胚胎停止發(fā)育的患者與正常早期妊娠絨毛組織缺氧適應(yīng)相關(guān)基因的表達(dá)與意義

摘要：目的 探討胚胎停止發(fā)育的患者絨毛組織缺氧適應(yīng)相關(guān)基因HIF-1a、PHD1、PHD2和FH-1的表達(dá)及意義。方法 利用免疫組化方法檢測(cè)34例胚胎停止發(fā)育患者的絨毛組織和24例正常早期妊娠絨毛組織的HIF-1a、PHD1、PHD2和FH-1基因蛋白水平，對(duì)兩組的表達(dá)水平進(jìn)行比較分析。結(jié)果 ①HIF-1a、PHD1、PHD2和FH-1基因蛋白均主要表達(dá)在合體滋養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的胞漿中；②HIF-1a、PHD1、PHD2和FH-1在胚胎停止發(fā)育研究組（強(qiáng)陽性率分別為0%、38%、0%、44%）及在正常早期妊娠對(duì)照組（強(qiáng)陽性率分別為33%、0%、25%、0%）中表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001；P<0.001；P=0.002；P<0.001）。與正常早期妊娠絨毛組織相比較，胚胎停止發(fā)育患者絨毛組織中的HIF-1a陽性表達(dá)明顯低于對(duì)照組（P<0.01）。結(jié)論 PHD1、PHD2和FH-1可能在妊娠進(jìn)展過程中通過調(diào)節(jié)HIF-1a參與對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤的調(diào)控和絨毛發(fā)育，而HIF-1a在絨毛中的低表達(dá)可能是導(dǎo)致胚胎停止發(fā)育的原因之一，對(duì)于妊娠的成功起重要的調(diào)節(jié)作用。

關(guān)鍵詞：胚胎停止發(fā)育；絨毛；缺氧誘導(dǎo)因子-1a；缺氧誘導(dǎo)因子脯氨酸羥化酶；因子抑制缺氧誘導(dǎo)因子-1

研究表明[1]，缺氧誘導(dǎo)因子-1（HIF-1）參與機(jī)體對(duì)缺氧的反應(yīng)，調(diào)節(jié)了胎盤血管形成。在胚胎停止發(fā)育滋養(yǎng)細(xì)胞中其表達(dá)不同。HIF-1a是HIF-1的功能亞基，缺氧誘導(dǎo)因子脯氨酸羥化酶（PHD）和因子抑制缺氧誘導(dǎo)因子-1（FH-1）分別通過羥化HIF-1a的脯氨酸殘基和天冬氨酸殘基來調(diào)節(jié)HIF-1a的蛋白含量和轉(zhuǎn)錄活性。PHD有四種同工酶，分別為PHD1、2、3、4本文通過免疫組化方法測(cè)定胚胎停止發(fā)育中的絨毛與正常妊娠絨毛組織中的HIF-1a、PHD1、PHD2和FH-1的表達(dá)，探討它們?cè)谂咛ネＶ拱l(fā)育中的表達(dá)與發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2008年7月～2009年7月我院收治胚胎停止發(fā)育患者共34例，作為實(shí)驗(yàn)觀察組，納入條件為：初產(chǎn)婦，停經(jīng)時(shí)間（10w），B超檢查確診為宮內(nèi)妊娠，但是胚胎已停止發(fā)育，血常規(guī)及血凝四項(xiàng)正常；心電圖及肝腎功能檢查均正常；無子宮畸形和其他婦科疾病，觀察組年齡（29.3±8.5）歲。另選同期相同納入條件的自愿人工流產(chǎn)婦女24例作為對(duì)照組，年齡（28.6±9.6）歲，實(shí)驗(yàn)觀察組和對(duì)照組妊娠組織均行清宮術(shù)獲得。

1.2方法

1.2.1組織標(biāo)本收集及處理 取上述對(duì)象子宮刮取的新鮮蛻膜組織，用生理鹽水洗凈血液，濾紙吸棄水分，剪成1mm大小，稱重100g，以無菌器械轉(zhuǎn)移置于研磨器中，加入生理鹽水反復(fù)漂洗后，將絨毛和漂洗后的組織置入4%中性多聚甲醛中固定，石蠟包埋，制成5mm厚的連續(xù)切片，貼片于涂有多聚賴氨酸的載片上，經(jīng)HE染色判斷切片質(zhì)量后，采用鏈霉素抗生物蛋白過氧化物酶連接（SP）法，在同一時(shí)間，同一條件進(jìn)行檢測(cè).

1.2.2結(jié)果判斷 每例樣本選取5張染色效果良性的切片，由2名有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師分別讀片。每張切片隨機(jī)觀察10個(gè)高倍視野，根據(jù)陽性細(xì)胞比例及著色深淺計(jì)分：細(xì)胞無色或無陽性細(xì)胞為0分，細(xì)胞染色或陽性細(xì)胞1%～25%為1分，細(xì)胞染色為深棕色或陽性細(xì)胞26%～50%為2分，細(xì)胞染色為深棕色或陽性細(xì)胞>50%為3分，根據(jù)計(jì)分結(jié)果判斷陽性等級(jí)：0～1分為陰性（-），1～2分為弱陽性（+），3～4分為陽性（++），5～6分為強(qiáng)陽性（+++），計(jì)算每塊組織的平均得分作為每個(gè)樣本的最終評(píng)分。

2 結(jié)果

胚胎停止發(fā)育患者與正常早期妊娠絨毛組織中HIF-1a、PHD1、PHD2和FH-1蛋白別的表達(dá)定位主要表達(dá)于合體滋養(yǎng)細(xì)胞和細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞的胞漿中。在正常早期妊娠絨毛組織中HIF-1a、PHD2陽性表達(dá)率明顯高于研究組；而PHD1和FIH-1的表達(dá)卻明顯降低，2組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），見表1。

3 討論

缺氧誘導(dǎo)因子（HIF-1a）是人類細(xì)胞存在的氧依賴轉(zhuǎn)錄激活因子，HIF是有a和β兩個(gè)亞基組成，胚胎種植于子宮內(nèi)膜時(shí)，滋養(yǎng)細(xì)胞受到局部環(huán)境的缺氧，HIF-1a在細(xì)胞內(nèi)迅速聚集，并與β亞基結(jié)合后誘導(dǎo)其下游近百種基因的轉(zhuǎn)錄，引起細(xì)胞對(duì)缺氧的一系列適應(yīng)性反應(yīng)，使胚胎耐受缺氧，促使滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育。

HIF-1a內(nèi)ODD上的脯氨酸殘基德羥基化是其降解的關(guān)鍵，脯氨酸羥化酶（PHD）是這一步驟的限速酶。而FH-1則通過羥化HIF-1aC端包含的反式激活結(jié)構(gòu)域（trans-activation dom a in TAD）的天冬氨酸殘基降低其轉(zhuǎn)錄激活活性。PHD四種同工酶中的PHD1在長時(shí)間缺氧狀態(tài)下對(duì)HIF-1a的降解有重要意義，而PHD2是正常氧分壓狀態(tài)下低穩(wěn)態(tài)水平HIF-1a的限速酶，且是接受HIF-1a（調(diào)控的靶基因，增高的HIF-1a可誘導(dǎo)其表達(dá)）。

研究結(jié)果表明HIF-1a在胚胎發(fā)育過程中起重要作用，提示早孕婦女在早孕時(shí)由于HIF-1a低水平表達(dá)，使得胚胎不能耐受低氧環(huán)境，滋養(yǎng)細(xì)胞的發(fā)育受到影響從而導(dǎo)致胚胎停止發(fā)育，HIF-1a低表達(dá)預(yù)示著胚胎停止發(fā)育，HIF-1a缺乏可能是胚胎停止發(fā)育的重要原因之一，同時(shí)我們也發(fā)現(xiàn)PHD1和FH-1蛋白的表達(dá)明顯升高，而PHD2的表達(dá)與HIF-1a一致，在胚胎停止發(fā)育中低水平表達(dá)。

綜上所述，很可能在人類妊娠的過程中，PHD1、PHD2和FH-1通過對(duì)HIF-1a的復(fù)雜調(diào)控機(jī)制，參與了對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤和分化的調(diào)節(jié)以及缺氧相關(guān)下游基因表達(dá)的調(diào)節(jié)，保證了胎盤的正常發(fā)生和發(fā)育。

參考文獻(xiàn)：

[1]WILKOWSKA TROJNIEL M，ZDRODOWSKA STEFANOW B，OSTASZEWSKA PUCHALSKA I.The influence of chlamydia trachomatis infection on spontaneous abortions[J].Advances in Medical Sciences，2009，（01）：86-90編輯/成森