三疣梭子蟹幼蟹的維生素C需要量

侯迎梅 金 敏 張 穩(wěn) 霍雅文 周歧存

(寧波大學(xué)海洋學(xué)院魚類營養(yǎng)研究室，寧波315211)

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三疣梭子蟹幼蟹的維生素C需要量

侯迎梅 金 敏 張 穩(wěn) 霍雅文 周歧存*

(寧波大學(xué)海洋學(xué)院魚類營養(yǎng)研究室，寧波315211)

本試驗通過研究飼料中維生素C含量對三疣梭子蟹幼蟹生長、抗氧化性能以及非特異性免疫的影響，旨在確定三疣梭子蟹幼蟹的維生素C需要量。試驗配制維生素C含量分別為1.91、18.89、36.76、78.42、156.49和315.97 mg/kg的6種等能等氮的試驗飼料，以初始體重為(5.65±0.25) g的三疣梭子蟹幼蟹為試驗對象，飼養(yǎng)于室外水泥池的長方形塑料筐中，進行為期8周的養(yǎng)殖試驗。每種試驗飼料投喂60只幼蟹，每20只幼蟹作為1個重復(fù)。結(jié)果顯示：當(dāng)飼料中維生素C含量從1.91 mg/kg增加到36.76 mg/kg時，增重率和特定生長率顯著上升(P<0.05)；當(dāng)維生素C含量為從156.49 mg/kg增加到315.97 mg/kg時，增重率和特定生長率顯著降低(P<0.05)。1.91 mg/kg組的存活率顯著低于其他各組(P<0.05)。1.91 mg/kg組的飼料系數(shù)顯著高于其他各組(P<0.05)，以飼料中維生素C含量為78.42 mg/kg時飼料系數(shù)最低。飼料中維生素C含量對三疣梭子蟹幼蟹的蛻殼率及全蟹粗蛋白質(zhì)、水分和粗灰分含量均沒有產(chǎn)生顯著影響(P>0.05)，隨著飼料中維生素C含量的增加，全蟹粗脂肪含量基本上呈升高的趨勢，315.97 mg/kg組顯著高于其他各組(P<0.05)。血清中總蛋白、葡萄糖含量不受飼料中維生素C含量的顯著影響(P>0.05)。1.91 mg/kg組血清中總膽固醇含量顯著高于其他各組(P<0.05)。36.76 mg/kg組血清中甘油三酯含量最高，顯著高于156.49 mg/kg組(P<0.05)。血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性變化趨勢一致，均以36.76 mg/kg組最高，并顯著高于其他各組(P<0.05)；同時，1.91、18.89、78.42 mg/kg組血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性顯著高于156.49、315.97 mg/kg組(P<0.05)。血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶/谷草轉(zhuǎn)氨酶以36.76 mg/kg組最低，顯著低于78.42和315.97 mg/kg組(P<0.05)。飼料中維生素C含量對三疣梭子蟹幼蟹血清中溶菌酶活性沒有顯著影響(P>0.05)。血清中堿性磷酸酶活性隨著飼料中維生素C含量的增加而升高，315.97 mg/kg組顯著高于其他各組(P<0.05)。隨著飼料中維生素C 含量從1.91 mg/kg增加到78.42 mg/kg，血清中超氧化物歧化酶活性顯著升高(P<0.05)，而隨著飼料中維生素C含量的進一步增加，血清中超氧化物歧化酶活性無顯著變化(P>0.05)。1.91 mg/kg組血清中丙二醛含量顯著高于其他各組(P<0.05)。以特定生長率為評價指標(biāo)，通過折線模型分析得出三疣梭子蟹幼蟹對維生素C的需要量為42.60 mg/kg(飼料干重)。

維生素C；三疣梭子蟹；生長；抗氧化性能；非特異性免疫

三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)因其具有肉質(zhì)好、生長快、產(chǎn)量高、環(huán)境適應(yīng)能力強等優(yōu)點，頗受廣大消費者和養(yǎng)殖戶的青睞，是我國重要的海產(chǎn)經(jīng)濟蟹類。近年來，隨著養(yǎng)殖規(guī)模的擴大以及集約化程度的提高，水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境日趨惡化，導(dǎo)致越來越多疾病的暴發(fā)，三疣梭子蟹的病害問題受到人們的廣泛重視。除了采用藥物防治和優(yōu)化養(yǎng)殖環(huán)境外，提高三疣梭子蟹自身的免疫力對病害的防治有著重要意義。近年來，一些研究者通過添加營養(yǎng)素(如維生素C等)及免疫增強劑等手段，增強養(yǎng)殖動物的非特異性免疫力，更具實際應(yīng)用價值[1]。

維生素C不僅是維持甲殼動物正常生長、繁殖和健康等所必需的營養(yǎng)素，而且對其維持正常代謝活動、以及治療組織創(chuàng)傷、抵御疾病侵襲具有重要意義[2]。近年來，很多學(xué)者研究了維生素C對對蝦生長的影響，徐志昌等[3]認(rèn)為維生素C能夠促進中國對蝦生長以及提高存活率，適量的維生素C能促進對蝦的蛻殼。處于變態(tài)期的蝦要經(jīng)歷形態(tài)學(xué)和生化過程的很大變化，此時對維生素C的需求比非變態(tài)期的蝦要高；此外，蝦類在蛻皮時膠原蛋白形成很快，這需要更多的維生素C作為輔助因子[4]。同時，維生素C影響甲殼類最外層的硬化，此硬化層是由一種外殼蛋白和苯醌通過交聯(lián)作用而形成，而體內(nèi)苯醌的形成需要維生素C的參與[5]。研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加一定量的維生素C能顯著提高南美白對蝦的成活率[6]。養(yǎng)殖實踐中已證明提高飼料中維生素C的含量能增強魚、蝦和蟹對環(huán)境污染物、刺激物的耐受力以及對病菌的免疫力。王偉慶等[7]報道，注射金黃色葡萄球菌后，中國對蝦細胞的吞噬能力隨飼料中維生素C含量的增加而增強。增加飼料中維生素C的含量能增強蝦蟹類的抗應(yīng)激能力，飼料中的維生素C能夠提高中國對蝦對缺氧的耐受力[7]。劉曉玲等[8]研究表明，與鎘中毒對照組相比，添加維生素C組能延緩河蟹肝胰腺中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、過氧化氫酶(catalase，CAT)、谷胱甘肽過氧化物酶活性的降低時間，減小其降低幅度[9]。目前，關(guān)于維生素C與河蟹、對蝦的生長和抗病力關(guān)系的試驗很多，但是關(guān)于三疣梭子蟹的卻很少，如何提高三疣梭子蟹的抗病力成了營養(yǎng)學(xué)研究者關(guān)注的重要問題之一。本試驗旨在研究飼料中維生素C含量對三疣梭子蟹幼蟹生長、抗氧化性能及非特異性免疫的影響，以確定三疣梭子蟹幼蟹對飼料中維生素C的需要量，為甲殼動物營養(yǎng)免疫學(xué)積累基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料配制

以秘魯紅魚粉、豆粕、小麥蛋白粉和磷蝦粉為蛋白質(zhì)源，魚油、豆油和大豆卵磷脂為主要脂肪源，并補充礦物質(zhì)預(yù)混料、維生素預(yù)混料等以滿足幼蟹的營養(yǎng)需求，配制基礎(chǔ)飼料(表1)，然后在基礎(chǔ)飼料中分別添加0、20、40、80、160和320 mg/kg的維生素C，配制成6種等氮等能的試驗飼料，實測各試驗飼料中維生素C含量分別為1.91、18.89、36.76、78.42、156.49、315.97 mg/kg。所有原料粉碎后過80目篩，混勻后添加油脂和水(30%原料混合物干重)，以雙螺桿擠條機擠壓并經(jīng)飼料顆粒機制成2種規(guī)格(直徑3 mm，長度5 mm；直徑5 mm，長度7 mm)的顆粒飼料，飼料90 ℃熟化30 min，陰涼處風(fēng)干，用封口袋包裝后于-20 ℃下保存待用。

1.2 飼養(yǎng)管理

養(yǎng)殖試驗在寧波市象山縣東陳鄉(xiāng)鑫億梭子蟹水產(chǎn)公司進行，試驗用三疣梭子蟹幼蟹購自寧波兢業(yè)育苗廠，幼蟹置于水泥池中暫養(yǎng)。本試驗采用單體筐養(yǎng)的方式，塑料養(yǎng)殖筐規(guī)格為80 cm×40 cm×40 cm，養(yǎng)殖筐中間設(shè)置一隔板，隔板兩邊各放一裝有沙子的沙盒，作為蟹子的棲息場所，沙盒規(guī)格為25 cm×15 cm×10 cm。挑選360只初始體重為(5.65±0.25) g的幼蟹，隨機分配于180只養(yǎng)殖筐中(2只/筐)，養(yǎng)殖筐隨機分組，每種試驗飼料投喂60只幼蟹，每20只幼蟹作為1個重復(fù)。試驗開始前統(tǒng)一用基礎(chǔ)飼料馴化1周，試驗開始后每種試驗飼料每天投喂2次(07:00、17:00)，每天投喂量控制在幼蟹體重的6%～8%，每天早晨撈取殘餌和蛻殼，記錄死亡量、投餌量和蛻殼次數(shù)。所有養(yǎng)殖筐置于1個水泥池(70.0 m×80.0 m×0.6 m)中，池底鋪設(shè)充氧管不間斷充氧，試驗期間水溫26～30 ℃，溶解氧濃度6.5～7.0 mg/L，氨氮濃度≤0.5 mg/L，pH 7.8～8.2，鹽度26‰～28‰，2～3 d換水1次，每次換水量約為30%，試驗期為8周。

1.3 樣品采集、分析與計算

試驗結(jié)束時，清點每組存活的幼蟹數(shù)量。停食24 h后取樣，每組幼蟹分別稱重，并隨機取4只幼蟹從第3步足抽取血液，分別放入1.5 mL離心管中，4 ℃靜置過夜，3 000 r/min離心8 min，取上清，用于血清生化指標(biāo)測定。另外，每個組隨機取4只幼蟹進行蟹體常規(guī)營養(yǎng)成分分析。

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

1)每千克維生素預(yù)混料含有Contained the following per kg of vitamin premix：硫胺素 aneurine 40 mg，核黃素 lactoflavin 80 mg，鹽酸吡哆醇 puridoxine hydrochloride 120 mg，VK 40 mg，肌醇 inositol 4 000 mg，D-泛酸鈣D-calcium pantothenate 600 mg，葉酸 folic acid 8 mg，生物素 biotin 4 mg，VE 200 mg，氯化膽堿 choline chloride 6 000 mg，尼克酸 nicotinic acid 400 mg，β-胡蘿卜素 beta carotene 96 mg，鈣化醇 calciferol 12 mg，氰鈷胺素 cobalamine 0.8 mg。

2)每千克礦物質(zhì)預(yù)混料含有Contained the following per kg of mineral premix：Ca(H2PO4)2·H2O 12 500 mg，K2HPO4·3H2O 8 400 mg，Ca3(PO4)211 550 mg，CaCO314 500 mg，KI 15 mg，MgSO413 000 mg，ZnSO41.5 mg，MnSO465 mg，CoCl2·6H2O 40 mg，CuSO425 mg，F(xiàn)eSO4630 mg，NaHSeO30.5 mg。

1.3.1 生長及飼料利用指標(biāo)

增重率(WGR,%)=100×

(終末體重-初始體重)/初始體重；

特定生長率(SGR,%/d)=100×

(ln終末體重-ln初始體重)/試驗天數(shù)；

飼料系數(shù)(FCR)=飼料攝入量(干重)/

幼蟹體增重(濕重)；

脫殼率(MR,%)=100×2×蛻殼次數(shù)/

(開始時蟹個數(shù)+結(jié)束時蟹個數(shù))；

存活率(SR，%)=100×開始時蟹個數(shù)/

結(jié)束時蟹個數(shù)。

1.3.2 常規(guī)營養(yǎng)成分分析

用于常規(guī)營養(yǎng)成分分析的飼料和幼蟹樣品置于105 ℃烘箱中至恒重，測定方法參照AOAC(1995)。水分含量為烘干前后樣品的質(zhì)量變化量；粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮儀(FOSS，Tecator，Hoganas，瑞典)測定樣品的總氮后通過總氮量乘以6.25而得；粗脂肪含量采用索氏抽提儀(Soxtec System HT6，Tecator，瑞典)測定；粗灰分含量采用灼燒法測定，樣品置于馬福爐中550 ℃下灼燒8 h至恒重。所有指標(biāo)均重復(fù)測定2次，若同一樣品測定結(jié)果相對偏差大于2%，則增加重復(fù)數(shù)，采用相對偏差2%以內(nèi)的2個測定值的平均值作為測定結(jié)果。維生素C含量測定采用高效液相色譜法。

1.3.3 血清健康指標(biāo)

血清中總蛋白(total protein,TP)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、葡萄糖(glucose，GLU)含量和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase，AST)活性送往寧波大學(xué)附屬醫(yī)院檢測。

1.3.4 非特異性免疫指標(biāo)

血清溶菌酶(lysozyme,LSZ)活性采用Hultmark等[10]的改進方法進行。以溶壁微球菌凍干粉為底物，用0.1 mol/L的磷酸鉀鹽緩沖液(pH=6.4)配制成一定濃度的底物懸液(570 nm處的吸光度值為0.3)，在此法規(guī)定條件下，LSZ活性計算公式如下：

LSZ(U/mL)=(A0-A)/A。

式中：A0為反應(yīng)之前菌懸液的吸光度值；A為反應(yīng)之后菌懸液的吸光度值。

血清堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，AKP)活性采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進行測定。

1.3.5 抗氧化指標(biāo)

血清SOD活性和丙二醛(MDA)含量采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進行測定。

1.4 統(tǒng)計分析

采用SPSS 16.0對所有數(shù)據(jù)進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，若組間差異顯著(P<0.05)，則進行Tukey’s多重比較。分析結(jié)果均用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié) 果

2.1 生長與飼料利用指標(biāo)

由表2可知，維生素C含量從1.91 mg/kg上升到36.76 mg/kg時，增重率和特定生長率顯著升高(P<0.05)；當(dāng)維生素C含量從36.76 mg/kg上升到156.49 mg/kg時，增重率和特定生長率未發(fā)生顯著變化(P>0.05)；當(dāng)維生素C含量為從156.49 mg/kg增加到315.97 mg/kg時，增重率和特定生長率顯著降低(P<0.05)。以特定生長率為評價指標(biāo)，通過折線模型回歸方程y=0.011 2x+3.847 3(R2=0.916 8，x<36.76)和y=-0.001 1x+4.371 3(R2=0.864 0，x>36.76)，得出三疣梭子蟹幼蟹的維生素C需要量為42.60 mg/kg(飼料干重)(圖1)。飼料中未添加維生素C組(1.91 mg/kg組)的存活率顯著低于各添加組(P<0.05)。飼料系數(shù)隨著維生素C含量的增加呈波動變化，飼料中未添加維生素C組的飼料系數(shù)顯著高于各添加組(P<0.05)，以飼料中維生素C含量為78.42 mg/kg時飼料系數(shù)最低。

表2 各組三疣梭子蟹幼蟹的生長與飼料利用指標(biāo)

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

圖1 飼料中維生素C含量與三疣梭子蟹

2.2 全蟹常規(guī)營養(yǎng)成分

由表3可知，飼料中維生素C含量對三疣梭子蟹幼蟹全蟹水分、粗灰分和粗蛋白質(zhì)含量均沒有顯著影響(P>0.05)。隨著維生素C含量的增加，全蟹粗脂肪含量基本上呈升高的趨勢，在維生素C含量為315.97 mg/kg時，全蟹粗脂肪含量最高，顯著高于其他各組(P<0.05)。

2.3 血清健康指標(biāo)

由表4可知，飼料中維生素C含量對三疣梭子蟹幼蟹血清中TP和GLU含量沒有顯著影響(P>0.05)，而對血清中TC、TG含量及ALT和AST活性有顯著影響(P<0.05)。飼料中未添加維生素C組血清中TC含量顯著高于各添加組(P<0.05)。36.76 mg/kg組血清中TG含量最高，顯著高于156.49 mg/kg組(P<0.05)，其他組間差異不顯著(P>0.05)。血清中ALT和AST活性變化趨勢一致，均以36.76 mg/kg組最高，并顯著高于其他各組(P<0.05)；同時，1.91、18.89、78.42 mg/kg組血清中ALT和AST活性顯著高于156.49、315.97 mg/kg組(P<0.05)。血清中ALT/AST以36.76 mg/kg組最低，顯著低于78.42和315.97 mg/kg組(P<0.05)。

表3 各組三疣梭子蟹幼蟹的全蟹常規(guī)營養(yǎng)成分

表4 各組三疣梭子蟹幼蟹的血清健康指標(biāo)

2.4 非特異性免疫指標(biāo)

由表5可知，飼料中維生素C含量對三疣梭子蟹幼蟹血清中LSZ活性沒有顯著影響(P>0.05)，但是在一定范圍內(nèi)，增加維生素C含量可提高血清中LSZ活性。血清中AKP活性隨著飼料中維生素C含量的增加而升高，315.97 mg/kg組顯著高于其他各組(P<0.05)。

2.5 抗氧化指標(biāo)

由表6可知，隨著飼料中維生素C含量從1.91 mg/kg增加到78.42 mg/kg，血清中SOD活性顯著升高(P<0.05)，而隨著飼料中維生素C含量的進一步增加，血清中SOD活性無顯著變化(P>0.05)。飼料中未添加維生素C組血清中MDA含量顯著高于各添加組(P<0.05)，各添加組間無顯著差異(P>0.05)。

表5 各組三疣梭子蟹幼蟹的非特異性免疫指標(biāo)

表6 各組三疣梭子蟹幼蟹的抗氧化指標(biāo)

3 討 論

本試驗結(jié)果表明，飼料中添加適量的維生素C對三疣梭子蟹幼蟹具有顯著的促生長作用，當(dāng)飼料中添加20～160 mg/kg維生素C(飼料中維生素C含量為36.76～156.49 mg/kg)時，增重率和特定生長率顯著高于未添加維生素C組，但是過量添加維生素C(飼料中維生素C含量為315.97 mg/kg時)增重率和特定生長率非但沒有增加，反而顯著下降，說明過量的維生素C抑制其生長。飼料中維生素C含量顯著影響三疣梭子蟹幼蟹的存活率，未添加維生素C組的存活率顯著低于各添加組。而劉襄河等[11]對南美白對蝦的研究結(jié)果表明，當(dāng)水體中的維生素C含量增加到0.9 g/m3時，對蝦的存活率有顯著提高，進一步提高水體中維生素C的含量，存活率無顯著變化，與本試驗結(jié)果相似。飼料中添加適量的維生素C對三疣梭子蟹幼蟹對飼料的利用有一定的促進作用，飼料中維生素C含量為78.42 mg/kg時飼料系數(shù)最低，顯著低于未添加維生素C組。但飼料中維生素C含量對三疣梭子蟹幼蟹的蛻殼率未產(chǎn)生顯著影響。綜上所述，飼料中維生素C含量為36.76～78.42 mg/kg時，三疣梭子蟹幼蟹生長和飼料利用較好，這與Moe等[12]對斑節(jié)對蝦的研究結(jié)果一致。然而，周歧存等[13]對凡納濱對蝦的研究表明，飼料中維生素C添加量為150 mg/kg時，對蝦的生長性能最好；宋理平等[14]對中國對蝦的研究結(jié)果表明，飼料中維生素C添加量為300 mg/kg時，對蝦的存活率最高，生長情況最好，或高或低都不利于對蝦的生長；周立斌等[15]研究表明，花鱸獲得最佳生長性能時飼料中維生素C添加量為103 mg/kg左右。不同研究結(jié)果存在差異的原因可能與研究的物種、維生素C添加形式不同有關(guān)。

對三疣梭子蟹幼蟹全蟹常規(guī)營養(yǎng)成分的分析表明，三疣梭子蟹幼蟹全蟹粗蛋白質(zhì)、粗灰分和水分含量不受飼料中維生素C含量的影響，但飼料中維生素C含量顯著影響全蟹粗脂肪含量，飼料中維生素C含量增加會使全蟹粗脂肪含量增加，這也許是由于維生素C參與體脂肪代謝的結(jié)果，其作用機理有待進一步研究[16]。

血液指標(biāo)被廣泛地用來評價動物的健康狀況、營養(yǎng)狀況及對環(huán)境的適應(yīng)狀況，是重要的生理、病理和毒理學(xué)指標(biāo)[17-18]。血清中TP含量反映了動物的營養(yǎng)與代謝狀況，也間接反映了機體免疫水平的高低。劉棟輝等[19]的研究表明添加維生素C磷酸酯能夠顯著提高斑節(jié)對蝦血清中TP含量。本試驗發(fā)現(xiàn)，除156.49 mg/kg組以外，其他各組血清中TP含量均高于未添加維生素C組，說明維生素C能促進機體蛋白質(zhì)的合成，進而提高三疣梭子蟹對蛋白質(zhì)的消化和吸收。血清膽固醇是體內(nèi)重要的脂類物質(zhì)，它不僅參與形成細胞膜，而且是合成膽汁酸、維生素D以及甾體激素的原料，膽固醇含量的高低反映了脂類吸收狀況，同時也可以反映肝臟脂肪代謝狀況[20]。不同程度的脂肪肝與肝臟內(nèi)TG積聚的量有關(guān)。徐文[21]研究顯示，高TG增加脂肪肝的患病率，而單純的高TC對脂肪肝的產(chǎn)生沒有多大影響，脂肪肝與TG、TC含量之間的關(guān)系還有待進一步的研究。本試驗中，三疣梭子蟹幼蟹血清中TC含量隨著維生素C含量的增加而降低，可能是維生素C促進了三疣梭子蟹肝胰腺脂肪代謝，其機理有待進一步研究；血清中TG含量隨著飼料中維生素C含量的增加基本上呈降低的趨勢，說明維生素C可以降低血清中TG的含量。血糖是反映動物糖代謝和全身組織細胞功能狀態(tài)以及內(nèi)分泌機能的一個重要指標(biāo)。本試驗結(jié)果表明，飼料中維生素C含量對三疣梭子蟹血清中GLU含量沒有產(chǎn)生顯著影響。血清中ALT和AST活性的變化與肝細胞的炎癥、變性和壞死密切相關(guān)，是反映肝細胞受損傷的主要敏感指標(biāo)[22]。長期嚴(yán)重脂肪肝可因肝臟內(nèi)代謝紊亂或者脂變使得肝細胞壓迫肝竇引起肝細胞缺血壞死，導(dǎo)致肝臟ALT活性升高，誘發(fā)肝纖維化及肝硬化[23]。本試驗中血清ALT和AST活性基本上隨著飼料中維生素C含量的增加呈降低的趨勢，說明維生素C可以抑制ALT和AST活性的升高，防止肝臟受到損傷。

LSZ是吞噬細胞殺菌的物質(zhì)基礎(chǔ)，在甲殼類動物的免疫防御中起重要作用。它能夠水解革蘭氏陽性細菌的細胞壁，破壞入侵體內(nèi)的異物，從而擔(dān)負起機體防御的功能[24]。王文靖等[25]研究表明，大劑量投喂維生素C 后，凡納濱對蝦的LSZ活性得到提高；陳亞坤[26]研究表明，飼料中添加適量維生素C可以提高南美白對蝦的LSZ活性；宋理平等[14]的研究表明，飼料中添加適量維生素C后能夠提高中國對蝦幼蝦的LSZ活性，而本試驗結(jié)果表明，飼料中維生素C含量對三疣梭子蟹幼蟹血清中LSZ活性沒有顯著影響，但是LSZ活性隨著飼料中維生素C含量的增加先升高，在78.42 mg/kg組達到最大值，隨后有降低的趨勢。這可能與試驗對象、試驗對象的生長階段和飼養(yǎng)環(huán)境不同有關(guān)，具體原因有待進一步研究。

AKP可催化所有的磷酸單酯及磷酸基團的轉(zhuǎn)移反應(yīng)，它直接參與磷的代謝，亦與DNA、RNA、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等代謝有關(guān)，它對鈣質(zhì)吸取、磷酸鈣沉積、骨骼形成、甲殼素分泌及形成都有重要的作用；蝦蟹類等甲殼動物在生長過程中都要經(jīng)歷蛻殼過程，該酶對蝦蟹類的生存、生長有特別重要的意義[27-28]。本試驗結(jié)果顯示，飼料中添加維生素C可以提高三疣梭子蟹幼蟹血清中AKP活性，當(dāng)維生素C含量增加到315.97 mg/kg時，血清中AKP活性顯著提高。這與艾春香等[29]對中華絨螯蟹的研究結(jié)果一致，其認(rèn)為飼料中添加適量的維生素C后，可刺激細胞內(nèi)的AKP活性增強，隨后釋放到血清中，使血清中的AKP活性也增強，促進中華絨螯蟹細胞中的物質(zhì)代謝，進而促進中華絨螯蟹生長，也間接增強了其非特異性免疫能力。

SOD是生物體內(nèi)一種重要的抗氧化防御酶，其基本功能是清除由代謝產(chǎn)生的活性氧，控制自由基引起質(zhì)膜過氧化[30]。當(dāng)蝦蟹類機體受到輕度逆境脅迫時，SOD活性被誘導(dǎo)，而受重度逆境脅迫時，其活性則被抑制。SOD活性可以作為蝦蟹類免疫反應(yīng)的一個重要指標(biāo)[31-32]。艾春香等[33]研究表明，飼料中添加維生素C后，河蟹不同組織中SOD的活性顯著降低，當(dāng)維生素C添加量為50～100 mg/kg時，可有效地增強河蟹的非特異性免疫能力。MDA是膜脂質(zhì)過氧化的最終分解產(chǎn)物，其含量的高低可以反映機體遭受過氧化損害的程度。本試驗結(jié)果顯示，血清中SOD活性隨著飼料中維生素C含量增加而升高，而血清中MDA含量隨著飼料中維生素C含量增加而降低，且各添加組血清中MDA含量顯著低于未添加維生素C組。這說明維生素C對三疣梭子蟹抗氧化系統(tǒng)有一定的影響，維生素C可有效提高機體抗氧化酶活性和降低脂質(zhì)過氧化物MDA對機體的損害，從而增強機體的抗氧化功能。這與胡毅等[34]對青魚幼魚的研究結(jié)果、邢克智等[35]對點帶石斑魚的研究結(jié)果相一致。但是也有學(xué)者認(rèn)為，維生素C既發(fā)揮其調(diào)節(jié)機體新陳代謝的生理功能，又發(fā)揮其較強的抗氧化保護作用，而動物體內(nèi)的兩大抗氧化體系的作用是協(xié)同的，動物體為了保持自身自由基的產(chǎn)生和清除達到動態(tài)平衡，SOD的活性就相應(yīng)地降低了。艾春香等[28]認(rèn)為隨著維生素C添加量的增加，中華絨螯蟹血清中SOD活性顯著降低，表明維生素C作為天然抗氧化劑在中華絨螯蟹體內(nèi)發(fā)揮了很大的作用。

綜上所述，飼料中添加適量的維生素C可以促進三疣梭子蟹幼蟹的生長，并可以改善其對飼料的利用，飼料中維生素C含量為36.76～78.42 mg/kg時，三疣梭子蟹的生長較好，飼料利用率較高。與此同時，飼料中適宜含量的維生素C能顯著提高血清中AKP活性，而對LSZ活性沒有顯著影響。飼料中維生素C含量為36.76～78.42 mg/kg時，可以提高三疣梭子蟹幼蟹的抗氧化性能，降低血清中MDA含量。

4 結(jié) 論

以特定生長率為評價指標(biāo)，通過折線模型分析得出三疣梭子蟹幼蟹對維生素C的需要量為42.60 mg/kg(飼料干重)。

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*Corresponding author, professor, E-mail: zhouqicun@nbu.edu.cn

(責(zé)任編輯 菅景穎)

Dietary Vitamin C Requirement of Juvenile Swimming Crab (Portunustrituberculatus)

HOU Yingmei JI Min ZHANG Wen HUO Yawen ZHOU Qicun*

(LaboratoryofFishNutrition,SchoolofMarineSciences,NingboUniversity,Ningbo315211,China)

An 8-week feeding trial was conducted to evaluate the effects of dietary vitamin C content on growth, anti-oxidant ability and non-specific immune of juvenile swimming crab (Portunustrituberculatus), in order to determine the dietary vitamin C requirement of juvenile swimming crab. Six iso-nitrogenous and iso-energetic diets were formulated to contain 1.91, 18.89, 36.76, 78.42, 156.49 and 315.97 mg/kg vitamin C in diets, respectively. Juvenile swimming crabs with an initial body weight of (5.65±0.25) g were selected as experimental animals and all of them were cultured in rectangle plastic baskets in out-door cement. Each of experimental diet was fed 60 juvenile swimming crabs, and each 20 of them as a replicate. Results showed that the weight gain rate and specific growth rate were significantly increased when dietary vitamin C content increased from 1.91 to 36.76 mg/kg (P<0.05). However, the weight gain rate and specific growth rate were significantly decreased when dietary vitamin C content increased from 156.49 to 315.97 mg/kg (P<0.05). Moreover, The survival rate in 1.91 mg/kg group was significantly lower than that in other groups (P<0.05). The feed conservation rate in 1.91 mg/kg group was significantly higher than that in other groups (P<0.05), and crabs fed the diet contained 78.42 mg/kg vitamin C had the lowest feed conservation rate. Molting rate, and crude protein, moisture and ash contents in whole-body were not significantly influenced by dietary vitamin C content (P>0.05). With the dietary vitamin C content increasing, the crude lipid content in whole-body showed an increased trend, and that in 315.97 mg/kg group was significantly higher than that in other groups (P<0.05). Total protein and glucose contents in serum were not significantly affected by dietary vitamin C content (P>0.05). Serum total cholesterol content in 1.91 mg/kg group was significantly higher than that in other groups (P<0.05). Crabs fed the diet contained 36.76 mg/kg vitamin C had the highest serum triglyceride content, and significantly higher than that in 156.49 mg/kg group (P<0.05). Serum alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase activities had the same change trend, the highest values of them all found in 36.76 mg/kg group, and significantly higher than those in other groups (P<0.05). Meanwhile, the serum alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase activities in 1.91, 18.89 and 78.42 mg/kg groups were significantly higher than those in 156.49 and 315.97 mg/kg groups (P<0.05). Serum alanine aminotransferase/aspartate aminotransferase in 36.76 mg/kg group was the lowest, and significantly lower than that in 78.42 and 315.97 mg/kg groups (P<0.05). Lysozyme activity in serum was not significantly affected by dietary vitamin C content (P>0.05). Alkaline phosphatase activity in serum was increased with the increase of dietary vitamin C content and it in 315.97 mg/kg group was significantly higher than that in other groups (P<0.05). Superoxide dismutase activity in serum was significantly increased with dietary vitamin C content increased from 1.91 to 78.42 mg/kg, however, further increased the dietary vitamin C content, the difference was not significant (P>0.05). Serum malondialdehyde content in 1.91 mg/kg group was significantly higher than that in other groups (P<0.05). Base on broken-line model analysis of the SGR as an evaluation index, the vitamin C requirement of juvenile swimming crab is 42.60 mg/kg dry matter of diet.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2015, 27(12)：3772-3781]

vitamin C; swimming crab (Portunustribueculatus); growth; anti-oxidant ability; non-specific immune

10.3969/j.issn.1006-267x.2015.12.016

2015-05-08

國家自然科學(xué)基金項目(41476125)；寧波市海洋蟹類創(chuàng)新團隊(2011B81003)

侯迎梅(1991—)，女，安徽阜陽人，碩士研究生，從事水生動物營養(yǎng)與飼料研究。E-mail: 531103788@qq.com

*通信作者：周歧存，教授，博士生導(dǎo)師，E-mail: zhouqicun@nbu.edu.cn

S963

A

1006-267X(2015)12-3772-10