熒光定量PCR與抗酸染色、結(jié)核抗體檢測結(jié)核分枝桿菌結(jié)果對比

摘要：目的 對比分析熒光定量PCR與抗酸染色、結(jié)核抗體檢測結(jié)核分枝桿菌結(jié)果。方法 隨機(jī)選取醫(yī)院收治的2014年1月～2015年1月30例結(jié)核病患者以及30例非結(jié)核呼吸系統(tǒng)疾病患者，對其痰標(biāo)進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌檢測，并且依據(jù)檢測方法的不同，分為研究組（60例）、觀察組（60例）與對照組（60例）。給予對照組中，采取結(jié)核抗體檢測，給予研究組中，給予抗酸染色檢測，對于觀察組中，給予熒光定量PCR檢測，對比結(jié)核分枝桿菌檢測結(jié)果。結(jié)果 研究組檢測陽性率為83.3%，特異性達(dá)到100%；較觀察組與對照組比較存在差異（P<0.05）。結(jié)論 在臨床檢測結(jié)核分枝桿菌中，應(yīng)用抗酸染色檢測，效果要好于熒光定量PCR、結(jié)核抗體檢測，降敏感性高、特異性強(qiáng)，發(fā)揮積極應(yīng)用價值。

關(guān)鍵詞：抗酸染色；結(jié)核抗體；熒光定量PCR；結(jié)核分枝桿菌

相關(guān)醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)報道，結(jié)核病多是由結(jié)核分支桿菌感染引起的，強(qiáng)化臨床結(jié)核桿菌檢測，可以有效確診疾病，并提升臨床結(jié)核桿菌檢測水平[1]。本研究對近年醫(yī)院收治30例結(jié)核病患者以及30例非結(jié)核呼吸系統(tǒng)疾病患者，分析熒光定量PCR與抗酸染色、結(jié)核抗體檢測結(jié)核分枝桿菌結(jié)果。

1 資料與方法

1.1一般資料 針對在醫(yī)院2014年1月～2015年1月收治30例結(jié)核病患者以及30例非結(jié)核呼吸系統(tǒng)疾病患者，患者均知情同意?；颊吣挲g在50～80歲，平均年齡為（66.5±10.3）歲；可以根據(jù)檢測方法的不同，將其分為研究組（60例）、觀察組（60例）、對照組（60例）。

1.2方法 收集30例研究對象的呼吸道病原菌，呼吸道痰標(biāo)本、上呼吸道咽拭子、支氣管鏡下抽吸灌洗液。同時，對照組檢測中，應(yīng)用結(jié)核抗體檢測方法，以清晨的痰取樣，直接涂厚片抗酸染色，應(yīng)用顯微鏡下觀察，做出檢測。

觀察組檢測中，應(yīng)用熒光定量PCR檢測方法，可在患者痰標(biāo)本中加入1MNaOH溶液混勻，使其液化后，取標(biāo)本于試劑盒中，進(jìn)行洗滌沉淀得到擴(kuò)增的模板，并將其放置在PCR的反應(yīng)管之中，在其中加入反應(yīng)液、lUNG、Ll Taq酶、2Ll模板，可以把反應(yīng)管放置在BIO-RAD iCycler熒光定量PCR檢測儀之中，進(jìn)行結(jié)核分枝桿菌檢測。

研究組檢測中，應(yīng)用抗酸染色，并可取患者靜脈血，分離血清，并結(jié)核抗體檢測塑料板塊中，加入患者血清標(biāo)本50Ll，然后在清潔無油的玻片上涂開，等到涂片自然干燥之后，可以用片夾挾住玻片一端，以火焰固定，在涂抹面蓋上濾紙片，并滴加石炭酸復(fù)紅染液，確保濾紙片被完全染液浸濕，將試驗(yàn)玻片在小火上加溫后，玻片冷，可以滴加3%的鹽酸酒精脫色，并滴加30s呂氏美藍(lán)染液，進(jìn)行水洗，在吸干后進(jìn)行鏡檢；其檢測結(jié)果以陰、陽性表示。

1.3統(tǒng)計處理 針對本次的研究結(jié)果，應(yīng)用統(tǒng)計SSPS20.0版本軟件進(jìn)行結(jié)果處理，其中對于計數(shù)資料用率來表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，且以結(jié)果P<0.05表明有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)研究組抗酸染色檢測，結(jié)核抗體檢測法特異性達(dá)到100%；經(jīng)χ2檢驗(yàn)后，在對照組、觀察組中，其檢測結(jié)核抗體特異性低于研究組抗酸染色檢測法，有明顯差異（P<0.05）。見表1。

3 討論

研究指出，臨床中應(yīng)用痰涂片抗酸染色鏡檢測結(jié)核分枝桿菌，其得到的陽性率較高，在抗酸染色之中，針對多種群痰細(xì)菌數(shù)量檢測，可以避免造成假陰性，提升檢測陽性率[2]。并且，由于不同人群機(jī)體免疫力存在差異，應(yīng)用抗酸染色檢測，可以檢測結(jié)核分枝桿菌[3]。本次研究中，研究組應(yīng)用抗酸染色檢測法，其特異性高達(dá)100%，結(jié)核分枝桿菌檢測中，較對照組與觀察組比較有顯著差異（P<0.05）。

熒光定量PCR檢測，作為Perkin Elmer公司研制的核酸定量技術(shù)，具有高靈敏性、重復(fù)性高的特點(diǎn)，其基本的原理，可以在PCR反應(yīng)體系之中，設(shè)計特異性引物，并可在引物的3c端設(shè)計雙熒光標(biāo)記探針，構(gòu)成能量傳遞。熒光定量PCR檢測結(jié)核分枝桿菌，其采用密封系統(tǒng)，雖然可以擴(kuò)增PCR[4]，但是結(jié)核分枝桿菌檢測中，該方法成本較高。

結(jié)核分枝桿菌檢測中，由于苯胺染料一般不易使結(jié)核分枝桿菌著色，應(yīng)用抗酸染色方法，在通過加溫以及延長染色時間使結(jié)核分枝桿菌著色后，應(yīng)用3%鹽酸酒精處理結(jié)核分枝桿菌也不易脫色，并且經(jīng)抗酸染色后，結(jié)核分枝桿菌會呈紅色，對于非抗酸菌以及細(xì)胞雜質(zhì)就會呈藍(lán)色，易于檢測[5]。在結(jié)核分枝桿菌檢測中，應(yīng)用抗酸染色，能夠有效清除樣本干擾，提高檢測結(jié)果的靈敏度，減少誤差，臨床檢驗(yàn)效果更穩(wěn)定。

本研究結(jié)果充分證實(shí)，針對臨床結(jié)核分枝桿菌檢測中，應(yīng)用抗酸染色技術(shù)，敏感性高、特異性強(qiáng)，效果要好于熒光定量PCR、結(jié)核抗體檢測，值得在實(shí)際中推廣。

參考文獻(xiàn)：

[1]方梅，陸巧榮，洪志強(qiáng)，等.分子信標(biāo)熒光定量PCR技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌方法建立及其臨床應(yīng)用[J].四川大學(xué)學(xué)報（醫(yī)學(xué)版），2010，41（1）：162-165.

[2]崔金環(huán)，楊光，蘇錫康，等.熒光定量PCR技術(shù)檢測石蠟包埋組織結(jié)核桿菌DNA的應(yīng)用評價[J].廣東醫(yī)學(xué)，2011，32（20）：2695-2697.

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