欖香烯對晚期肝癌患者血清瘦素、甲胎蛋白及肝功能的影響研究

蘭天罡，陳嬋

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 肝膽外科，貴州 遵義 563003;2.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 干部保健科，貴州 遵義 563003)

肝癌是指由肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞發(fā)生的惡性腫瘤。其發(fā)生率在全世界常見腫瘤中居第5位，由于其預(yù)后差，死亡率居第3位。其中81%發(fā)生在發(fā)展中國家，54%發(fā)生于中國[1]。好發(fā)于40～50歲之間，男性多于女性，因發(fā)展迅速，患者就診時腫瘤已屬中晚期，手術(shù)切除率低，生存時間短[2]。目前臨床對于肝癌的治療主要以手術(shù)切除治療為主，但由于大多數(shù)肝癌患者在發(fā)現(xiàn)時已處于晚期，且受肝癌轉(zhuǎn)移、腫瘤體積、數(shù)目等限制已經(jīng)不適合手術(shù)，臨床適合手術(shù)切除條件的肝癌患者不足25%[4]，且術(shù)后復(fù)發(fā)率、死亡率較高。欖香烯是從傳統(tǒng)中草藥姜科植物溫郁金提取獲得的萜烯類化合物，其有效成分主要為β-欖香烯，已作為國家二類抗腫瘤新藥上市[5]。欖香烯憑借其廣譜、高效、低毒且能通過血腦屏障的優(yōu)點而被廣泛應(yīng)用于臨床，已有將其應(yīng)用于治療乳腺癌、肺癌等疾病，但是將欖香烯治療晚期肝癌的報道卻較為少見。本研究通過觀察欖香烯對晚期肝癌患者血清瘦素(leptin，LP)、甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)以及肝功能的影響進(jìn)行分析研究，以探討欖香烯對晚期肝癌患者的療效機(jī)制，為肝癌患者的治療提供新的思路和方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例來源選擇2014年5月～2015年5月于遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院診斷為肝癌而收入院的患者73例，男性42例，女性31例，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為實驗組和對照組。其中實驗組36例，男性22例，女性14例，平均年齡(59.2±8.5)歲;對照組37例，男性20例，女性17例，平均年齡(61.4±8.7)歲。2組性別、年齡一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

1.2 診斷及排除標(biāo)準(zhǔn) 參照2010年美國肝病研究學(xué)會肝癌診治指南中關(guān)于原發(fā)性肝癌的病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)以及臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]:①肝區(qū)疼痛，多為持續(xù)性鈍痛、脹痛或刺痛;②全身乏力、消瘦、食欲減退、腹脹、惡心、嘔吐、腹瀉等消化系統(tǒng)癥狀;③肝腫大呈進(jìn)行性進(jìn)展，質(zhì)地堅硬，邊緣不規(guī)則，表面有大小不等的結(jié)節(jié)或包塊;④血清甲胎蛋白(AFP)≥400 μg/L，排除妊娠、活動性肝病、生殖腺胚胎源性腫瘤等;⑤B超或CT檢查可示腫瘤的大小、形態(tài)、部位;⑥肝臟病理檢查結(jié)果為原發(fā)性肝癌;⑦TNM分期符合晚期肝癌變化，患者及其家屬放棄手術(shù)治療者。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) ①不愿參與本研究或不符合診斷標(biāo)準(zhǔn)者;②患有艾滋病等具有較重傳染性疾病患者;③其他腫瘤轉(zhuǎn)移到肝臟者;④2周內(nèi)使用其他相關(guān)藥物治療者;⑤妊娠或哺乳期婦女;⑥合并有嚴(yán)重心、腎功能不全疾病患者;⑦對欖香烯制劑過敏者;⑧患有精神類疾病不能配合研究者。

1.4 治療方法 嚴(yán)格按照2014年《中國肝癌診治指南》[7]中關(guān)于原發(fā)性肝癌的治療標(biāo)準(zhǔn)予以治療:對照組給予多靶點抑制劑索拉非尼(拜耳先靈醫(yī)藥，國藥準(zhǔn)字:H20060296)，400 mg/d 2次口服;胸腺肽α注射液(云南南詔藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H53021765)1.6 mg，每周2次皮下注射。在治療過程中，如并發(fā)其他的臨床癥狀，均予相應(yīng)的對癥處理。以4周為1個療程進(jìn)行治療。實驗組在與對照組對癥治療基礎(chǔ)上加用欖香烯注射液(石藥集團(tuán)遠(yuǎn)大(大連)制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字 H20110114)，0.6 g/d，一次靜脈注射。在治療過程中，如并發(fā)其他臨床癥狀，均予相應(yīng)的對癥處理。以4周為1個療程進(jìn)行治療。

2組患者均在治療前、后空腹采集10 mL肘靜脈血，將其中部位血液裝入采血管中，將采血管按3000 r/min離心10 min，待離心結(jié)束后將上層血清裝入EP管中，放入－80℃冰箱中保存?zhèn)溆?剩余血液裝入采血管的備用。

1.5 觀察指標(biāo)及檢測方法

1.5.1 血清中LP、CRP含量:取所有患者預(yù)留血清2 mL，一部分采用放射免疫分析法進(jìn)行測定，利用液相競爭抑制原理，通過平衡和非平衡等方法以測定血清LP含量水平。所用試劑均由鄭州安塞生物科技有限公司提供;余下血清行雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢側(cè)血清C-反應(yīng)蛋白(CRP)含量水平，試劑盒均由江蘇晶美生物科技有限公司提供，操作方法按照說明書嚴(yán)格操作。

1.5.2 血清中AFP等腫瘤標(biāo)志物含量:取所有患者預(yù)留血清2 mL，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢測所有研究對象血清中各腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)的濃度水平，腫瘤標(biāo)志物包括:AFP、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)、糖類抗原 199(carbohydrate antigen 199，CA199)水平。試劑盒均由江蘇晶美生物科技有限公司提供，其操作方法按照說明書嚴(yán)格操作。

1.5.3 肝功能測定:取所有患者預(yù)留靜脈血3 mL，采用全自動生化分析儀(美國Beckman Coulter AU5800)測定患者肝功能各指標(biāo)，檢測指標(biāo)主要包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)、總膽紅素(total bilirubin，TBIL)、和凝血酶原時間(prothrombin time，PT)。

1.5.4 生存質(zhì)量評價:依據(jù)KPS評分標(biāo)準(zhǔn)[8]，①改善:治療后較治療前得分提高≥10分;②下降:治療后較治療前得分下降≥10分;③穩(wěn)定:治療后較治療前提高或下降得分＜10分。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，正態(tài)計量資料方面采用“”表示，2組間比較采用t檢驗;計數(shù)資料用“率”表示，2組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清中LP、CRP含量的比較 治療前2組患者血清中LP和CRP含量相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。治療4周后，2組患者血清LP水平顯著升高，CRP含量顯著降低(P＜0.05)，與對照組比較，實驗組 LP水平較高，CRP水平較低(P＜0.05)。見表1。

表1 2組患者血清中LP、CRP含量的比較()Tab.1 Comparison of LP and CRP in serum between two groups()

表1 2組患者血清中LP、CRP含量的比較()Tab.1 Comparison of LP and CRP in serum between two groups()

*P＜0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment;#P ＜0.05，與對照組比較，compared with control group

組別 例數(shù) 時間 LP(ng/mL) CRP(mg/L)對照組 37治療前 13.77±2.01 85.14±12.34治療后 19.25±2.31* 63.13±7.28*實驗組 36治療前 13.62±2.13 84.25±11.08治療后 25.79±3.82*# 35.31±5.24*#

2.2 血清中腫瘤標(biāo)志物水平比較 治療前2組患者血清AFP、CEA及CA199的含量相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。治療4周后，2組患者血清AFP、CEA、CA199水平均較治療前降低，但實驗組水平明顯低于對照組(P＜0.05)。見表2。

表2 2組患者血清中AFP、CEA及CA199水平比較()Tab.2 Comparison of AFP，CEA and CA199 in serum between two groups()

表2 2組患者血清中AFP、CEA及CA199水平比較()Tab.2 Comparison of AFP，CEA and CA199 in serum between two groups()

*P＜0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment;#P ＜0.05，與對照組比較，compared with control group

組別 例數(shù) 時間AFP CEA CA199對照組 37治療前 125.29±17.63 36.52±5.21 84.61±11.75治療后 96.18±12.33* 28.17±4.01* 69.21±10.01*實驗組 36治療前 128.61±17.52 36.48±5.17 85.04±12.03治療后 65.23±9.54*# 18.19±2.66*#53.23±7.58*#

2.3 肝功能各指標(biāo)水平比較 治療前2組患者血清ALT、AST、TBIL、PT的含量相比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。經(jīng)4周治療后，2組患者血清ALT、AST、TBIL、PT水平均較治療前降低，但實驗組水平明顯低于對照組(P＜0.05)。見表3。

表3 2組患者肝功能指標(biāo)比較()Tab.3 Comparison of liver function index between two groups()

表3 2組患者肝功能指標(biāo)比較()Tab.3 Comparison of liver function index between two groups()

*P＜0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment;#P＜0.05，與對照組比較，compared with control group

組別 例數(shù) 時間 ALT(U/L) AST(U/L) TBIL(μmol/L) PT(s)對照組 37 治療前 504.21±72.23 442.61±63.75 39.86±5.55 16.24±2.18治療后 158.56±22.09* 137.89±21.19* 24.56±3.54* 13.47±1.94*實驗組 36 治療前 510.51±73.43 437.77±62.46 42.56±6.78 15.94±2.26治療后 49.94±7.69*# 39.64±5.56*# 16.54±2.12*# 10.15±1.44*#

2.4 2組患者生存質(zhì)量評價比較 治療后，實驗組患者生存質(zhì)量、總有效率明顯高于對照組(χ2=5.075，P＜0.05)。見表4。

表4 2組生存質(zhì)量評價比較[n(%)]Tab.4 Comparison of KPS score[n(%)]

3 討論

欖香烯的抗瘤作用機(jī)理涉及多個方面，主要包括:抑制腫瘤細(xì)胞DNA和RNA的合成;誘導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡與分化;抗腫瘤免疫保護(hù)作用;消除自由基;逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥作用等[9]。臨床雖有將欖香烯應(yīng)用于治療各類癌癥的報道，但對于從LP、AFP、CRP等血清指標(biāo)的角度進(jìn)行分析研究的報道卻較為少見。研究表明，惡性腫瘤患者都存在血清LP水平的下降現(xiàn)象，本研究結(jié)果也證明了此結(jié)論的正確性。本研究結(jié)果顯示，2組患者血清LP水平經(jīng)治療后均有所上升。LP是最早發(fā)現(xiàn)的脂肪因子，是脂肪細(xì)胞肥胖基因的產(chǎn)物，同時也是螺旋細(xì)胞因子家族的成員，其在機(jī)體中發(fā)揮的主要作用是刺激食欲并增加能量消耗。研究發(fā)現(xiàn)，多數(shù)腫瘤患者往往存在食欲下降、體重減輕的現(xiàn)象，晚期更是有惡病質(zhì)表現(xiàn)，皆與血清LP水平下降，不能刺激食欲升高有關(guān)[10]。本研究中，實驗組患者經(jīng)治療后血清LP水平明顯高于對照組(P＜0.05)，其原因可能與應(yīng)用欖香烯作用有關(guān)。欖香烯具有直接殺死腫瘤細(xì)胞、誘導(dǎo)腫瘤干細(xì)胞凋亡的藥理作用，應(yīng)用后緩解病情，表4中也可以看出實驗組患者用藥后其生存質(zhì)量明顯改善，從側(cè)面證明本結(jié)論的正確性。但是，關(guān)于欖香烯有效降低晚期肝癌患者血清LP水平的具體機(jī)制并不十分清楚。

CRP是一種急性時相蛋白，能夠敏感地反映機(jī)體的炎癥狀態(tài)及應(yīng)激程度和組織損傷程度，在肝臟中合成，而本研究中，2組患者治療前血清CRP水平升高，其原因可能與肝癌患者免疫異常刺激單核巨噬細(xì)胞分泌IL-6和TNF-α等細(xì)胞因子，進(jìn)一步引發(fā)全身性炎癥反應(yīng)，促使肝臟合成大量CRP，而欖香烯則具有提高機(jī)體免疫功能的作用，經(jīng)治療實驗組患者血清CRP水平明顯低于對照組(P＜0.05)。本研究結(jié)果顯示，實驗組患者經(jīng)治療后其血清腫瘤標(biāo)志物明顯低于對照組(P＜0.05)。腫瘤標(biāo)志物是在腫瘤發(fā)展過程中由腫瘤細(xì)胞合成、釋放或者是機(jī)體對腫瘤細(xì)胞反應(yīng)而產(chǎn)生的一類物質(zhì)。AFP是多年來本用作診斷原發(fā)性肝癌的首要指標(biāo)，在肝癌的早期診斷和鑒別診斷中具有重要意義[11];CEA是一種在消化系統(tǒng)腫瘤患者血清高度表達(dá)的糖蛋白;CA199是近年發(fā)現(xiàn)并用于診斷原發(fā)性肝癌的腫瘤標(biāo)志物，具有較高的敏感性[12]。在本研究中，表3顯示實驗組患者血清AFP、CEA、CA199水平較對照組顯著降低(P＜0.05)，其原因可能與實驗組患者在應(yīng)用欖香烯注射液后，大量腫瘤細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞被殺死有關(guān)，因此腫瘤標(biāo)志物的合成、釋放減少，血清水平隨之降低。本研究結(jié)果顯示，實驗組患者應(yīng)用欖香烯注射液治療后，其肝功能各指標(biāo)均明顯改善。晚期肝癌患者因肝臟正常細(xì)胞被破壞而導(dǎo)致肝功能各指標(biāo)異常。而經(jīng)欖香烯治療后，其肝功能得以好轉(zhuǎn)，其原因可能與破壞腫瘤細(xì)胞和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用有關(guān)，欖香烯是否具有保肝作用臨床并無相關(guān)文獻(xiàn)報道，其具體機(jī)制仍需進(jìn)一步深入研究。

本實驗通過觀察73例晚期肝癌患者治療前后血清LP、CRP、腫瘤標(biāo)志物、肝功能以及生存質(zhì)量的情況，證實了欖香烯的藥理作用，在下一步研究中將尋找新的信號分子和目的基因，為本實驗所反映的現(xiàn)象做出進(jìn)一步論證和分析。

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