淚腺腺樣囊性癌嗜神經(jīng)侵襲生長(zhǎng)機(jī)制的免疫組化探討

陳桂軍 丁素玲

·論著·

淚腺腺樣囊性癌嗜神經(jīng)侵襲生長(zhǎng)機(jī)制的免疫組化探討

陳桂軍 丁素玲

目的 探討淚腺腺樣囊性癌嗜神經(jīng)侵襲生長(zhǎng)機(jī)制的免疫組化情況。方法 分析40例淚腺腺樣囊性癌組織石蠟標(biāo)本, 分為篩-管型20例, 實(shí)體型20例, 另外依據(jù)其嗜神經(jīng)情況分為嗜神經(jīng)組18例和無嗜神經(jīng)組22例。結(jié)果 實(shí)體型淚腺腺樣囊性癌神經(jīng)受侵襲比例高于篩-管型；實(shí)體型淚腺腺樣囊性癌S100、膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白（GFAP）表達(dá)陽性率均高于篩-管型；嗜神經(jīng)組淚腺腺樣囊性癌S100、GFAP表達(dá)陽性率均高于無嗜神經(jīng)組； 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 S100、GFAP在淚腺腺樣囊性癌神經(jīng)受侵襲中均有較高的表達(dá), 可以作為嗜神經(jīng)侵襲的預(yù)警指標(biāo), 值得臨床推廣應(yīng)用。

淚腺腺樣囊性癌；嗜神經(jīng)侵襲；生長(zhǎng)機(jī)制；免疫組化

淚腺腺樣囊性癌屬于上皮細(xì)胞來源的惡性腫瘤, 其常見于不同部位的分泌腺體, 約占頭頸部惡性腫瘤的1%, 占淚腺上皮腫瘤的11%和所有眼眶腫瘤的1.6%［1,2］。本研究通過對(duì)淚腺腺樣囊性癌臨床資料進(jìn)行分析, 擬探討淚腺腺樣囊性癌嗜神經(jīng)侵襲生長(zhǎng)機(jī)制的免疫組化情況, 現(xiàn)將結(jié)果匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取錦州市中心醫(yī)院2004～2014年收集的40例淚腺腺樣囊性癌組織石蠟標(biāo)本作為研究對(duì)象, 通過HE片觀察進(jìn)行組織學(xué)分型, 分為篩-管型20例, 實(shí)體型20例, 另外依據(jù)其嗜神經(jīng)情況分為嗜神經(jīng)組18例和無嗜神經(jīng)組22例, 陽性對(duì)照病例采用神經(jīng)鞘膜瘤切片染色, 正常對(duì)照采用正常淚腺組織切片染色, 陰性對(duì)照則是以PBS代替一抗。

1.2 方法

1.2.1 HE染色 組織芯片蠟塊切片放置在二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各10 min進(jìn)行脫蠟；通過100%、95%、80%、70%乙醇直到蒸餾水進(jìn)行沖洗, 蘇木素染色液染色2 min, 通過自來水進(jìn)行沖洗, 通過1%鹽酸酒精進(jìn)行分化3～5 s, 通過自來水進(jìn)行沖洗, 通過1%氨水進(jìn)行藍(lán)化3～5 s, 然后再通過自來水沖洗, 0.5%伊紅染色2 min, 再通過自來水沖洗, 分別通過80%、95%、100%乙醇進(jìn)行脫水, 通過二甲苯、中性樹膠進(jìn)行封片。在顯微鏡下觀察細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色, 細(xì)胞漿呈現(xiàn)紅色。

1.2.2 免疫組化EnVision 兩步法 首先石蠟切片脫蠟至水, 通過蒸餾水沖洗, 在PBS浸泡5 min, 如果需要抗原修復(fù),進(jìn)行抗原修復(fù), 切片脫蠟至水, 然后通過蒸餾水沖洗, 切片放進(jìn)抗原修復(fù)液中, 在微波爐內(nèi)進(jìn)行加熱, 保持液體溫度在98℃, 維持10～15 min, 取出, 室溫進(jìn)行冷卻半小時(shí)。3%雙氧水孵育10 min, 從而將內(nèi)源性過氧化物酶活性消除, 通過PBS緩沖液沖洗3次, 滴加一抗工作液, 37℃孵育1～2 h, 通過PBS緩沖液沖洗3次, 滴加試劑1, 然后再37℃孵育30 min,通過PBS緩沖液沖洗3次, 再滴加試劑2, 然后再37℃孵育30 min, 通過PBS緩沖液沖洗3次, 加入DAB顯色劑進(jìn)行顯色。自來水沖洗進(jìn)行復(fù)染, 脫水后進(jìn)行封片。

1.2.3 嗜神經(jīng)性判定標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)HE染色后顯微鏡下觀察是否有瘤細(xì)胞包繞神經(jīng)或者侵入神經(jīng)：①腫瘤細(xì)胞沒有侵入神經(jīng)束膜, 沿著神經(jīng)周圍進(jìn)行浸潤(rùn)性的生長(zhǎng), 呈現(xiàn)同心圓狀或者半側(cè)對(duì)神經(jīng)纖維進(jìn)行包圍。②腫瘤細(xì)胞侵入神經(jīng)束膜, 在神經(jīng)纖維之間出現(xiàn)浸潤(rùn)性生長(zhǎng), 神經(jīng)纖維結(jié)構(gòu)受到破壞。根據(jù)是否出現(xiàn)1條或者2條對(duì)腫瘤嗜神經(jīng)性進(jìn)行判定, 如果沒有滿足上述兩項(xiàng)條件中的一項(xiàng), 則判定為有嗜神經(jīng)性。

1.2.4 在高倍鏡下觀察5個(gè)不同腫瘤細(xì)胞視野, 按照標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判定 陽性細(xì)胞數(shù)：按照沒有著色（0分）、陽性細(xì)胞數(shù)<1/3（1分）、陽性細(xì)胞數(shù)1/3～2/3（2分）和陽性細(xì)胞數(shù)>2/3（3分）。染色強(qiáng)度評(píng)分：按照沒有著色（0分）、黃色（1分）、棕黃色（2分）和棕褐色（3分）進(jìn)行評(píng)價(jià)。根據(jù)兩項(xiàng)結(jié)果評(píng)分之和對(duì)結(jié)果判定, 0分表示陰性, 1～4分表示陽性, >4分表示強(qiáng)陽性。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察淚腺腺樣囊性癌病理分型和神經(jīng)受侵襲的情況；淚腺腺樣囊性癌病理分型中S100、GFAP表達(dá)情況；淚腺腺樣囊性癌有無嗜神經(jīng)侵襲中S100、GFAP表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 淚腺腺樣囊性癌病理分型和神經(jīng)受侵襲的情況 實(shí)體型淚腺腺樣囊性癌神經(jīng)受侵襲比例高于篩-管型, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）。見表1。

2.2 淚腺腺樣囊性癌病理分型中S100、GFAP表達(dá)情況 實(shí)體型淚腺腺樣囊性癌S100、GFAP表達(dá)陽性率均高于篩-管型, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）。見表2。

2.3 淚腺腺樣囊性癌有無嗜神經(jīng)侵襲中S100、GFAP表達(dá)情況 嗜神經(jīng)組淚腺腺樣囊性癌S100、GFAP表達(dá)陽性率均高于無嗜神經(jīng)組, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P<0.05）。見表3。

表1 淚腺腺樣囊性癌病理分型和神經(jīng)受侵襲的情況（n）

表2 淚腺腺樣囊性癌病理分型中S100、GFAP表達(dá)情況（n）

表3 淚腺腺樣囊性癌有無嗜神經(jīng)侵襲中S100、GFAP表達(dá)情況（n）

3 討論

免疫組化是組織病理學(xué)診斷常用的方法, 其利用的是抗原和抗體之間特異性結(jié)合和特殊的標(biāo)記, 對(duì)腫瘤組織和細(xì)胞內(nèi)的特定抗原和抗體進(jìn)行定位、定性, 從而通過化學(xué)反應(yīng),促使標(biāo)記物呈現(xiàn)一定的顏色, 在顯微鏡下觀察顏色變化, 從而對(duì)抗原物進(jìn)行檢測(cè)［3,4］。淚腺腺樣囊性癌具有惡性程度較高、易發(fā)生轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)、容易沿著神經(jīng)侵襲等生物學(xué)特點(diǎn)［5］。淚腺腺樣囊性癌通過顯微鏡下觀察, 其由導(dǎo)管上皮細(xì)胞和肌上皮細(xì)胞構(gòu)成, 細(xì)胞小而且呈現(xiàn)圓形, 細(xì)胞核深染且胞漿較少, 群集形成巢或者條索狀［6,7］。其通過Perzin分類法, 可以分為三種類型：篩孔型又被稱為蹄狀型, 癌巢內(nèi)有大小不等的蹄孔狀囊樣腔隙, 其多由肌上皮細(xì)胞圍繞, 內(nèi)部充滿嗜堿性黏蛋白；管狀型：癌細(xì)胞呈現(xiàn)細(xì)長(zhǎng)管狀結(jié)構(gòu)排列, 其由兩層、三層上皮細(xì)胞圍繞形成, 內(nèi)層為導(dǎo)管上皮構(gòu)成, 外層為肌上皮細(xì)胞, 其腔內(nèi)有嗜伊紅分泌物；實(shí)體型：癌細(xì)胞排列呈現(xiàn)緊密的團(tuán)塊樣, 形成圓形或者不規(guī)則的實(shí)性癌巢, 其中間有纖維間隔, 內(nèi)部有少量的腔隙, 團(tuán)塊內(nèi)出現(xiàn)壞死。淚腺腺樣囊性癌很容易沿著神經(jīng)生長(zhǎng)并且侵襲神經(jīng), 其在早期容易侵犯神經(jīng), 沿著神經(jīng)束衣進(jìn)行蔓延, 進(jìn)而誘發(fā)局部疼痛。S100蛋白是一種高度酸性鈣結(jié)合蛋白, 含有豐富的苯丙氨酸, 在中性飽和硫酸銨溶液中可以100%溶解, 同時(shí)也是一種神經(jīng)系統(tǒng)特異性蛋白, 其主要存在于膠質(zhì)細(xì)胞和雪旺細(xì)胞中, 被認(rèn)為是雪旺細(xì)胞分化的標(biāo)志物。有研究表明, S100在嗜神經(jīng)性侵襲性涎腺腺樣囊性癌中呈現(xiàn)高表達(dá), 提示腺樣囊性癌細(xì)胞可能有雪旺細(xì)胞分化, 進(jìn)而發(fā)生侵襲神經(jīng)。神經(jīng)細(xì)絲酸性蛋白含有豐富的天門冬氨酸、谷氨酸, 其在星形神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和腫瘤內(nèi)呈現(xiàn)特異性的定位, 其他膠質(zhì)成分、神經(jīng)元等均不會(huì)著色。有研究表明, 神經(jīng)細(xì)絲酸性蛋白在嗜神經(jīng)性腺樣囊性癌中有一定程度的表達(dá), 但是在無嗜神經(jīng)性的黏液表皮樣癌中無表達(dá), 提示腺樣囊性癌細(xì)胞可能出現(xiàn)了雪旺細(xì)胞分化, 從而侵襲神經(jīng), 進(jìn)而造成腺樣囊性癌嗜神經(jīng)侵襲。本研究通過分析錦州市中心醫(yī)院2004～2014年之間收集的40例淚腺腺樣囊性癌組織石蠟標(biāo)本, 分為篩-管型20例, 實(shí)體型20例, 另外依據(jù)其嗜神經(jīng)情況分為嗜神經(jīng)組18例和無嗜神經(jīng)組22例。結(jié)果表明, 實(shí)體型淚腺腺樣囊性癌神經(jīng)受侵襲比例高于篩-管型,實(shí)體型淚腺腺樣囊性癌S100、GFAP表達(dá)陽性率均高于篩-管型,嗜神經(jīng)組淚腺腺樣囊性癌S100、GFAP表達(dá)陽性率均高于無嗜神經(jīng)組,提示S100、GFAP在淚腺腺樣囊性癌神經(jīng)受侵襲中均有較高的表達(dá), 可以作為嗜神經(jīng)侵襲的預(yù)警指標(biāo), 值得臨床推廣應(yīng)用。

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Immunohistochemical investigation of lacrimal adenoid cystic carcinoma perineural invasion in growth mechanism

CHEN Gui-jun, DING Su-ling.
Jinzhou City Health School, Jinzhou 121000, China

Objective To investigate the immunohistochemical situation of lacrimal adenoid cystic carcinoma perineural invasion in growth mechanism.Methods A total of 40 paraffin specimens of lacrimal adenoid cystic carcinoma tissues were analyzed and divided into 20 cases of sieve-tube type and 20 cases of entity type.They were also divided by perineural condition into perineural group with 18 cases and non-perineural group with 22 cases.Results The proportion of invasion was higher in entity type of lacrimal adenoid cystic carcinoma than in sieve-tube type.The entity type of lacrimal adenoid cystic carcinoma also had higher positive rates of S100 and glial fibrillary acidic protein （GFAP） expressions than the sieve-tube type.The perineural group had higher positive rates of S100 and GFAP expressions then the non-perineural group.The differences had statistical significance （P<0.05）.Conclusion High expressions of S100 and GFAP in lacrimal adenoid cystic carcinoma perineural invasion can be treated as early-warning indexes for perineural invasion, and this method is worth promotion and application.

Lacrimal adenoid cystic carcinoma; Perineural invasion; Growth mechanism; Immunohistochemistry

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.10.001

2015-02-12］

121000 錦州市衛(wèi)生學(xué)校（陳桂軍）；錦州市中心醫(yī)院（丁素玲）