抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）檢測及臨床應用

摘要：目的 探討抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）檢測在系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）診斷中的意義。方法 酶聯(lián)免疫吸附法聯(lián)合間接免疫熒光發(fā)檢測抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）。結(jié)果 SLE組、其他風濕病組和健康對照組抗雙鏈DNA抗體水平比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。。抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）ELISA方法檢測靈敏度為88.5%，特異性為96.6%；抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）ELISA方法檢測靈敏度為89.6%，特異性為97.7%。結(jié)論 兩種實驗方法檢測抗雙鏈DNA抗體，有利于診斷和治療SLE。

關(guān)鍵詞：SLE dsDNA抗體

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）：是一種自身免疫性疾病，它的發(fā)病與家族遺傳、紫外線照射、體內(nèi)雌激素水平、某些藥物、食物及感染有關(guān)[2～10]。我們分析96例SLE患者抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）檢測結(jié)果，以探討抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）在SLE診斷治療中的臨床應用

1資料與方法

1.1一般資料 我院2011年10月～2014年3月風濕免疫科門診及病房SLE患者96例（SLE組），SLE診斷標準符合美國風濕病學會SLE分類標準（2009年），年齡45～72歲，平均年齡（55±8）歲，其中男25例，女71例；其他風濕疾病對照組40例，年齡40～65歲，平均年齡（45±8）歲，其中男15例，女25例；健康對照組為100名健康體檢者，年齡40～70歲，平均年齡（50±10）歲，其中男25例，女75例。

1.2方法和試劑 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）定量檢測抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體），采用間接免疫熒光法檢測抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）。試劑盒由歐蒙公司提供。測定嚴格按試劑說明書操作。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）定量檢測抗雙鏈DNA抗體步驟：取5μl血清用1.0ml樣本緩沖液稀釋并混勻，1：201倍稀釋。按加樣方案向相應微孔分別加100μl標準品、陽性對照、陰性對照或稀釋后的樣本，加樣時間不要超過15min。室溫溫育30min（+18℃到+25℃）。倒掉微孔板內(nèi)液體，用稀釋后的清洗緩沖液洗三次，300ul/次.滴加100ul酶結(jié)合物至每一微孔，室溫溫育30min（+18℃到+25℃）。倒掉微孔板內(nèi)液體，如上述步驟清洗。滴加100ul色原/底物液至每一微孔，室溫避光溫育30min（+18℃到+25℃）。倒掉微孔板內(nèi)液體，如上述步驟清洗。滴加100ul終止也至每一微孔。450nm比色，參考波長620nm。

采用歐蒙試劑，間接免疫熒光法（IIF）檢測dsDNA。加1：10稀釋的待檢血清、陰性和陽性血清對照各25ul到反應區(qū)。置于室溫30min后，放置PBS洗液缸浸泡5min。在每個反應區(qū)加FITC標記羊抗人IgG20ul，室溫反應30min后，放置PBS洗液缸浸泡5min，用吸水紙吸干水分，再封片，熒光顯微鏡下讀片。

1.3統(tǒng)計學處理 用SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行分析，采用四方格計算分析抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）：計算數(shù)據(jù)比較用x2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

兩種方法測定抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）在SLE、其他風濕病組和健康對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）?？闺p鏈DNA抗體（dsDNA抗體）ELISA方法檢測靈敏度為88.5%，特異性為96.6%；抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）ELISA方法檢測靈敏度為89.6%，特異性為97.7%。見表1。

3討論

SLE是一種常見的自身免疫性疾病，患病率約為70/10萬。SLE的診斷主要依靠臨床表現(xiàn)、實驗室檢查、組織病理學和影像學檢查?？闺p鏈DNA抗體（dsDNA抗體）是SLE的診斷標志（ACR標準），它們的陽性率取決于疾病的活動度和器官表象，同時，dsDNA也是判斷預后的標志，dsDNA滴度通常與疾病活動度相關(guān)[1]。本文對SLE組（96例）、其他風濕病組（40例）和健康組（100例）進行了抗雙鏈DNA抗體檢測?？闺p鏈DNA抗體（dsDNA抗體）：ELISA方法檢測靈敏度為88.5%，特異性為96.6%；抗雙鏈DNA抗體（dsDNA抗體）ELISA方法檢測靈敏度為89.6%，特異性為97.7%。因此，兩種實驗方法對dsDNA抗體檢測，大大提高了dsDNA的檢出率，有利于盡早診斷和治療SLE，觀察疾病活動度，減少SLE給患者帶來的痛苦。

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編輯/王海靜