甲氨蝶呤片對正常大鼠血液生化指標的影響*

熱比姑麗·伊斯拉木，尤力都孜·買買提，買合素提·卡德爾，伊力亞爾·斯瑪依，斯拉甫·艾白

（1.新疆醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院藥理教研室，新疆 烏魯木齊 830054； 2.新疆維吾爾醫(yī)方劑學實驗室，新疆烏魯木齊 830049； 3.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，新疆 烏魯木齊 830049）

銀屑病又名牛皮癬，是一種常見且易復發(fā)的慢性炎癥性皮膚病。甲氨蝶呤［1-2］為葉酸鹽類似物，自20世紀50年代始被用于治療惡性腫瘤，同時也成為治療免疫性疾病的廣譜藥物，包括類風濕關節(jié)炎和銀屑病。本研究中探討了甲氨蝶呤片對正常大鼠一般狀況、體重、臟器系數(shù)及血液生化指標的影響，便于該藥在試驗研究中合理使用。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動物

儀器設備：7100型全自動生化分析儀（日立公司）；TGL-5-A型低速大容量離心機（上海安亭科學儀器廠）；BS110S型電子精密天平（北京賽多利斯天平有限公司）。

藥品與試劑：甲氨蝶呤片（上海信宜藥廠有限公司，國藥準字H31020644，批號為 20130403）；羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，天津市光復精細化工研究所，批號為 20100409）；戊巴比妥鈉（Pentpbarbital Sodium Salt，Sigma 公司，批號為 20130115）。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT，批號為140113030），天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST，批 號 為 140213028），堿 性 磷 酸 酶 （ALP，批 號 為140313015），磷酸肌酸激酶（CK，批號為 142513011），總膽紅素（TBIL，批號為 140613025），總蛋白（TP，批號為 140813019），白蛋白（ALB，批號為 140913022），葡萄糖（GLU，批號為 141513033），尿素氮（BUN，批號為 141313032），肌酐（Cr，批號為 141013021），總 膽 固 醇 （TC，批 號 為 141613026），三 酰 甘 油 （TG，批 號 為141713021），以上試劑均由深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司生產(chǎn)。

試驗動物：健康 SD 大鼠，50只，雌（♀）、雄（♂）各半，SPF級，體重180～220 g，由新疆醫(yī)科大學實驗動物中心提供，質(zhì)量合格證號XJMUSYDW2013000047，試驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK（新）2011-0004。試驗動物使用許可證號 SYXK（新）2011-0006，新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所藥物安全性評價中心SPF級動物房提供。

1.2 試驗方法

將50只大鼠適應性飼養(yǎng)5 d，檢疫合格后，取40只大鼠，雌、雄各半，按體重隨機分為兩組，即溶劑對照組（A組）、甲氨蝶呤組（B組，給藥劑量為1.05 mg／kg，根據(jù)成人臨床擬用藥量、筆者前期已做的小鼠藥效學試驗用藥劑量，折算并確定大鼠劑量），各20只，雌、雄各半。A組給予 0.5%CMC-Na灌胃，B組給予甲氨蝶呤灌胃，均以每100 g體重1 mL體積給藥，每天1次，連續(xù)65 d。連續(xù)觀察大鼠的一般狀況，每周稱1次體重。第66天，用0.5%戊巴比妥鈉麻醉，腹主動脈采血，處死大鼠。用BS110S型電子精密天平稱大鼠腦、肝、心臟、肺臟、胸腺、脾臟、腎臟、腎上腺、睪丸、附睪、子宮、卵巢的質(zhì)量，計算臟器系數(shù)。用TGL-5-A型低速大容量離心機離心血清，用7100型全自動生化分析儀，檢測大鼠血液生化指標。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結果

2.1 體重

與A組比較，第5周開始，B組個別大鼠出現(xiàn)輕微腹瀉。兩組大鼠體重變化比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 兩組大鼠體重變化比較（ ± s，g，n ＝10）

表1 兩組大鼠體重變化比較（ ± s，g，n ＝10）

時間第1周第2周第3周第4周第5周第6周第7周第8周第9周第10周雄性 雌性A組B組A組B組255.48 ± 8.78 292.40 ± 10.75 321.93 ± 15.82 386.75 ± 6.26 413.18 ± 10.05 438.82 ± 14.91 456.35 ± 17.57 476.47 ± 15.23 490.62 ± 20.35 513.92 ± 23.32 254.53 ± 17.95 278.67 ± 52.33 335.02 ± 52.31 377.07 ± 42.66 406.85 ± 42.02 438.53 ± 47.77 457.62 ± 53.17 462.68 ± 55.33 450.18 ± 50.57 440.85 ± 59.91 251.17 ± 5.15 258.63 ± 13.39 285.42 ± 41.15 280.03 ± 19.94 288.38 ± 21.03 296.05 ± 19.24 297.75 ± 26.48 303.30 ± 25.63 310.32 ± 20.86 313.05 ± 19.79 250.05 ± 12.35 258.60 ± 14.65 259.12 ± 36.05 287.33 ± 3.89 294.95 ± 13.56 300.02 ± 8.15 311.72 ± 10.82 314.12 ± 12.83 310.97 ± 17.41 306.67 ± 15.53

2.2 臟器系數(shù)

與A組比較，B組雄性大鼠心臟、肺臟、胸腺、腎臟系數(shù)升高（P＜0.05），雌性大鼠肝臟、脾臟、腎臟系數(shù)升高而胸腺、腦系數(shù)降低（P＜0.05）。藥物對其余臟器系數(shù)的影響不顯著（P＞0.05）。詳見表2。

2.3 血液生化指標

與A組比較，B組雄性大鼠血清TBIL升高、ALP降低（P＜0.05），雌性大鼠血清 TG 升高，AST，ALP，CK 降低（P＜0.01）。藥物對其余指標影響不顯著（P＞0.05）。詳見表 3。

表2 兩組大鼠臟器系數(shù)變化比較（ ± s，n＝10）

表2 兩組大鼠臟器系數(shù)變化比較（ ± s，n＝10）

注：與 A 組比較，*P ＜0.01，△P ＜0.05。表 3同。

臟器 雄性 雌性A組B組A組B組腦肝臟心臟肺臟胸腺脾臟腎臟腎上腺睪丸子宮附睪卵巢0.405 6 ±0.055 0 2.914 7 ±0.158 5 0.331 2 ±0.438 0 0.438 0 ±0.054 5 0.069 7 ±0.015 8 0.190 0 ±0.017 9 0.684 1 ±0.052 1 0.015 8 ±0.001 1 0.787 5 ±0.031 4 0.474 5 ± 0.080 9 3.420 5 ± 0.167 5 0.426 2 ± 0.094 8*0.586 7 ± 0.138 3*0.092 7 ± 0.008 8*0.756 3 ± 0.501 9*0.795 4 ± 0.173 8*0.019 8 ± 0.012 6 0.818 1 ± 0.114 6 0.716 1 ±0.015 3 2.927 3 ±0.215 3 0.380 9 ±0.035 7 0.525 4 ±0.069 7 0.161 0 ±0.028 8 0.280 9 ±0.032 3 0.687 6 ±0.053 5 0.032 0 ±0.008 1 0.627 3 ± 0.052 1*3.554 5 ± 0.600 7*0.400 4 ± 0.052 1 0.673 1 ± 0.160 6 0.068 5 ± 0.022 6△0.768 9 ± 0.367 5△0.729 0 ± 0.117 0 0.032 1 ± 0.007 6 0.259 5 ±0.055 60.229 1 ± 0.084 1 0.313 5 ±0.067 70.322 0 ± 0.066 5 0.061 1 ±0.016 50.053 2 ± 0.009 2

表3 兩組大鼠血液生化指標變化比較（ ± s，n＝10）

表3 兩組大鼠血液生化指標變化比較（ ± s，n＝10）

雄性 雌性指標A組B組A組B組55.2 ± 10.19△21.0 ± 3.68 22.0 ± 7.82△107.3 ± 43.37△0.30 ± 0.13 5.43 ± 0.45 16.42 ± 7.65 4.78 ± 1.16 1.13 ± 0.24 0.58 ± 0.34△25.60 ± 6.83 13.91 ± 4.17 AST（U ／L）ALT（U ／L）ALP（U ／L）CK（U ／L）TBIL（μmol／L）GLU（mmol／L）Cr（μmol／L）BUN（mmol／L）TC（mmol／L）TG（mmol／L）TP（g／L）ALB（g／L）89.5 ±30.41 33.0 ±13.70 71.5 ±17.16 282.4 ±147.51 0.16 ±0.07 4.26 ±1.02 8.21 ±5.96 4.28 ±0.59 1.05 ±0.17 0.59 ±0.20 27.67 ±6.25 15.32 ±3.29 104.2 ± 44.24 35.2 ±11.17 26.4 ±9.53△244.4 ± 147.00 0.30 ±0.22*4.00 ±0.90 11.04 ± 6.49 5.71 ±1.38 1.01 ±0.19 0.60 ±0.27 26.33 ± 8.29 14.39 ± 4.94 99.8 ±37.26 18.4 ±2.63 48.6 ±24.61 523.1 ± 212.20 0.30 ±0.15 4.70 ±0.46 7.99 ±4.24 5.33 ±0.60 1.27 ±0.23 0.43 ±0.08 31.42 ± 6.89 17.79 ± 3.31

3 討論

甲氨蝶呤為葉酸還原酶抑制劑［1］，可阻止表皮細胞增殖時DNA合成，抑制細胞核的有絲分裂。甲氨蝶呤可抑制體內(nèi)被激活的淋巴細胞增殖和減弱CD8細胞的功能并抑制中性粒細胞的趨化性。甲氨蝶呤是全身治療銀屑病的標準用藥，但其治療量和中毒量很接近，長期用藥會引起肝臟廣泛性纖維化和肝硬化，故在應用時需注意安全，嚴格選擇適應證，有肝腎功能異常、妊娠或哺乳、嚴重貧血、白細胞減少、活動性消化道潰瘍、活動性感染性疾病、酗酒、免疫缺陷及其他嚴重疾病時不宜使用，治療前和治療期間均應定期檢查肝腎功能及血、尿常規(guī)。

甲氨蝶呤片是目前我國銀屑病試驗研究中仍選用的陽性對照藥物［3-4］。筆者曾通過建立銀屑病模型，探討了維吾爾醫(yī)經(jīng)典方劑的抗小鼠銀屑病作用，發(fā)現(xiàn)甲氨蝶呤片療效較好，且對小鼠無明顯不良反應［5］。本試驗結果表明，甲氨蝶呤能引起個別大鼠腹瀉，且明顯無性別差異；對大鼠腎臟、肝臟、心臟、肺臟、胸腺、脾臟、腦系數(shù)有一定影響；同時，能使雄性大鼠血清TBIL升高、ALP降低，雌性大鼠血清TG升高而AST，ALP，CK降低。故初步認為，對于甲氨蝶呤片，大鼠比小鼠敏感，能刺激大鼠胃腸道引起腹瀉，提示此反應具有動物種屬差異；對大鼠肝功能有一定影響，引起上述血液生化指標發(fā)生變化，這些不良反應均與甲氨蝶呤片臨床報道相似［6-12］。對大鼠腎臟、心臟、肺臟、胸腺、脾臟、腦系數(shù)的影響，需通過該臟器的組織病理學檢查作進一步判斷。

綜上所述，選擇甲氨蝶呤片用于試驗研究，必須慎重選擇動物種屬、用藥劑量、用藥時間等，否則可能會蓄積藥物毒性，引起動物死亡，導致試驗失敗。

參考文獻：

［1］趙 辨.中國臨床皮膚病學（下冊）［M］.南京：江蘇科學技術出版社，2013：1 008-1 025.

［2］杜軍華.藥理學原理——藥物治療學的病理生理基礎［M］.第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2009：690.

［3］郭 順，時 樂，閆小兵，等.麻桂湯對咪喹莫特誘導小鼠銀屑病樣皮損的干預研究［J］.中藥材，2014，37（6）：1 066-1 069.

［4］趙京霞，底婷婷，王 燕，等.5種常用藥物對咪喹莫特誘導小鼠銀屑病樣皮損模型形成的影響［J］.中國皮膚性病學雜志，2014，28（3）：234-238.

［5］熱比姑麗·伊斯拉木，尤力都孜·買買提，伊力亞爾·斯瑪依，等.異常粘液質(zhì)成熟劑（Munziq Balgam）對銀屑病小鼠模型的作用［J］.中國比較醫(yī)學，2014，24（8）：27-31.

［6］龍 亭.甲氨蝶呤治療銀屑病臨床觀察［J］.中國實用醫(yī)藥，2014，9（4）：161-162.

［7］顧 敏，李 爽，郝良純，等.大劑量甲氨蝶呤治療兒童急性淋巴細胞白血病的血藥濃度及影響因素分析［J］.中國醫(yī)科大學學報，2013，42（6）：566-569.

［8］靳培英，徐文嚴.甲氨蝶呤治療銀屑病的再評價［J］.國外醫(yī)學：皮膚性病學分冊，1999，25（1）：3-6.

［9］孟桂平，劉衛(wèi)靜.大劑量甲氨蝶呤不良反應分析及防治［J］.中國藥業(yè)，2014，23（6）：45-46.

［10］張 毅，郭 澄.對短期小劑量甲氨蝶呤致不良反應病例的治療與思考［J］.中國藥業(yè)，2011，20（19）：80-81.

［11］李子雄，林 梅.大劑量甲氨蝶呤治療小兒急性淋巴細胞白血病的不良反應觀察［J］.山西醫(yī)藥雜志，2014，43（10）：1 193-1 194.

［12］王 捷，王建華，趙 軍.SLC19A1遺傳多態(tài)性與大劑量甲氨蝶呤化療不良反應相關性的研究［J］.中國臨床藥理學雜志，2013，29（6）：406-409.