姜黃中姜黃素的正交提取工藝研究

（1.天津太平洋制藥有限公司，天津 300385；2.天津市康瑞藥業(yè)有限公司，天津 300308）

摘要：目的 采用正交試驗(yàn)法，優(yōu)選姜黃中姜黃素的最佳提取工藝。方法 以姜黃素為對(duì)照品，采用HPLC法進(jìn)行測(cè)定，以提取液中姜黃素含量作為考查指標(biāo)，通過單因素試驗(yàn)研究了乙醇濃度對(duì)提取效果的影響，利用正交試驗(yàn)法優(yōu)化最佳提取工藝條件。結(jié)果 影響姜黃姜提取的主要因素是液料比與回流提取次數(shù)，正交試驗(yàn)結(jié)果表明最佳提取工藝參數(shù)為：液料比為1：8，90 %乙醇回流提取3次，提取2h/次。在此實(shí)驗(yàn)條件下，姜黃姜黃素的提取率為 1.36 %。結(jié)論 采用正交試驗(yàn)-回流提取工藝，能有效提高姜黃姜黃素的提取效率，具有良好的應(yīng)用前景。

關(guān)鍵詞：提??；姜黃；姜黃素

姜黃為姜科植物姜黃的根莖，姜黃的主要化學(xué)成分為姜黃素類和揮發(fā)油，此外還含有糖類、甾醇類及微量元素等。其中姜黃素類是以醇溶性二苯基庚烴類化合物姜黃素、脫甲氧基姜黃素和雙脫甲氧基姜黃素等 3 種組分的混合物，其結(jié)構(gòu)式如下。姜黃素是一種較理想的天然色素，也是姜黃發(fā)揮藥理作用的主要成分。有研究表明，姜黃素具有利膽、抗癌、抗炎、防止衰老和延年益壽等多方面藥理作用[1]。目前姜黃素提取常見的方法有堿水提取法和酶法等[2]，這些提取工藝中存在著操作過程復(fù)雜、不易控制和不宜工業(yè)化大生產(chǎn)等缺點(diǎn)。筆者研究以提取時(shí)間、提取次數(shù)為因素，確定正交試驗(yàn)考查范圍篩，選出優(yōu)化工藝條件；該工藝具有高收率、操作簡(jiǎn)單，并避免了堿水提取法由于反應(yīng)條件劇烈而造成色素的破壞以及酶提取法的復(fù)雜工藝，適合工業(yè)化大生產(chǎn)。

1 材料

島津LC-20 AT型高效液相色譜儀器（日本島津公司），HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋（河南石予華儀器有限公司），F(xiàn)A 1004型萬分之一分析天平（上海精科天平）。

姜黃藥材購(gòu)于河北安國(guó)藥市，50℃干燥備用；其他試劑均為分析純或色譜純。

2 結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱 Hypersil C18柱（4.6mm×200mm）；流動(dòng)相：甲醇-水（冰醋酸5%）（72：28）；檢測(cè)波長(zhǎng)：425nm，柱溫：40℃；流速：1.0mL·min-1；進(jìn)樣量：10μL。

2.2對(duì)照品溶液的制備 精密稱取姜黃素對(duì)照品，加甲醇制成0.05mg·mL-1的溶液，0.45μm微孔濾膜濾過即得。

2.3供試品溶液的制備 取姜黃色素粉末（過三號(hào)篩）約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4線性關(guān)系的考察 精密吸取對(duì)照品溶液，用甲醇稀釋成 0.0918750，0.1837500，0.36750

00，0.7350000，1.4700000 mg·min-1的溶液。精密吸取上述不同濃度的對(duì)照品溶液各10 μL，按 2.1.1色譜條件測(cè)定峰面積。以對(duì)照品量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，得回歸方程為Y=881.54x +15.571，r=0.9997。結(jié)果表明，姜黃素在0.0918750～1.47μg呈良好的線性關(guān)系。

2.5精密度實(shí)驗(yàn) 取姜黃生品粗粉，按供試品溶液制備方法制備，在上述色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得測(cè)得姜黃素面積RSD=0.56%。表明姜黃素精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 姜黃素溶液分別在0、2、4、6、8、10、24h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積積分值，計(jì)算姜黃素RSD值為1.12%。結(jié)果表明姜黃素在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一姜黃生品粗粉6份各約0.1g，精密稱定，按照2.2.3供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣，測(cè)定姜黃素的含量，分別為1.60%，1.71%，1.65%，1.73%，1.69%，1.66%，平均含量為1.67%，RSD為2.55%（n=6）。結(jié)果表明此法重復(fù)性良好。

2.8加樣回收實(shí)驗(yàn) 取已知含量的姜黃素粉末約0.05g，精密稱定，加入姜黃素對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備，測(cè)定其含量，計(jì)算回收率為97.63%，RSD為1.27%（n=6）。結(jié)果表明此法加樣回收率良好。

2.9提取溶劑的選擇 稱取姜黃素藥材5g，精密稱定，分別用蒸餾水和10%、30%、50%、70%、90%、95%的乙醇作為提取溶劑，料液比1：8，回流提取2h，過濾并離心，取上清液70%乙醇定容至250mL量瓶中，分別吸取20mL，于水浴上蒸干，甲醇溶解并定容至25 mL量瓶中，得供試品溶液。0.45 μm微孔濾膜濾過，按2.1色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定姜黃素含量。結(jié)果見表1。 用乙醇作為溶劑提取姜黃素，醇提液中姜黃素含量明顯高于水提液， 其中90%乙醇提取液中姜黃素含量最高，故以90%乙醇作為姜黃素的提取溶劑。

2.10 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案 選擇料液比（A）、提取時(shí)間（B）、提取次數(shù)（C）作為參考因素，以姜黃素的含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，用L9（34）正交設(shè)計(jì)表安排試驗(yàn)。見表2。

2.11正交試驗(yàn)供試品的制備與測(cè)定 稱取姜黃藥材5g，根據(jù)表2按L9（34） 正交設(shè)計(jì)表安排試驗(yàn)，用90%乙醇回流提取，過濾合并濾液，離心，取上清液90%乙醇定容至250mL，分別吸取提取液20mL，水浴蒸干，甲醇溶解并定容至25mL，0.45 μm微孔濾膜濾過，按1.3.1色譜條件進(jìn)樣，以峰面積計(jì)算，得各組實(shí)驗(yàn)中姜黃素含量。見表3。

由表3正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果中的極差分析可知，A>C>B，即對(duì)姜黃中姜黃素的提取率影響為液料比>回流次數(shù)>提取時(shí)間。再由K值進(jìn)行分析，得知姜黃中姜黃素的最佳提取工藝為A2B2C3，即稱取姜黃藥材5 g， 液料比為1：8，90 %乙醇回流提取3次，提取2h/次。

2.12最優(yōu)提取工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 稱取姜黃素5g，按上述所得最佳工藝條件，驗(yàn)證3次，結(jié)果姜黃素含量分別為13.68、13.57和13.61 mg·g-1，RSD為0.41%，表明驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果與正交試驗(yàn)結(jié)果一致，該提取工藝基本穩(wěn)定。

參考文獻(xiàn)：

[1]劉立民，常喜，王偉華，等. 姜黃素對(duì)前列腺癌PC-3M細(xì)胞抗侵襲作用的研究[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2006，10（9）：1085-1087.

[2]黃靈芝，李麗峰，董君英.大孔樹脂提取純化姜黃素的研究[J].精細(xì)化工中間體，2007，37（5）：24-26.

編輯/哈濤