高效液相色譜內(nèi)標(biāo)與外標(biāo)法測(cè)定復(fù)方地塞米松軟膏含量比較

王 琦，黃秋波，黃曉梅，王佳坤，陳巧輝，甘惠貞

（中國人民解放軍第180醫(yī)院藥學(xué)科，福建 泉州 362000）

醋酸地塞米松為腎上腺皮質(zhì)激素類藥，具有消炎、抗過敏作用［1］。醋酸地塞米松軟膏為常見皮膚科用藥，含量檢測(cè)方法在2010年版《中國藥典（二部）》規(guī)定采用內(nèi)標(biāo)法［2］。筆者比較了采用高效液相色譜（HPLC）內(nèi)、外標(biāo)法測(cè)定復(fù)方地塞米松軟膏中地塞米松的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1100型高效液相色譜儀；VWD-3400紫外檢測(cè)器；梅特勒AE-240型電子天平。復(fù)方醋酸地塞米松乳膏（新鄉(xiāng)市琦寧藥業(yè)有限公司，批號(hào)分別為 130402，130511，130602）；醋酸地塞米松對(duì)照品、甲睪酮對(duì)照品（均由中國食品藥品檢定研究院提供）；甲醇（美國進(jìn)口，F(xiàn)isher）為色譜純，水為經(jīng)0.45μm濾膜過濾的重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Kromasil100-5C18柱（250mm ×4.60mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇 - 水（70 ∶30）；流速：1.0mL /min；檢測(cè)波長：240 nm［2］；柱溫：30℃。在此條件下，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液配制

精密稱取甲睪酮對(duì)照品適量，加甲醇溶液制成每1 mL含0.20 mg的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。精密稱取醋酸地塞米松對(duì)照品13mg，置50mL容量瓶中，加甲醇溶液溶解并稀釋到刻度，搖勻；精密量取該溶液與內(nèi)標(biāo)溶液各5mL，置50mL容量瓶中，加甲醇溶液稀釋到刻度，得對(duì)照品溶液。取樣品約1.8 g，精密稱定，置50mL容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液5.00mL及甲醇適量，于80℃水浴中加熱使基質(zhì)溶解后，放冷，濾過，基質(zhì)用甲醇提取2次，每次10mL，濾過，合并3次濾液于同一50mL容量瓶中，加甲醇稀釋到刻度，搖勻，將容量瓶置于冰浴中冷卻2 h后，取出，迅速過濾，得濾液，作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于 0，1，2，4，6，8，12，16，20，24 h時(shí)進(jìn)樣20μL，測(cè)定地塞米松的峰面積。結(jié)果的 RSD＜1.5%（n＝10），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液20μL，在擬訂色譜條件下分別連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定地塞米松的峰面積。結(jié)果的 RSD＜2%（n＝6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：同一樣品，取樣6份，按擬訂的含量測(cè)定方法，制備供試品溶液，在上述色譜條件下采用內(nèi)、外標(biāo)法分別測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的峰面積，計(jì)算地塞米松含量。結(jié)果樣品中地塞米松含量的 RSD＜2%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取陰性對(duì)照樣品5 g（相當(dāng)于含地塞米松 2.5mg），分別精密加入地塞米松對(duì)照品 2.0，2.5，3.0mg，按供試品溶液的制備方法制備溶液，在擬訂色譜條件，測(cè)定地塞米松的峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2.4 樣品含量測(cè)定

分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μL進(jìn)樣，依上述色譜條件測(cè)定含量。內(nèi)、外標(biāo)法測(cè)定結(jié)果見表2。經(jīng)查 t值表得t0.01（12）＝ 3.055，本試驗(yàn) t＞ t0.01（12），故P＜ 0.01，表明內(nèi)、外標(biāo)法的測(cè)定結(jié)果存在著顯著性差異。

表1 地塞米松加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

表2 樣品內(nèi)、外標(biāo)法含量測(cè)定結(jié)果比較

3 討論

本研究結(jié)果顯示，2種方法測(cè)定的結(jié)果存在顯著性差異，內(nèi)標(biāo)法因?yàn)閷悠吩谔幚砑捌溥M(jìn)入色譜系統(tǒng)后等的影響因素均考慮在內(nèi)，其測(cè)定結(jié)果比外標(biāo)法更準(zhǔn)確。由表1可見，不同樣品通過兩種方法測(cè)定的結(jié)果有的差別很大，有的差別并不大，這可能與不同廠家所選用的基質(zhì)、制作工藝不同有一定的關(guān)系。因此，參考文獻(xiàn)［3-5］，對(duì)于復(fù)方醋酸地塞米松軟膏的含量測(cè)定，不能輕易用外標(biāo)法代替內(nèi)標(biāo)法。

參考文獻(xiàn)：

［1］陳新謙，金有豫，湯 光.新編藥物學(xué)［M］.第17版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2011:616.

［2］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（二部）［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:593-594.

［3］錢 方，黃 偉，吳 洪.高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定復(fù)方地塞米松乳膏中地塞米松的含量［J］. 藥學(xué)服務(wù)與研究，2002，2（4）:253-254.

［4］王興華，韓 勇.高效液相色譜法測(cè)定皮炎平軟膏中醋酸地塞米松的含量［J］. 中國藥業(yè)，2003，12（12）:45.

［5］楊習(xí)江，哈 娜，哈 力.反相高效液相色譜法測(cè)定地塞米松軟膏中地塞米松含量［J］. 醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2011，30（6）:787-788.