生龍接骨膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究

摘要：目的 建立生龍接骨膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 采用薄層色譜法對(duì)生龍接骨進(jìn)行定性鑒別，并應(yīng)用高效液相色譜法對(duì)制劑中三七的主要活性成分人參皂苷Rg1進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果 生龍接骨的薄層色譜圖斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無(wú)干擾；人參皂苷Rg1在1.138～11.38μg范圍內(nèi)與峰面積的線性關(guān)系良好，r=0.9994、專(zhuān)屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、平均回收率為96.5%，RSD%=0.35%（n=6）。結(jié)論 所建立的鑒別方法操作簡(jiǎn)單，專(zhuān)屬性強(qiáng)，定量方法穩(wěn)定靈敏，重現(xiàn)性良好，能夠較好控制生龍接骨膠囊質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：生龍接骨膠囊；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

生龍接骨膠囊主要由三七、當(dāng)歸、熟地、雞血藤、續(xù)斷、骨碎補(bǔ)等17味藥材組成，具備溫經(jīng)行血、續(xù)筋接骨、消腫止痛以及通絡(luò)散瘀的作用，臨床主要應(yīng)用于骨折、跌打損傷、愈合較慢的患者中[1]。目前，該制劑已部分應(yīng)用于臨床治療中，為有效控制生龍接骨膠囊的生產(chǎn)質(zhì)量，本文對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。

1 儀器和試劑

高效液相色譜儀（Agilent1100，美國(guó)）；電熱恒溫水浴鍋（泰斯特，天津）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（精鷹醫(yī)療器械，山東）；Mole search超純水儀（摩爾科技，上海）等儀器。

人參皂苷Rg1對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110703-200424）；自制生龍接骨膠囊（生產(chǎn)批號(hào)：20060816、20060817、20060818）；乙腈、甲醇為色譜純；正丁醇、磷酸、乙醚、氨水均為分析純。

2 制作方法

十七種成分，將三七和血竭粉碎為細(xì)粉，備用；其余當(dāng)歸等成分加入到水中進(jìn)行二次煎煮，其中，第一次煎煮時(shí)間為2h，第二次煎煮時(shí)間為1.5h，濾過(guò)。將上述濾液合并，并濃縮為密度1.30，約為70℃以上稠膏，烘干，將其粉碎為細(xì)粉，然后將上述三七等細(xì)粉加入，混合均勻，制作成顆粒，裝入膠囊，共制為1000粒顆粒。該藥物屬于硬膠囊，內(nèi)容物為棕褐色、紅棕色的粉末、顆粒，氣微、味微苦。

3 鑒別

3.1供試品溶液制備 取5g本品，研為細(xì)末，加入25ml甲醇，超聲下處理30min，濾過(guò)，蒸干濾液，在殘?jiān)屑尤?0ml水溶解，用水飽和正丁醇振搖提取3次，提取20ml/次；合并正丁醇液，應(yīng)用氨試液進(jìn)行2次洗滌，洗滌20ml/次；將氨試液棄去，再用水洗滌3次，30ml/次，然后將水液棄去；在殘?jiān)鼉?nèi)加入5ml水有效溶解；應(yīng)用D101型大孔樹(shù)脂柱，依次應(yīng)用50ml水和50ml的30%乙醇將其洗脫，丟棄洗脫液；繼續(xù)用50ml的70%乙醇進(jìn)行洗脫，對(duì)洗脫液進(jìn)行收集，蒸干后，在殘?jiān)屑尤?ml甲醇進(jìn)行溶解，備用。

3.2陰性樣品溶液制備 除川續(xù)斷外，其余各種藥物均按照處方量進(jìn)行投料，作為陰性樣品；然后按照上述制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。

3.3對(duì)照品溶液制備 將川續(xù)斷皂苷Ⅵ作為對(duì)照品，加入甲醇后，將其制作為每1ml中含有1mg溶液。

3.4實(shí)驗(yàn)方法 按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VIB制定的薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)[2]。首先分別吸取5～10μl供試品溶液和陰性樣品溶液，及2μl對(duì)照品溶液，將其點(diǎn)到同一個(gè)硅膠G薄層板上，薄層板成分主要為羧甲基纖維素鈉，展開(kāi)劑主要應(yīng)用在10℃環(huán)境下放置的三氯甲烷-甲醇-水，展開(kāi)后將其取出，晾干，應(yīng)用10%硫酸乙醇溶液噴灑，放置到105℃的環(huán)境下加熱處理，直到斑點(diǎn)顯色清晰為止。在供試品色譜內(nèi)，于對(duì)照品色譜互相對(duì)應(yīng)位置，其所顯示的斑點(diǎn)顏色相同，且在陰性樣品色譜圖中無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn)。

3.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果 通過(guò)陰性樣品對(duì)照實(shí)驗(yàn)和三批樣品實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察分析，于供試品色譜內(nèi)，和對(duì)照品色譜相應(yīng)位置，其所顯示出的斑點(diǎn)顏色相同。且其分離效果較好，不會(huì)與陰性樣品產(chǎn)生較大干擾。

4 含量測(cè)定

4.1色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 將十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑；將乙腈-0.1%磷酸溶液（23：77）作為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm；柱溫為40℃；按人參皂苷Rg1峰對(duì)理論板數(shù)進(jìn)行計(jì)算，應(yīng)不低于3000。

4.2供試品溶液的制備 取裝量差異下的本品，研細(xì)后取約2g，精密稱(chēng)定，置于具賽錐形瓶?jī)?nèi)，精密加入50ml甲醇，對(duì)其重量進(jìn)行稱(chēng)定，加熱回流2h，靜置冷卻后，再次對(duì)其重量進(jìn)行稱(chēng)量；甲醇補(bǔ)充缺失重量，混搖均勻后，濾過(guò)處理；精密量取25ml續(xù)濾液，水浴蒸干，在殘?jiān)屑尤?0ml水進(jìn)行溶解，轉(zhuǎn)移到分液漏內(nèi)，20ml乙醚振搖提取，棄乙醚液，再用水飽和的正丁醇液振搖提取4次，20ml/次；合并正丁醇液，繼續(xù)使用30ml氨試液進(jìn)行洗滌，再應(yīng)用20ml正丁醇飽和的水進(jìn)行洗滌，分取正丁醇液水浴蒸干，用甲醇對(duì)殘?jiān)M(jìn)行溶解，定容于10ml容量瓶?jī)?nèi)，濾過(guò)即得[3]。

4.3測(cè)定方法 分別精密吸取20μl供試品溶液和對(duì)照品溶液，將其注入到液相色譜儀內(nèi)，見(jiàn)圖1、圖2。本品每粒含三七以人參皂苷Rg1（C42H72O14）進(jìn)行計(jì)算，不能少于0.60mg。

圖1 對(duì)照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

4.4線性范圍考察 精密稱(chēng)定14.23mg人參皂苷Rg1對(duì)照品，將其放置到25ml的量瓶?jī)?nèi)，加入甲醇定容，分別精密量取1ml、3ml、5ml、7ml以及10ml，置于10ml量瓶?jī)?nèi)，加入甲醇至刻度位置，充分搖勻后，精密吸取上述溶液20ul，在色譜條件下測(cè)定峰面積；將對(duì)照品量作為橫坐標(biāo)，峰面積作為縱坐標(biāo)，對(duì)其進(jìn)行線性回歸分析。結(jié)果表明，在1.138～11.38ug范圍內(nèi)，人參皂苷Rg1的線性關(guān)系良好，線性回歸方程：y=254648×-9204.4，R=0.9994。

4.5精密度試驗(yàn) 稱(chēng)取對(duì)照品溶液，每毫升0.2845mg，重復(fù)性進(jìn)行6次測(cè)定，結(jié)果顯示具有較好的精密度，RSD%為0.48%（n=6）。

4.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 稱(chēng)取對(duì)照品溶液，每毫升0.2845mg，每2h進(jìn)樣1次，結(jié)果顯示，在10h內(nèi)，人參皂苷Rg峰面積無(wú)明顯變化，表明對(duì)照品穩(wěn)定性好，RSD%為0.14%（n=6）。

4.7重復(fù)性試驗(yàn) 在同一批樣品內(nèi)，共稱(chēng)定6份，應(yīng)用上述色譜試驗(yàn)法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示樣品均具有較好的重復(fù)性，RSD%為0.35%（n=6）。

4.8加樣回收率試驗(yàn) 稱(chēng)取1g本品（1.905mg/g）6份，分別將其加入到一定量的對(duì)照品溶液內(nèi)，按照含量測(cè)定法進(jìn)行以下試驗(yàn)，對(duì)回收率進(jìn)行計(jì)算，回收率計(jì)算公式為：（實(shí)測(cè)值-樣品所含人參皂苷Rg1含量）/加入人參皂苷Rg1量×100%，本組平均回收率達(dá)到96.5%。

5 結(jié)論

本文主要通過(guò)薄層色譜法對(duì)續(xù)斷中川續(xù)斷皂苷Ⅵ進(jìn)行鑒別，該方法操作簡(jiǎn)便，且具有較強(qiáng)的專(zhuān)屬性和重現(xiàn)性，并應(yīng)用高效液相色譜法對(duì)三七中的人參皂苷Rg1進(jìn)行含量測(cè)定，該法線性范圍寬、專(zhuān)屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好，且樣品穩(wěn)定可控，在制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的控制中發(fā)揮著十分重要的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]李勇強(qiáng)，牛海彬，侯宇，等.生龍接骨膠囊在骨折愈合早中期X光影像學(xué)研究[J].醫(yī)學(xué)美學(xué)美容（中旬刊），2014，01（08）：56-57.

[2]郭征兵，徐倩.生龍接骨膠囊薄層色譜鑒別[J].江西醫(yī)藥，2010，45（06）：585.

[3]孔令提，代龍.接骨七厘散軟膠囊內(nèi)容物加PEG400濕法超微粉碎工藝研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20（11）：2810-2812.

編輯/哈濤