HPLC法同時測定益心舒片中丹參酮ⅡA的含量

摘要：目的 建立采用 HPLC法測定益心舒片中丹參酮 ⅡA含量的方法。方法 采用 KromasilC18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 um），以甲醇-水（82∶18）水梯度洗脫，流速為1 mL/min，柱溫 30℃；紫外檢測器波長為270 nm。結(jié)果 丹參酮 ⅡA在2.556～51.12 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.9998）。其平均回收率為97.58%，RSD為0.6%（n=9）。結(jié)論 本方法靈敏高、簡便、重復(fù)性好，可用于益心舒片中丹參酮ⅡA的含量測定。

關(guān)鍵詞：HPLC法；益心舒片；丹參酮ⅡA

益心舒片由人參、麥冬、五味子、黃芪、丹參、川芎和山楂七味藥組成，其中人參、丹參為君藥，黃芪、麥冬、川芎為臣藥，山楂、五味子為佐藥。主要用于氣陰兩虛，心悸脈結(jié)代，胸悶不舒、胸痛及冠心病、心絞痛見上述癥狀者[1]。方中丹參所含丹參酮ⅡA具有多種藥理作用，能對抗心肌急性缺氧損傷、抗心律失常、改善血管平滑肌功能，對缺血/再灌注引起的組織損傷具有保護作用[2]，為其重要有效成分之一。本試驗利用高效液相色譜法對丹參酮ⅡA進行了含量測定。

1儀器與試藥

Aglient 1200高效液相色譜儀，紫外檢測器，賽多利斯BP121S型電子天平，KQ-250DV型數(shù)控超聲波清洗器。丹參酮 ⅡA對照品購自中國食品藥品檢定研究院（批號：110766-200619，供含量測定用）益心舒片樣品及陰性對照均由江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司提供。甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件 Kromasil C18 色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相水-甲醇（18∶82），流速1.0 ml/min，柱溫30.0℃，檢測波長為270 nm，進樣量10 μL。

2.2對照品溶液的制備 取置五氧化二磷減壓干燥器中干燥12 h后的丹參酮ⅡA對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含丹參酮ⅡA10μg的溶液，搖勻，即得。

2.3供試品溶液的制備 取重量差異項下本品 20 片，去除薄膜衣，研細，取約 2 g，精密稱定，置100 ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 ml，稱定重量，超聲處理30 min（功率250 W，頻率40 kHz），取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，

濾過，取續(xù)濾液即得。

2.4專屬性實驗 取本品和不含丹參的益心舒片按 2.3供試品溶液的制備方法制備供試品溶液。分別精密吸取丹參酮ⅡA對照品溶液、B供試品溶液、C陰性供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀。結(jié)果表明：供試品色譜中呈現(xiàn)與對照品色譜主峰保留時間一致的色譜峰，陰性供試品色譜圖中在待測成分保留時間處無雜質(zhì)峰出現(xiàn)。表明本方法有良好的專屬性，見圖 1。

圖1 專屬性試驗A、B、C三種溶液高效液相色譜圖

2.5線性關(guān)系考察 取丹參酮ⅡA對照品適量，精密稱定，用甲醇溶解，配成濃度為51.12 μg/mL的對照品儲備液。取對照品儲備液適量，以甲醇稀釋，搖勻，得系列對照品溶液，濃度分別為2.556、5.112、10.224、25.56、51.12μg/mL，取上述溶液分別注入液相色譜儀，進樣量為 10μL，測定，以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以對照品濃度的數(shù)值為橫坐標(biāo)（X） ， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明其回歸方程為Y=29.0116X-1.0337 （R=0.9998）

2.6精密度試驗 精密吸取取丹參酮ⅡA對照品10.244 μg/mL，連續(xù)進樣6次，以峰面積計算RSD為0.72%。結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.7重復(fù)性試驗 取同一供試品（批號為130301），按2.3制備供試品溶液，平行制備6份，測定，結(jié)果丹參酮ⅡA的平均含量為0.17 mg/g，RSD=1.0%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.8中間精密度試驗 取同一供試品（批號為130301），按2.3制備供試品溶液，由兩位分析人員于不同時間分別制備6份供試品并分別使用兩臺儀器測定，計算RSD值為1.2%，結(jié)果表明該方法中間精密度良好。

2.9穩(wěn)定性試驗 取同一供試品（批號為130301），按2.3制備供試品溶液，分別在第0、1、2、4、6、8、12、16 h進行測定，計算丹參酮ⅡA峰面積RSD值為0.5%，結(jié)果表明供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定良好。

2.10回收率試驗 取已知含量的樣品（批號130301，丹參酮ⅡA的含量為0.17 mg/g）9份，約2 g/份，分別按80%、100%和120%加入對照品，按2.3制備供試品溶液，分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，測定，計算加樣回收率，見表1。

試驗結(jié)果表明，丹參酮ⅡA平均回收率為97.58%，RSD為0.6%。

2.11樣品測定 取4批樣品，按2.3制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液、對照品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，計算，見表2。

3討論

3.1色譜條件耐用性考察 本文對不同品牌色譜柱、不同柱溫和不同流動相比例進行了考察，結(jié)果表明本文采用的色譜條件耐用性良好。

3.2測定波長的選擇 丹參酮ⅡA是丹參的主要活性成分之一，其含量能反應(yīng)益心舒片的質(zhì)量；根據(jù)丹參酮ⅡA的全波長紫外吸收光譜及文獻，選擇270 nm做為測定波長，經(jīng)試驗在此波長下，供試品色譜中丹參酮ⅡA峰與其它雜質(zhì)峰達到很好的分離，陰性樣品無干擾。

3.3提取方法的考察 采用正交試驗法優(yōu)化提取方法，考察提取溶劑、提取時間、提取方法及溶劑用量，4個因素對提取結(jié)果的影響。最終確定提取方案為：25 ml的甲醇，超聲30 min[3]。

參考文獻：

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[2]張萌濤，錢藝華，唐安琪.中丹參酮ⅡA藥理作用的研究進展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2010，16（17）：2661.

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[4]楊樹聲，宋平順，趙建邦，等.高效液相色譜法測定丹參類藥材中四種脂溶性成分含量[J].蘭州大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版）.2010（3）.

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編輯/張燕