高效液相色譜法測(cè)定止咳定喘丸中苦杏仁苷含量

楊慈海，劉冬梅，鐘戈銳

（1.湖北省荊門市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，湖北 荊門 448124； 2.湖北百科亨迪藥業(yè)有限公司，湖北 荊門 448000）

Yang Cihai1,Liu Dongmei1 Zhong Gerui2（1.Jingmen Municipal Institute for Food and Drug Control,Jingmen，Hubei，China 448124；2.Hubei Biocause Heilen Pharmaceutical Co.,Ltd.,Jingmen,Hubei,China 448000）

止咳定喘丸由苦杏仁（炒）、麻黃、石膏、紫蘇子（炒）、厚樸（姜制）、陳皮、甘草、罌粟殼（蜜炙）、茶葉等組方，具清熱宣肺、止咳平喘的功效，臨床用于咳嗽氣喘、久咳不止等癥。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［1］中既無(wú)鑒別也無(wú)含量測(cè)定。為提高質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，筆者參閱《中國(guó)藥典》及文獻(xiàn)［2-5］，采用高效液相色譜法測(cè)定苦杏仁苷的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Dionex UltiMate 3000 pump液相色譜儀；BP211D型電子天平（德國(guó) Sartorius公司）；AS51050A型超聲波清洗儀；GZX-9140MBE型數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱；DZKW電子恒溫水浴鍋?？嘈尤受諏?duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110820-201305，供含量測(cè)定用，含量為 85.8%）；止咳定喘丸（批號(hào)為 121218，130103，130104，東芝堂藥業(yè)＜安徽＞有限公司）；水為純化水，甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agela VenusilMPC18柱（250mm ×4.6mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇 -水（20 ∶80）；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm；流速：1.0mL /min；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：10μL。理論板數(shù)按苦杏仁苷峰計(jì)算應(yīng)不低于7 000。

2.2 溶液制備

取苦杏仁苷對(duì)照品13.25mg，精密稱定，置100mL棕色容量瓶中，加甲醇約60mL，超聲15min，冷卻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL含0.132 5mg的對(duì)照品貯備溶液。精密吸取對(duì)照品貯備溶液10mL，置50 mL棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1mL含0.026 5mg的對(duì)照品溶液。取裝量差異下樣品（批號(hào)為121218），研細(xì)，取0.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，加二氯甲烷適量，加熱回流2 h，藥渣揮干，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇30mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液10 mL，精密加入流動(dòng)相10mL，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方制備工藝制得不含苦杏仁的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別精密吸取2.2項(xiàng)下3種溶液按擬訂色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1?？梢?jiàn)，在對(duì)照品溶液色譜主峰處，供試品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照品溶液則無(wú)此峰，表明樣品中其他成分對(duì)苦杏仁苷的測(cè)定無(wú)干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：分別吸取對(duì)照品溶液（0.026 5 g /L）2，4，8，16，32 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值。以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程Y＝1.76×105X+8.47×104，r＝0.999 9（n＝5）。結(jié)果表明，苦杏仁苷進(jìn)樣量在0.053 0～0.848 0μg范圍內(nèi)與峰面積積分值具有良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果的 RSD為0.92%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，避光放置，分別在0，2，4，6，8，10，16，20，24 h 時(shí)測(cè)定。結(jié)果苦杏仁苷峰面積的 RSD 為0.75%（n＝9），表明供試品溶液在避光條件下24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品（批號(hào)121218）6份，依法測(cè)定。結(jié)果苦杏仁苷平均含量為3.75mg/g，RSD為0.83%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品（3.75 mg/g，批號(hào)121218）約0.25 g，精密稱取6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入 2.2 項(xiàng)下苦杏仁苷對(duì)照品貯備溶液 5.0，5.0，7.0，7.0，9.0，9.0mL，按供試品溶液制備方法制備溶液并測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 苦杏仁苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取3批樣品，按2.2項(xiàng)下方法處理，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為121218，130103，130104樣品中苦杏仁苷的含量分別為3.75，3.82，3.72mg /g。

3 討論

苦杏仁具有降氣、止咳、平喘的功效［2］，為方中主藥之一。苦杏仁苷含量高且性質(zhì)穩(wěn)定，常常作為質(zhì)量控制指標(biāo)，故選擇制劑中苦杏仁苷作為含量測(cè)定指標(biāo)。

本試驗(yàn)中以甲醇為溶劑，分別采用超聲、加熱回流和索氏提取3種方法進(jìn)行比較，結(jié)果超聲30min處理提取效果最差，含量約為加熱回流和索氏提取的70%；加熱回流和索氏提取含量相近，因苦杏仁含脂肪油（杏仁油）較多，約50%［6］，加熱回流提取雜質(zhì)峰較多；而索氏提取法先加二氯甲烷適量，加熱回流除去油脂成分后，再用甲醇加熱回流提取，可減少雜質(zhì)峰干擾，達(dá)到較好的分離效果。故選擇索氏提取除雜質(zhì)后，再水浴加熱回流方法提取。

文獻(xiàn)［2-5］報(bào)道有3種流動(dòng)相，分別是乙腈-0.1%磷酸溶液（8 ∶92）、甲醇 -0.1%磷酸溶液（20 ∶80）和甲醇 -水（20 ∶80）。經(jīng)試驗(yàn)證明，3種流動(dòng)相都可達(dá)到較好的分離效果。因流動(dòng)相甲醇-水（20∶80）不含無(wú)機(jī)酸且對(duì)色譜柱影響小，好配制，故選擇甲醇-水（20∶80）作流動(dòng)相，分離效果較好。

參考文獻(xiàn)：

［1］YBZ07852006，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）［S］.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:187-188.

［3］李 翔，劉皈陽(yáng)，馬建麗，等.HPLC法測(cè)定克咳膠囊中苦杏仁苷含量［J］. 中國(guó)藥師，2013，16（7）:1 010-1 011.

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［5］周政政，郭永輝.苦杏仁苷純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制和純度標(biāo)準(zhǔn)值及不確定度分析方法研究［J］. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，32（4）:504-510.

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