膽堿酯酶定量檢測(cè)在有機(jī)磷中毒中的應(yīng)用

摘要：目的 探討膽堿酯酶定量檢測(cè)在有機(jī)磷中毒中的應(yīng)用價(jià)值。方法 設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，在接收有機(jī)磷中毒患者后，采樣定量計(jì)算膽堿酯酶，并重復(fù)試驗(yàn)5次計(jì)算誤差，選擇健康人重復(fù)試驗(yàn)10次，計(jì)算檢測(cè)誤差。結(jié)果 定量檢測(cè)結(jié)果顯示，患者在50～100U/L水平中分布比重最高，其次為100～150U/L；膽堿酯酶嚴(yán)重程度癥狀評(píng)價(jià)：輕度12例、中度37例、重度33例，輕度分布在50～220U/L，中度分布在50～150U/L，重度分布在0～150U/L，Kappa一致性系數(shù)為0.92；重復(fù)定量檢測(cè)kappa一致性系數(shù)為0.83，精密度實(shí)驗(yàn)，正誤差<4%，中度患者誤差<3%。結(jié)論 定量檢測(cè)操作簡(jiǎn)單、快速、可靠、數(shù)據(jù)穩(wěn)定，以\"0～50U/L重度，50～150U/L中度，150～220U/L輕\"為標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估中毒水平，可基本滿足臨床需要。

關(guān)鍵詞：定量檢測(cè)；農(nóng)藥中毒；有機(jī)磷農(nóng)藥中毒（AOPP）；膽堿酯酶；中毒水平

我國(guó)是農(nóng)業(yè)大國(guó)，農(nóng)藥生產(chǎn)量、使用量巨大，農(nóng)業(yè)工作者、農(nóng)藥產(chǎn)銷者接觸農(nóng)藥頻繁，成為農(nóng)藥中毒高風(fēng)險(xiǎn)人群，同時(shí)因生存壓力加大，服藥自盡者例數(shù)也顯著上升，每年農(nóng)藥中毒者超10萬(wàn)人，其中約1/5患者死亡。急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒（AOPP）是我國(guó)最常見的急性中毒疾病之一，約占農(nóng)藥中毒80%[1]。AOPP患者輕則伴有生理功能紊亂，重者可出現(xiàn)休克、呼吸衰竭甚至死亡，重癥AOPP死亡率、并發(fā)癥發(fā)生率極高，常用的治療方法包括血流灌洗、藥物解毒、洗胃等，其中部分療法存在一定使用風(fēng)險(xiǎn)，使用應(yīng)據(jù)患者病情而定，及時(shí)、快速、準(zhǔn)確的判斷患者病情，采取正確的搶救措施是改善患者預(yù)后的關(guān)鍵。膽堿酯酶活力檢測(cè)是評(píng)估AOPP中度程度的重要依據(jù)、常用手段，但檢測(cè)困難、成本高、臨床難普及，考慮到AOPP患者多來(lái)自于廣大的農(nóng)村基層，醫(yī)療條件有限，而膽堿酯酶定量檢測(cè)相對(duì)容易、成本低，適合臨床推廣[2]。本次研究就膽堿酯酶定量檢測(cè)在有機(jī)磷中毒中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行探討，并初步擬定定量檢測(cè)評(píng)估AOPP中毒水平標(biāo)準(zhǔn)。

1 資料與方法

1.1一般資料 本組患者82例，收治于2009年2月～2014年8月，其中男32例，女50例，年齡14～79歲，平均（34±6）歲。中毒途徑：噴灑毒藥中毒12例，誤服或自服70例，服用劑量5ml～145ml，平均（82±31）ml；服用至就診時(shí)間：50min～80min，平均（51±14）min。中毒藥物種類：①劇毒類4例，甲拌磷2例、內(nèi)吸磷1例、對(duì)硫磷1例；②高度類44例，敵敵畏24例、氧化樂(lè)果20例；③中等毒類27例，樂(lè)果26例、敵百蟲1例；⑤低毒類7例，均為馬拉硫磷。納入標(biāo)準(zhǔn)：①非他院轉(zhuǎn)入，本院收治；②未合并有其它類型農(nóng)藥中毒，后期確診為AOPP；③臨床資料均完整[2]。

1.2方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)一 日立7180自動(dòng)生化分析儀及其配套試劑。其基本原理是擬膽堿脂酶催化丙酰硫代膽堿水解，產(chǎn)生丙酸與硫代膽堿，后者與無(wú)色二硫代雙反應(yīng)，形成黃色的5巰基-2-硝基苯甲酸。選擇1體積底物與100ml配套試劑混合，搖勻，備用。采用速率法，波長(zhǎng)405nm，取2μl樣品稀釋至38μl，試劑體積200μl，稀釋量10μl，溫度控制在30℃，延滯35s、間隔15s，測(cè)定點(diǎn)數(shù)8，測(cè)定公式：膽堿酯酶（IU/L）=△A/min×12632，△A/min為1min內(nèi)吸光度變化值。

1.2.2實(shí)驗(yàn)二 重復(fù)實(shí)驗(yàn)5次，計(jì)算檢測(cè)誤差，評(píng)價(jià)每次檢測(cè)評(píng)價(jià)中毒水平一致性。選擇健康人，重復(fù)試驗(yàn)10次，計(jì)算檢測(cè)誤差。

1.3判定標(biāo)準(zhǔn) 膽堿酯酶嚴(yán)重程度癥狀評(píng)價(jià)：①輕度，頭暈、頭痛、惡心、嘔吐、多汗、胸悶、視力模糊、無(wú)力、瞳孔縮小等癥狀表現(xiàn)；②中度：除上述癥狀外，還有肌纖維顫動(dòng)、瞳孔明顯縮小、輕度呼吸困難、流涎、腹痛、步態(tài)蹣跚等癥狀表現(xiàn)，但意識(shí)尚清楚；③重度：除中度癥狀外，還可伴有昏迷、肺水腫、呼吸麻痹與嚴(yán)重受限、腦水腫等嚴(yán)重并發(fā)癥。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 以SPSS18.0軟件包處理所獲數(shù)據(jù)資料，以（x±s）表示計(jì)量資料，以[n（%）]表示計(jì)數(shù)資料，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1實(shí)驗(yàn)一

2.1.1定量檢測(cè)值域分布 定量檢測(cè)結(jié)果顯示如下表1，患者在50～100U/L水平中分布比重最高，其次為100～150U/L。

2.1.2中毒水平 參照膽堿酯酶嚴(yán)重程度癥狀評(píng)價(jià)中毒水平，輕度12例、中度37例、重度33例。以\"0～50U/L重度，50～150U/L中度，150～220U/L輕\"為標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估中毒水平，Kappa一致性系數(shù)為0.92，屬高度一致，見表2。

2.2實(shí)驗(yàn)二 重復(fù)檢測(cè)kappa一致性系數(shù)為0.83，屬高度一致，誤差較小，見表3。

精密度實(shí)驗(yàn)，正誤差<4%，中度患者誤差<3%，見表4。

3 討論

以膽堿酯酶活力水平評(píng)價(jià)AOPP中毒標(biāo)準(zhǔn)已較明確，即輕度中毒CHe活力50%～70%，中度中毒CHe活力30%～50%，重度中毒CHe<30%，采用公式\"膽堿酯酶活性=被測(cè)血樣中的膽堿酯酶活性絕對(duì)值/正常人中膽堿酯酶活性絕對(duì)值[3]\"，膽堿酯酶活力檢測(cè)正常值5000～13200U/L，中國(guó)常模健康人平均值為9100U/L（100%），輕度中毒CHe活力50%～70%，中度中毒CHe活力30%～50%，重度中毒CHe<30%，據(jù)公式推算平均值：輕度中毒4500U/L～6370U/L，中度中毒2730U/L～4500U/L，重度中毒<2730U/L[4]。但考慮到個(gè)體差異，這種推算誤差較大，而檢測(cè)不易受中毒影響的羥基膽堿酯酶，按照比重?fù)Q算正常狀態(tài)下全血膽堿酯酶再計(jì)算膽堿酯酶活性，則需要耗費(fèi)大量的時(shí)間，難以應(yīng)用于臨床，且所需儀器、試劑較多。本次研究結(jié)果顯示定量檢測(cè)以\"0～50U/L重度，50～150U/L中度，150～220U/L輕度\"為標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估結(jié)果與膽堿酯酶嚴(yán)重程度癥狀評(píng)價(jià)結(jié)果一致性系數(shù)K=0.92，反映定量檢測(cè)評(píng)估中毒水平效果較好。后經(jīng)實(shí)驗(yàn)二，證實(shí)定量評(píng)估結(jié)果較穩(wěn)定，可滿足臨床需要。

綜上所述，定量檢測(cè)操作簡(jiǎn)單、快速，以\"0～50U/L重度，50～150U/L中度，150～220U/L輕\"為標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估中毒水平，可基本滿足臨床需要。

參考文獻(xiàn)：

[1]王文余，任從棉，張曉軍.血清膽堿酯酶與電解質(zhì)的持續(xù)檢測(cè)在重度有機(jī)磷中毒診治中的臨床意義[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2009，24（179）：72-73.

[2]白一偉.膽堿酯酶活力快速測(cè)定盒在有機(jī)磷中毒治療中的指導(dǎo)價(jià)值[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師，2011，13（18）：202-203.

[3]張永年，李國(guó)玉，焦賢芳.有機(jī)磷農(nóng)藥作業(yè)工人血清膽堿酯酶活力分析[J].職業(yè)與健康，2006，22（22）：1938-1939.

[4]王元明.膽堿酯酶活力測(cè)定在有機(jī)磷中毒中的作用評(píng)價(jià)[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009，5（2）：114-115.編輯/哈濤