丹參中丹酚酸B含量的測定方法

摘要：丹參是一種唇形科植物丹參的根莖和干燥根部分，而丹酚酸B則是從丹參中分離提取的一種也具有新木質(zhì)素骨架和咖啡?？s酚酸結(jié)構(gòu)的水溶性成分。單分散有抗前列腺腫瘤、抗氧化清除自由基、抗肝纖維化和放置神經(jīng)推行性疾病等效用，其開發(fā)利用的前景極為廣闊。

關(guān)鍵詞：丹參；丹酚酸B含量；測定方法

由《中國藥典》2005版和當(dāng)前報道中丹酚酸B測定方法中可知，供試品溶液制備手段，是采用75%甲醇，進行1 h的加熱回流后提取，并采取HPLC測定其含量[1]。這種測定丹參中丹酚酸B含量的方法，具有良好的重現(xiàn)性，然而操作比較復(fù)雜，耗時較長，有方法改進的必要。

1材料和儀器

從廣州廣弘中藥材有限公司中購得丹參藥材，且通過中藥鑒定，確定其為唇形科植物丹參根莖和干燥根，與2005年版的《中國藥典》中相關(guān)規(guī)定相符合。其中，甲醇是色譜純，水為純凈水，其他試劑都是分析純。儀器則采用由安捷倫科技有限公司生產(chǎn)的Agilent1100高效液相色譜儀，及上海科導(dǎo)SK1200H超聲波提取器。

2方法和結(jié)果

2.1丹酚酸B供試液制備方法

2.1.1回流提取法 去本品中粉0.2 g，在去本品粉末的測定水分，通過精密稱定后，將其放置在色錐形的容量瓶中，再加入50 ml的75%甲醇，稱定重量后，行1 h的加熱回流，取出放冷后，再行重量稱定，使用75%的甲醇不足所減失的重量，將其搖勻，再濾過，將濾液取出，即得，其編號定為1。

2.1.2超聲提取法 取本品中粉0.2 g，同時去本品粉末的測定水分四分，通過精密稱定后，將其分別放置在四個100 ml的容量瓶中，再加入4 ml的75%乙醇，提取10，20，30，40 min，再精密量取其中的1 ml提取物，放置在100 ml的量瓶例，將甲醇加至刻度，搖勻后即得，其編號定為2，3，4，5。

2.2使用HPLC測定超聲提取法和回流提取法中丹酚酸B含量

2.2.1色譜條件 色譜柱為Symmetry C18（4.6 mm ×150 mm，5 m）；流速為1.0 ml/min；柱溫為35℃；檢測波長為286 mm；流動相為甲醇.乙腈.甲酸水 （30：10：1：59）；理論半數(shù)根據(jù)丹酚酸B峰值計算，且要高于2000。

2.2.2制備對照品溶液 去對照品丹酚酸B 1.4 mg，加入甲醇后，制成10 ml溶液，其濃度為0.14 mg/ml。

2.2.3制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 取丹酚酸B的對照品溶液2，4，5，10，12，14 μl，分別對其進樣，測定其峰面積，使用峰面積Y對進樣量X進行線性回歸，其回歸方程為Y=160.93X-6.976，R=0.9999.結(jié)果顯示丹酚酸B為0.28～0.12 μg時，和峰面積線性關(guān)系較好。

2.2.4精密度試驗和重現(xiàn)性實驗 取5 μl的樣品溶液，經(jīng)過6次的重復(fù)進樣后，結(jié)果顯示丹酚酸B的峰面積為0.28%；去本組丹酚酸B制備的5份供試液測定進樣，結(jié)果顯示丹酚酸B的峰面積為1.26%。

2.2.5穩(wěn)定性考察 取5 μl的樣品溶液，在制備后及2、4、12、24 h進行測定，結(jié)果顯示丹酚酸B的峰面積為1.82%，可見溶液在24h比較穩(wěn)定。

2.2.6回收率實驗 在5份樣品溶液中，加入1.7 ml的丹酚酸B對照品溶液，經(jīng)測定，其憑借回收率是95.5%，其峰面積是1.14%。結(jié)果顯示，采取超聲提取法，提取10，20，30，40 min的效果，與《中國藥典》中加熱回流1 h的丹酚酸提取效果相同。

3討論

使用超聲波所產(chǎn)生空化現(xiàn)象，可以細化各類物質(zhì)及制造乳濁液，同時可加速植物中有效成分進入溶劑，增加有效成分提取率[2]。超聲可轉(zhuǎn)為熱能，使得藥物組織中溫度驟然提升，以此加速植物中有效成分溶解。同時，超聲波還可通過使用超聲壓強和輻射壓強引發(fā)的機械作用解聚生物分子，以此將植物細胞壁上有效成分溶解在溶劑中。

超聲波所產(chǎn)生的空化現(xiàn)象還會產(chǎn)生顯微氣泡，而氣泡\"定向擴散\"可形成共振腔，從而破壞生物大分子和細胞膜，增加其有效成分擴撒速度。此外，超聲波還能破壞藥物細胞，將溶媒滲入藥物細胞中，以此加速藥物中有效成分在溶媒中的溶解速度，提升有效成分提出率[3]。

和《中國藥典》中的方法相比，本組測定方法繼承了其優(yōu)點，又改進了其中缺陷，不僅可保障丹酚酸B的提取率，還能縮短提取時間，且其丹酚酸B測定結(jié)果和《中國藥典》中的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義?？梢?，這種丹酚酸B提取法是一種高產(chǎn)、快速的新型藥物提取法，值得推廣。

參考文獻：

[1]許永，趙成.不同提取方法對丹參中丹酚酸B含量測定的影響[J].安徽醫(yī)藥，2009，13（10）：1193-1194.

[2]謝王乙子.丹參葉片不定芽的誘導(dǎo)及其成苗中丹酚酸B含量的測定[J].雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

[3]仇雅靜.對《中國藥典》2005年版丹參中丹酚酸 B含量測定方法的探討[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2009，10（1）：9-10.

編輯/肖慧