| 日韩av在线大香蕉| 欧美乱妇无乱码| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产在线精品亚洲第一网站| 色综合婷婷激情| 精品福利观看| 99视频精品全部免费 在线| 精品电影一区二区在线| av国产免费在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 十八禁网站免费在线| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产真实乱freesex| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 波多野结衣巨乳人妻| 色老头精品视频在线观看| 天堂网av新在线| 欧美中文综合在线视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 看片在线看免费视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 757午夜福利合集在线观看| 黄色日韩在线| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 老熟妇仑乱视频hdxx| av天堂在线播放| 午夜福利欧美成人| 国产91精品成人一区二区三区| 岛国视频午夜一区免费看| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 叶爱在线成人免费视频播放| 久久亚洲真实| 亚洲国产色片| 欧美3d第一页| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 99热精品在线国产| 香蕉久久夜色| 手机成人av网站| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 日韩欧美 国产精品| 波多野结衣高清无吗| 草草在线视频免费看| 国产精品,欧美在线| 亚洲精品粉嫩美女一区| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美激情在线99| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产真实乱freesex| 欧美丝袜亚洲另类 | 免费无遮挡裸体视频| 熟女电影av网| 神马国产精品三级电影在线观看| 一a级毛片在线观看| 国产精品一区二区三区四区久久| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产精品香港三级国产av潘金莲| 变态另类丝袜制服| 男女视频在线观看网站免费| 亚洲人成伊人成综合网2020| 最近最新中文字幕大全电影3| 一本综合久久免费| 亚洲一区二区三区色噜噜| 在线观看一区二区三区| 丰满乱子伦码专区| 最近最新免费中文字幕在线| 热99re8久久精品国产| 在线播放国产精品三级| 香蕉久久夜色| 免费在线观看影片大全网站| 久久这里只有精品中国| 一个人免费在线观看的高清视频| 日韩欧美精品免费久久 | 青草久久国产| 女人被狂操c到高潮| 国产 一区 欧美 日韩| 色综合婷婷激情| 亚洲中文字幕日韩| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 日日干狠狠操夜夜爽| 久久久国产成人免费| 亚洲男人的天堂狠狠| 成人精品一区二区免费| 欧美最新免费一区二区三区 | 亚洲人成网站高清观看| 精品福利观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲内射少妇av| 高清毛片免费观看视频网站| 亚洲欧美精品综合久久99| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 中文亚洲av片在线观看爽| 一级a爱片免费观看的视频| 床上黄色一级片| 精品久久久久久久末码| 很黄的视频免费| 久久国产精品人妻蜜桃| 免费观看精品视频网站| 成人永久免费在线观看视频| 久久精品91蜜桃| av国产免费在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 久久亚洲真实| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 中文在线观看免费www的网站| 91九色精品人成在线观看| 午夜两性在线视频| 村上凉子中文字幕在线| 波多野结衣高清作品| 桃红色精品国产亚洲av| svipshipincom国产片| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 国产高清三级在线| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 身体一侧抽搐| 热99在线观看视频| 久久久精品欧美日韩精品| 毛片女人毛片| 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 日本a在线网址| 午夜激情福利司机影院| 亚洲av成人精品一区久久| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲欧美日韩无卡精品| 九九热线精品视视频播放| 免费观看的影片在线观看| 内地一区二区视频在线| 一个人看视频在线观看www免费 | 午夜福利在线观看吧| 欧美成人免费av一区二区三区| 波多野结衣巨乳人妻| 日本黄色视频三级网站网址| 色噜噜av男人的天堂激情| 中文字幕熟女人妻在线| 久久久色成人| www.熟女人妻精品国产| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 97超视频在线观看视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲人成网站在线播| 99国产精品一区二区三区| 免费看a级黄色片| 淫秽高清视频在线观看| 欧美日韩一级在线毛片| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲美女视频黄频| 欧美激情在线99| 国产v大片淫在线免费观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久精品人妻少妇| 亚洲内射少妇av| 好男人在线观看高清免费视频| xxx96com| 久久精品91蜜桃| 97超视频在线观看视频| 久久久久九九精品影院| 99热这里只有是精品50| 日本黄大片高清| 波多野结衣高清作品| 真人一进一出gif抽搐免费| 亚洲在线自拍视频| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲av美国av| 日韩亚洲欧美综合| 怎么达到女性高潮| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 久久午夜亚洲精品久久| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 999久久久精品免费观看国产| 国产精品一区二区三区四区久久| 男人和女人高潮做爰伦理| 欧美一级a爱片免费观看看| 国内精品美女久久久久久| 哪里可以看免费的av片| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 成人欧美大片| 97碰自拍视频| 深爱激情五月婷婷| 成年女人毛片免费观看观看9| 日本熟妇午夜| 热99在线观看视频| 国模一区二区三区四区视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美 | 免费观看人在逋| 性欧美人与动物交配| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产精品影院久久| 听说在线观看完整版免费高清| aaaaa片日本免费| 国产亚洲精品av在线| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲不卡免费看| 熟女电影av网| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 人人妻人人看人人澡| 久久人人精品亚洲av| 69人妻影院| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产精品亚洲一级av第二区| 亚洲av免费在线观看| 操出白浆在线播放| 中文资源天堂在线| www日本黄色视频网| 午夜福利在线观看吧| 男女那种视频在线观看| 国产高清视频在线播放一区| or卡值多少钱| 色综合欧美亚洲国产小说| 制服人妻中文乱码| 丁香六月欧美| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 我要搜黄色片| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 成年版毛片免费区| 99久久精品热视频| 亚洲最大成人手机在线| 丁香六月欧美| 日韩成人在线观看一区二区三区| 91久久精品国产一区二区成人 | 中文资源天堂在线| 一a级毛片在线观看| 久久性视频一级片| 欧美日本视频| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产亚洲av嫩草精品影院| a级一级毛片免费在线观看| 丁香欧美五月| 黑人欧美特级aaaaaa片| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 中文在线观看免费www的网站| 国产乱人视频| 欧美激情在线99| 亚洲在线观看片| 日韩欧美精品v在线| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 可以在线观看毛片的网站| 日本与韩国留学比较| 中亚洲国语对白在线视频| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲乱码一区二区免费版| 色精品久久人妻99蜜桃| 啦啦啦韩国在线观看视频| 村上凉子中文字幕在线| 亚洲精华国产精华精| 一级毛片女人18水好多| 国产野战对白在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 99精品在免费线老司机午夜| 久久精品人妻少妇| 男女之事视频高清在线观看| 国产精品永久免费网站| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲精品影视一区二区三区av| 人人妻人人看人人澡| 免费av毛片视频| e午夜精品久久久久久久| 欧美区成人在线视频| 听说在线观看完整版免费高清| 内地一区二区视频在线| 日本黄大片高清| 亚洲七黄色美女视频| 看免费av毛片| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产真实乱freesex| 成人国产综合亚洲| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产成人啪精品午夜网站| 老熟妇仑乱视频hdxx| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产精品电影一区二区三区| 国产一区在线观看成人免费| 99在线视频只有这里精品首页| 搡老熟女国产l中国老女人| 18禁国产床啪视频网站| 成年免费大片在线观看| 亚洲电影在线观看av| 超碰av人人做人人爽久久 | 99久久99久久久精品蜜桃| 免费av毛片视频| 国产97色在线日韩免费| 欧美不卡视频在线免费观看| 国产成人福利小说| 亚洲男人的天堂狠狠| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 一夜夜www| 国产成人a区在线观看| av国产免费在线观看| 青草久久国产| 国产精品99久久久久久久久| 国产私拍福利视频在线观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 成年版毛片免费区| 久久久久久久午夜电影| 久久伊人香网站| 国产三级在线视频| 禁无遮挡网站| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 18禁在线播放成人免费| 国产在线精品亚洲第一网站| eeuss影院久久| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 在线天堂最新版资源| 51午夜福利影视在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产美女午夜福利| 久久国产精品影院| 午夜福利免费观看在线| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产av在哪里看| 免费观看的影片在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 十八禁网站免费在线| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产精品久久视频播放| 在线观看舔阴道视频| 日韩欧美三级三区| 日本三级黄在线观看| 最好的美女福利视频网| 一本一本综合久久| 亚洲欧美日韩东京热| 国产亚洲欧美在线一区二区| 日本一本二区三区精品| 国产不卡一卡二| 桃色一区二区三区在线观看| 我的老师免费观看完整版| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产免费男女视频| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲人成网站高清观看| 日本 av在线| 99久国产av精品| av中文乱码字幕在线| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 一级黄色大片毛片| 成人午夜高清在线视频| 免费av观看视频| 少妇的逼好多水| 国产高清三级在线| 热99在线观看视频| 女人被狂操c到高潮| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 欧美成狂野欧美在线观看| 日本成人三级电影网站| 亚洲av第一区精品v没综合| 免费人成在线观看视频色| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 婷婷精品国产亚洲av在线| 一本一本综合久久| av福利片在线观看| 亚洲av熟女| 日本熟妇午夜| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产激情偷乱视频一区二区| 天堂动漫精品| 最新美女视频免费是黄的| 久久久成人免费电影| 欧美极品一区二区三区四区| 美女大奶头视频| 成人鲁丝片一二三区免费| 男人舔奶头视频| 无人区码免费观看不卡| 老熟妇仑乱视频hdxx| 麻豆国产av国片精品| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久久久国内视频| 亚洲专区国产一区二区| 91久久精品国产一区二区成人 | 国产视频一区二区在线看| 一个人观看的视频www高清免费观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 性色av乱码一区二区三区2| 国产免费男女视频| 精品久久久久久久末码| 老汉色∧v一级毛片| 国产成人av教育| 欧美+亚洲+日韩+国产| 51国产日韩欧美| 好男人电影高清在线观看| 国产真实乱freesex| 国产精品综合久久久久久久免费| 在线观看日韩欧美|