葡萄花色素苷生物合成調(diào)控研究進(jìn)展

摘 要：花色素苷是一類重要的天然色素物質(zhì)，是植物主要呈色物質(zhì)之一，并在人類健康保護(hù)方面發(fā)揮越來越重要的作用。同時(shí)，其含量高低不僅與遺傳基因與調(diào)控序列相關(guān)，還與外界溫度、濕度、光質(zhì)及栽培措施等因素息息相關(guān)。葡萄花色素苷是近年來花色素苷研究的熱點(diǎn)，該文重點(diǎn)闡述了影響葡萄花色素苷合成的內(nèi)在遺傳因素及外部環(huán)境因素的研究現(xiàn)狀，以期為葡萄優(yōu)質(zhì)早熟栽培研究提供有益的信息。

關(guān)鍵詞：葡萄 花色素苷 生物合成 遺傳因素 環(huán)境條件

中圖分類號：Q-3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1674-098X（2015）01（b）-0089-04

花色素苷（anthocyanin）屬黃酮類化合物，是決定植物花瓣、果實(shí)和種皮顏色的主要物質(zhì)，是一類廣泛存在于植物中的水溶性天然色素，存在于植物表皮細(xì)胞的液泡中，呈現(xiàn)橙色、紅色至藍(lán)色[1]?；ㄉ剀站哂卸喾N生物學(xué)功能，如表皮中的花色素苷可吸收紫外輻射，保護(hù)葉和莖的內(nèi)源組織免受紫外線的損傷；不同顏色的花瓣可吸引媒介昆蟲傳粉；花色素苷還具有抵御低溫和干旱的作用，這樣可以防止一些病蟲害侵襲。花色素苷是天然的強(qiáng)自由基清除劑，有抗氧化，預(yù)防心腦血管疾病與抗癌等多種保健功能。因?yàn)樗且环N天然食用色素，來源廣泛，并且具有安全、無毒等優(yōu)點(diǎn)。據(jù)測定，花色素苷的抗氧化效果分別是維生素C和維生素E的20倍和50倍[2]。因此，花色素苷在保健食品、園藝、醫(yī)藥和等方面都有重要的應(yīng)用價(jià)值。

葡萄是果蔬栽培中經(jīng)濟(jì)效益最高的品種之一，在我國具有悠久的栽培歷史，據(jù)中國農(nóng)學(xué)會葡萄分會統(tǒng)計(jì)，我國2011年葡萄栽培面積已達(dá)55.2萬hm2，總產(chǎn)量達(dá)843萬噸[3]。葡萄的品質(zhì)包括外觀品質(zhì)與風(fēng)味品質(zhì)，外觀品質(zhì)主要是果實(shí)顏色、大小、形狀等；風(fēng)味品質(zhì)是指糖酸含量、香味物質(zhì)、可溶性固體物等等。而葡萄色澤則是人們比較葡萄品質(zhì)最直觀的指標(biāo)之一。葡萄果皮顏色主要由所含花色素苷的成分和含量來決定[4，5]，在果皮最外3～4層細(xì)胞中所含的不同類型花色素苷使葡萄呈現(xiàn)綠色、紫色、紅色等色澤。

為了提高葡萄的食用品質(zhì)，人們近年來從調(diào)整栽培技術(shù)、調(diào)控光照、改善品種結(jié)構(gòu)、溫度、濕度等多方面對葡萄花色素苷的合成調(diào)控進(jìn)行深入的研究，并且取得了一定的進(jìn)展。本文從葡萄花色素苷合成的內(nèi)在遺傳因素與外界影響因素兩方面闡述了葡萄花色素苷生物合成調(diào)控的最新研究進(jìn)展，為我國南方鮮食葡萄的早熟優(yōu)質(zhì)設(shè)施栽培技術(shù)提供參考。

1 內(nèi)在遺傳因素

植物花色素苷的生物合成主要是由植物次生代謝丙烷類途徑和類黃酮途徑所形成。植物花色素苷的合成被結(jié)構(gòu)基因和調(diào)控基因制，并且具有特定的時(shí)空調(diào)節(jié)機(jī)制。結(jié)構(gòu)基因直接編碼花色素苷代謝生物合成的一系列酶類，人們已經(jīng)從葡萄中克隆了查爾酮合成酶 （chalcone synthase， CHS）、類黃烷酮-羥化酶（flavanone-3’-hydroxylase， F3’H）、查爾酮異構(gòu)酶（chalcone isomerase， CHI）、二氫黃酮醇還原酶（dihydroflavonol reductase， DFR）和尿苷二磷酸-葡萄糖-類黃酮-葡糖基轉(zhuǎn)移酶（UDPglucose flavonoid-glucosyl transferase， UFGT）等結(jié)構(gòu)基因[6，7]。大部分的花色素苷合成相關(guān)類黃酮結(jié)構(gòu)基因與光協(xié)同調(diào)控或受光促進(jìn)果實(shí)的色素形成，這些結(jié)構(gòu)基因編碼形成的酶屬于光調(diào)節(jié)酶，都以光敏色素為光受體[8]。

1.1 花色素苷的早期生物合成基因

因?yàn)楸酑oA縮合成查爾酮和CHS基因催化4-香豆酸CoA，形成的查爾酮提供了類黃酮的基本碳骨架，所以CHS是類黃酮和花色苷合成的關(guān)鍵酶。Goto-Yamamot等[9]對葡萄3個(gè)CHS同源基因CHS1、CHS2、CHS3進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄水平的研究，它們可以在不同的條件下進(jìn)行轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物不僅用于葡萄合成花色素苷或原花色素苷，也可用于其他酚類化合物的合成如CHS1和CHS2主要在白色品種果皮、幼葉和紅色品種的果皮中積累，而CHS3主要在紅色品種著色期間的果皮表達(dá)。這3種基因編碼的查爾酮合成酶很有可能分別用于3個(gè)不同的合成途徑，以便產(chǎn)生不同的次生代謝物。

CHI是首先被認(rèn)識的黃酮類物質(zhì)合成相關(guān)酶，降低CHI的表達(dá)水平或者活性都會導(dǎo)致類黃酮生物合成途徑不能正常向下進(jìn)行，花色苷等類黃酮物質(zhì)因此不能正常合成。CHI 對花青素的產(chǎn)生不是必需的，但完全缺少時(shí)會使突變體產(chǎn)生其他特殊顏色，CHI的參與可以確?；ㄉ照Ｋ降暮铣膳c相關(guān)器官正常顏色的形成。該基因最早是從菜豆、大豆中克隆得到的，后來又從矮牽牛中得到CHI2A與CHI2B基因。目前，已從紫花苜蓿、葡萄、金魚草、豌豆、海棠花等多種植物中分離克隆到了CHI基因[10-11]。

類黃烷酮3’-羥化酶（F3’H）催化4’，5，7-三羥基黃烷酮的C3位上羥基化形成二氫黃酮醇，是調(diào)控花色素苷合成途徑中形成類黃酮物質(zhì)的關(guān)鍵基因。類黃烷酮3’，5’-羥化酶（F3’5’H）催化類黃酮B環(huán)上3’、5’位的羥基化反應(yīng)。F3’H的反應(yīng)通常生成呈紅色的花青苷類，F(xiàn)3’5’H催化生成花翠素類呈藍(lán)色的花色素苷[2， 6]。

1.2 花色素苷的晚期生物合成基因

DFR基因最早從金魚草和玉米中分離克隆，這項(xiàng)研究證實(shí)了花色素苷的顯色作用受DFR基因的調(diào)控[6， 12]。現(xiàn)已從葡萄、擬南芥、草莓、水稻、蘋果等植物中分離克隆出來DFR，DFR在不同品種間表現(xiàn)出空間專一性調(diào)控，在花瓣中表達(dá)與CHS和CHI相協(xié)調(diào)[6，13]。Petit等[14]在2007年研究出了歐亞葡萄品種中的DFR晶體結(jié)構(gòu)，并證實(shí)了底物結(jié)合部位和識別部位的存在。另外，人們還發(fā)現(xiàn)，白光、鈣和蔗糖可誘導(dǎo)葡萄漿果中DFR基因的表達(dá)，人們從克隆到編碼葡萄DFR（CAA72420.1）的基因啟動子中發(fā)現(xiàn)DFR啟動子的特定序列參與了編碼葡萄花色素苷等基因的表達(dá)。因此說紫外受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能參與DFR基因的誘導(dǎo)[15]。

研究指出，決定葡萄果皮花色素苷最關(guān)鍵的酶是UFGT（類黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶）[6]，它是第一個(gè)使花色素苷轉(zhuǎn)化成穩(wěn)定花色素苷苷的酶，并且能使果皮由無色轉(zhuǎn)為有色，從而最終決定合成花色素苷的品種。UFGT只在有色葡萄品種轉(zhuǎn)色期后的果皮中表達(dá)，在白色品種和果肉中不表達(dá)，轉(zhuǎn)色期為上調(diào)表達(dá)，表達(dá)方式是除UFGT以外的一類調(diào)節(jié)基因控制的結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄，另外一類在轉(zhuǎn)色期之后控制UFGT的表達(dá)[10]。如在紅色葡萄品種中，UFGT只在轉(zhuǎn)色期后才表達(dá)，調(diào)節(jié)葡萄成熟過程中果皮的顏色[16]。

1.3 調(diào)控基因在花色素苷合成過程中的作用

植物花色素苷的合成不僅受結(jié)構(gòu)基因的控制，還要受到調(diào)控基因的控制。目前R2R3-MYB 蛋白、bHLH蛋白和WD40 蛋白[6-7]這三類轉(zhuǎn)錄因子都參與到了花色素苷合成調(diào)控的當(dāng)中。這些轉(zhuǎn)錄因子與結(jié)構(gòu)基因啟動子中相應(yīng)的順式作用元件相互結(jié)合，調(diào)節(jié)花色素苷苷生物合成途徑中一個(gè)或多個(gè)基因表達(dá)。在這個(gè)過程中一般是由MYB 轉(zhuǎn)錄因子、bHLH 轉(zhuǎn)錄因子和WD40蛋白構(gòu)成一個(gè)蛋白復(fù)合體，直接調(diào)控結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄[6-7]。

MYB轉(zhuǎn)錄因子含有保守的DNA結(jié)合區(qū)域（Myb結(jié)構(gòu)域），每個(gè)結(jié)構(gòu)域約由52 個(gè)氨基酸構(gòu)成[17]。葡萄花色素苷苷合成中苯丙烷類途徑的主要調(diào)控基因是R2R3-Myb家族，包括VvMYBA1-1、VvMYBA1-2、VvMYBA2、VvMYBA3、VvMYB3、VvMYB4、VvMYB5a、VvMYB5b、VvMYBPA1和VvMYBPA2等[6-7， 18-24]。在上述諸多轉(zhuǎn)錄因子中，VvmybA1被認(rèn)為是決定啟動葡萄花色素苷基因合成的主要因子，從而影響葡萄果皮的顏色發(fā)育[26-27]bHLH類轉(zhuǎn)錄因子有兩個(gè)功能區(qū)域，一個(gè)是主要由疏水氨基酸組成的HLH區(qū)，負(fù)責(zé)與其他bHLH類轉(zhuǎn)錄因子形成二聚體，bHLH蛋白二聚化后才能結(jié)合DNA[28]。另一個(gè)是由約18個(gè)親水的堿性氨基酸組成的DNA 結(jié)合區(qū)。最近，Hichri等[29]從葡萄中克隆到bHLH類轉(zhuǎn)錄因子VvMYC1，研究結(jié)果表明該轉(zhuǎn)錄因子是控制葡萄漿果花青素和原花青素合成的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的一個(gè)組成部分。

WD40重復(fù)蛋白具有β螺旋結(jié)構(gòu)。研究表明，異源表達(dá)WD40重復(fù)蛋白，可以跟其它蛋白配體作用并正常發(fā)揮他應(yīng)有的功能，酵母雙雜交技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)，這些配體主要是bHLH和MYB轉(zhuǎn)錄因子[2]。目前，已有鑒定出多種WD40重復(fù)蛋白基因，如TTG1、紫蘇的PFWD和玉米的PAC1、矮牽牛的AN11、擬南芥等 [30-31]。但未見有葡萄編碼WD40重復(fù)蛋白基因的報(bào)道。

2 外界環(huán)境因素

與其他植物一樣，葡萄果皮花色素苷的合成與積累是一個(gè)非常復(fù)雜的過程，除受到其本身的遺傳因素外，還與其栽培的各種環(huán)境因素和農(nóng)藝措施相關(guān)，包括光、溫度、水分、激素、糖分、土壤條件及修剪方式等，其中最主要是光、溫度、水分、糖和激素[2， 6-8， 32-33]

2.1 光

在許多植物的果實(shí)中，光作為一種環(huán)境信號，通過對相關(guān)酶基因的直接或間接調(diào)控來影響花色素苷生物合成[34]。光按波長范圍可分為紅外線、可見光和紫外線，藍(lán)光會促進(jìn)新合成的有機(jī)物中蛋白質(zhì)的積累，紅光促進(jìn)碳水化合物的增加[35]。近年來，國內(nèi)外學(xué)者對光調(diào)控花色素苷合成的機(jī)理研究十分關(guān)注，包括光強(qiáng)、光質(zhì)和光周期等[6-8， 32-33]。但大多數(shù)研究僅局限在農(nóng)作物、花卉組織培養(yǎng)和蔬菜幼苗上，對葡萄等水果花色素苷合成影響的報(bào)道仍然很少。從目前的研究結(jié)果來看，光強(qiáng)和光質(zhì)會對葡萄果皮花色素苷積累產(chǎn)生一定的影響[6， 8， 33]。如Jeong等[36]和Chorti等[37]等研究認(rèn)為，光線照射對葡萄果皮花色素苷濃度有一定的影響。遮光處理可在一定程度上減少VvmybA1、MYB12、MYBA1和MYB5a轉(zhuǎn)錄因子mRNA的積累，從而影響花色素苷生物合成結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)，如FLS4、CHS、LDOX、OMT、UFGT和F3’H；這些研究還發(fā)現(xiàn)，延長光照射的時(shí)間也會使葡萄果皮花色素苷的積累降低，合適的光照時(shí)間有利于葡萄花色素苷的積累，而不同葡萄品種之間對光照的需求也不盡相同，需通過試驗(yàn)再確定適宜的光強(qiáng)。Kataoka等[38]研究發(fā)現(xiàn)，白光和/或紫外線處理會增加葡萄果皮花色素苷的積累。雷鳴等[39]在紅地球葡萄上的研究結(jié)果則表明，藍(lán)光、紫光、黃光可促進(jìn)葡萄花色素苷的積累，而紅光、橙光、綠光、全遮光則抑制花色素苷的積累；黃光和紫光可顯著促進(jìn)葡萄芍藥素糖苷的合成，而綠光、橙光、全遮光則抑制芍藥素糖苷的合成。

2.2 溫度

在玉米[40]、擬南芥[41]、矮牽牛[42]和葡萄（Vitis vinifera）[43]等的研究中發(fā)現(xiàn)，溫度是影響植物組織中花色素苷積累的另一個(gè)主要環(huán)境因子。低溫會誘導(dǎo)花色素苷合成相關(guān)基因的表達(dá)，使花色素苷含量升高，如使PAL、CHS、CHI和DFR基因的轉(zhuǎn)錄水平升高幾倍；而高溫卻能抑制基因的表達(dá)，使花色素苷含量降低。溫度對葡萄花色素苷合成的調(diào)控發(fā)生在它合成途徑的多步反應(yīng)中，如對ANS、F3H、CHS、DFR、和UFGT基因進(jìn)行調(diào)控[44]。與此同時(shí)，隨著轉(zhuǎn)錄因子對溫度的響應(yīng)，花色素苷的最終積累量也會發(fā)生不同程度的變化。如溫度過高會降低葡萄果皮花色素苷的積累，在30 ℃或35 ℃條件下種植的葡萄中的總花色素苷含量顯著降低，僅為25 ℃條件下花色素苷含量的一半，主要原因在于高溫一方面會抑制花色素苷合成相關(guān)基因的mRNA轉(zhuǎn)錄，另一方面還加快了已合成花色素苷的降解[45-46]。從不同年度田間生產(chǎn)的葡萄果皮花色素苷積累數(shù)據(jù)來看，花色素苷含量較低的一般出現(xiàn)在氣溫較熱的年份，而積累較多的則出現(xiàn)在氣溫偏涼的年份[47-48]

2.3 水分

水分狀況是影響葡萄花色素苷合成的重要環(huán)境因素。在葡萄成熟過程中，水分虧缺條件可極大地促進(jìn)葡萄果皮花色素苷的生物合成，從而增強(qiáng)花色素苷的積累。研究發(fā)現(xiàn)，在葡萄成熟過程中遇到缺水的刺激，不僅能促進(jìn)花色素苷合成相關(guān)基因，如CHS，F(xiàn)3’H和UFGT等的表達(dá)，還會增加花色素苷B環(huán)修改相關(guān)基因，包括F3'5'H和Omt的表達(dá)豐度，從而使羥基化和甲氧基化花色素苷得以在葡萄果皮中積累[49]。人們研究還發(fā)現(xiàn)，缺水也可能通過限制原花青素和黃酮醇合成與積累相關(guān)結(jié)構(gòu)基因的表達(dá)導(dǎo)致花色素苷合成基因的早期表達(dá)[50]。最近研究表明，缺水條件會提高葡萄果皮中三羥基化花色素苷的比例，如錦葵色素和香豆素衍生物等[51-53]。

2.4 糖

已有研究證實(shí)，花色素苷在葡萄果實(shí)中的積累起始于轉(zhuǎn)色期，即糖積累初始期，兩者在合成初期出現(xiàn)很強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性[54-56]。這與糖在葡萄等植物花色素苷合成過程中的功能是密切相關(guān)的。首先，糖是花色素苷的前體物質(zhì)，也是花色素苷結(jié)構(gòu)的一個(gè)組分；其次，糖還能通過特異的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑來調(diào)節(jié)花色素苷合成相關(guān)酶基因的表達(dá)，從而影響葡萄著色[6， 54-55]。如Vitrac等[57]在葡萄懸浮細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)，糖通過己糖激酶信號途徑能促進(jìn)CHS基因的表達(dá)從而增加葡萄果皮花色素苷的積累。Zheng等[58]則認(rèn)為糖能增強(qiáng)F3’H的基因表達(dá)，從而促進(jìn)葡萄果皮花色素苷的積累。浙江省農(nóng)科院吳江研究團(tuán)隊(duì)采用設(shè)施條件與離體培養(yǎng)相結(jié)合的方法研究歐亞種葡萄紅地球果實(shí)花色素積累與糖的關(guān)系時(shí)發(fā)現(xiàn)，鼠李糖能夠顯著促進(jìn)芍藥色素糖苷含量增加，而蔗糖則起抑制作用。半定量RT-PCR分析顯示，葡萄糖類黃酮轉(zhuǎn)移酶RGufgt基因（GenBank：DQ513314）在葡萄幼葉中表達(dá)，在綠果時(shí)不表達(dá)，直到果實(shí)轉(zhuǎn)熟著色后再開始表達(dá)，這個(gè)過程一直持續(xù)至果實(shí)成熟，這與花色素苷積累的過程完全一致[59]。當(dāng)然，糖的調(diào)控作用不僅是簡單的代謝或者滲透壓調(diào)節(jié)，ABA、JA、乙烯等植物生長促進(jìn)激素信號與糖信號可能存在潛在的聯(lián)系[6， 60]。

2.5 激素

植物激素對果實(shí)花色素苷方面的研究報(bào)道較多，它往往通過影響植物體內(nèi)的代謝過程和基因表達(dá)來影響花色素苷的合成和積累。早在上世紀(jì)80年代，就有報(bào)道稱ABA能提高葡萄皮中花色素苷的含量，進(jìn)而改變葡萄的著色[61]。進(jìn)一步的研究顯示，ABA能影響花色素合成結(jié)構(gòu)基因CHS、CHI、DFR、UFGT等及調(diào)節(jié)因子VvMYBPA1的表達(dá)[62]，并且在栽培過程中直接噴灑ABA可促進(jìn)葡萄著色而對質(zhì)量和產(chǎn)量無任何負(fù)作用[63]。乙烯也可加快葡萄果皮的著色進(jìn)程。El-Kereamy等[64]研究發(fā)現(xiàn)，乙烯利處理葡萄果實(shí)后可刺激CHS、F3’H、ANS、UFGT等花青素合成結(jié)構(gòu)基因的長時(shí)間表達(dá)，從而加快葡萄果皮的著色速度。在葡萄懸浮細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，茉莉酸可促進(jìn)花色素苷合成相關(guān)結(jié)構(gòu)基因CHS和UFGT等的表達(dá)[65]；水楊酸能誘導(dǎo)葡萄果實(shí)中PAL酶，從而間接刺激花色素苷的合成[66]。此外，有關(guān)實(shí)驗(yàn)還證實(shí)，2，4-D和NAA可抑制花色素苷合成相關(guān)基因CHS、F3’H、ANS、UFGT及調(diào)節(jié)因子VvMYBPA1的表達(dá)[36， 62]。

由此看出，不同環(huán)境因子可影響葡萄花青素生物合成中相關(guān)編碼基因的表達(dá)，從而影響葡萄果皮花色素苷的合成與積累。

3 展望

綜上所述，人們已對葡萄果皮花色素苷合成的調(diào)控機(jī)理做了較為深入的科學(xué)研究，并且克隆、鑒定出許多相關(guān)的結(jié)構(gòu)和調(diào)節(jié)基因。但仍有很多問題等待我們做進(jìn)一步的研究與探討，如轉(zhuǎn)錄因子如何實(shí)現(xiàn)相互協(xié)調(diào)和作用；轉(zhuǎn)錄復(fù)合物如何實(shí)現(xiàn)對不同結(jié)構(gòu)基因的調(diào)控；各種環(huán)境因子對花色素苷代謝的綜合影響機(jī)制還未完全揭示；其他類黃酮物質(zhì)如單寧酸、異黃酮、原花青素等的合成是否影響葡萄花色素苷合成等；另外，葡萄花色素苷合成后如何修飾、轉(zhuǎn)運(yùn)也有待于進(jìn)一步研究。隨著葡萄基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、代謝組學(xué)和表型組學(xué)的不斷發(fā)展[67-69]，進(jìn)一步闡明葡萄花色素苷合成與調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，對于豐富葡萄分子生物學(xué)、分子遺傳學(xué)研究及開展葡萄花色素苷的分子育種與葡萄優(yōu)質(zhì)早熟栽培具有重要理論和實(shí)際意義。

參考文獻(xiàn)

[1]Martin C， Gerats T. Control of pigment biosynthesis genes during petal development. Plant Cell， 1993，（5）：1253-64.

[2]郭鳳丹，王效忠，劉學(xué)英，等.植物花青素生物代謝調(diào)控[J].生命科學(xué)，2011，（23）：938-44.

[3]王海波，王孝娣，王寶亮，等.中國設(shè)施葡萄產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀及發(fā)展對策[J].中外葡萄與葡萄酒，2009（9）：61-5.

[4]賀普超.葡萄學(xué)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，1999：8.

[5]Zohary D，Spiegel-Roy P. Beginnings of fruit growing in the old world. Science， 1975（187）：319.

[6]He F， Mu L， Yan GL， et al. Biosynthesis of anthocyanins and their regulation in colored grapes. Molecules， 2010，（15）：9057.

[7]Dai Z W， Ollat N， Gomès E， et al. Ecophysiological， genetic， and molecular causes of variation in grape berry weight and composition： A Review. Am J Enol Vitic， 2011（62）：413.

[8]唐杏姣，戴思蘭.光調(diào)控花色素苷合成及呈色的機(jī)理[J].分子植物育種（網(wǎng)絡(luò)版）， 2011，（9）：1284.

[9]Goto-Yamamoto N， Wan G H， Masaki K， Kobayashi S. Structure and transcription of three chalcone synthase genes of grapevine （Vitis vinifera）[J].Plant Sci，2002（162）：867.

[10]Boss P K， Davies C， Robinson S P. Anthocyanin composition and anthocyanin pathway gene expression in grapevine sports differing in berry skin colour[J].Aust J Grape Wine Res， 1996（2）：163-170.

[11]Tian L， Kong W F， Pan Q H， et al. Expression of the chalcone synthase gene from grape and preparation of an anti-CHS antibody. Protein Express Purif，[J].2006（50）：223.

[12]Bogs J， Ebadi A， McDavid D， et al. Identification of the flavonoid hydroxylases from grapevine and their regulation during fruit development. Plant[J].Physiol， 2006（140）：279-91.

[13]Mazza G. Anthocyanins in grapes and grape products.[J].Crit Rev Food Sci Nutr，1995（35）： 341-71.

[14]Petit P， Granier T， d’Estaintot BL， et al. Crystal structure of grape dihydroflavonol 4-reductase， a key enzyme inflavonoid biosyn thesis[J].J Mol Biol， 2007（368）：1345-57.

[15]Gollop R， Even S， Colova-Tsolova V， et al. Expression of the grape dihydroflavonol reductase gene and analysis of its promoter region[J].J Exp Bot， 2002（53）： 1397.

[16]Kobayashi S， Ishimaru M， Ding CK， et al. Comparison of UDPglucose： flavonoid 3-O-glucosyltransferase （UFGT） gene sequences between white grapes （Vitis vinifera） and their sports with red skin[J].Plant Sci， 2001 （160）：543.

[17]Wang KL， Bolitho K， Grafton K， et al. An R2R3-MYB transcription factor associated with regulation of the anthocyanin biosynthetic pathway in Rosaceae[J].BMC Plant Biol， 2010（10）：50.

[18]Ali MB， Howard S， Chen S， et al. Berry skin development in Norton grape： Distinct patterns of transcriptional regulation and flavonoid biosynthesis[J].BMC Plant Biol，2011（11）：7.

[19]Bogs J， Jaffé FW， Takos AM， et al. The grapevine transcription factor VvMYBPA1 regulates proanthocyanidin synthesis during fruit development[J].Plant Physiol， 2007（143）：1347.

[20]Cutanda-Perez MC， Ageorges A， Gomez C， et al. Ectopic expression of VlmybA1 in grapevine activates a narrow set of genes involved in anthocyanin synthesis and transport[J].Plant Mol Biol， 2009（69）：633.

[21]Deluc L， Bogs J， Walker AR， et al. The transcripti on factor VvMYB5b contributes to the regulation of anthocyanin and proanthocyanidin biosynthesis in developing grape berries[J].Plant Physiol， 2008（147）：2041.

[22]Fournier-Level A， Lacombe T， Le Cunff L， et al. Evolution of the VvMybA gene family， the major determinant of berry colour in cultivated grapevine （Vitis vinifera L.）[J].Heredity， 2010（104）：351.

[23]Koshita Y， Kobayashi S， Ishimaru M， et al. An anthocyanin regulator from grapes， VlmybA1-2， Produces reddish-purple plants[J].J Jpn Soc Hort Sci， 2008，（77）：33.

[24]Terrier N， Torregrosa L， Ageorges A， et al. Ectopic expression of VvMybPA2 promotes proanthocyanidin biosynthesis in grapevine and suggests additional targets in the pathway[J].Plant Physiol， 2009（149）：1028.

[25]Kobayashi S， Ishimaru M， Hiraoka K， et al. Myb-related genes of the Kyoho grape （Vitis labruscana） regulate anthocyanin biosynthesis[J].Planta， 2002（215）： 924.

[26]慕茜，吳偉民，房經(jīng)貴，等.不同葡萄品種的VvmybA1基因型及其特征DNA片段的序列分析[J].園藝學(xué)報(bào)，2011（38）：2075.

[27]This P， Lacombe T， Cadle-Davidson M， et al. Wine grape （Vitis vinifera L.） color associates with allelic variation in the domestication gene VvmybA1[J].Theor Appl Genet， 2007（114）：723.

[28]Ludwig SR， Habera LF， Dellapona SL， et al. lc， a member of the maize R gene family responsible for tissue-specific anthocyanin production， encodes a protein similar to transcriptional activators and contains the myc-homology region[J].Proc Natl Acad Sci USA， 1989（86）：7092.

[29]Hichri I， Heppel SC， Pillet J， et al. The basic helix-loop-helix transcription factor MYC1 is involved in the regulation of the flavonoid biosynthesis pathway in grapevine[J].Mol Plant， 2010（3）：509.

[30]Carey CC， Strahle JT， Selinger DA， et al. Mutations in the pale aleurone color1 regulatory gene of the Zea mays anthocyanin pathway have distinct phenotypes relative to the functionally similar TRANSPARENY TESTA GLABRAL gene in Arabidopsis thaliana[J].Plant Cell， 2004（16）： 450.

[31]Pang YZ， Wenger JP， Saathoff K， et al. A WD40 repeat protein from medicago truncatula is necessary for tissuespecific anthocyanin and proanthocyanidin biosynthesis but not for trichome development[J].Plant Physiol， 2009（151）：1114.

[32]胡可，韓科廳， 戴思蘭.環(huán)境因子調(diào)控植物花色素苷合成及呈色的機(jī)理[J].植物學(xué)報(bào)，2010（45）：307.

[33]Schultz HR， Stoll M. Some critical issues in environmental physiology of grapevines： future challenges and current limitations[J].Aust J Grape Wine Res， 2010（16）：4.

[34]孫建設(shè)，馬寶琨，章文才.富士蘋果果皮色澤形成的需光性研究[J].園藝學(xué)報(bào)， 2000（27）：213.

[35]Natalia PV， Inna SD， Krendeleva TE. Effect of light quality on the organization of photosynthetic electron transport chain of pea seedlings[J].Plant Physiol， 1977（59）：151.

[36]Jeong ST， Goto-Yamamoto N， Kobayashi S， et al. Effects of plant hormones and shading on the accumulation of anthocyanins and the expression of anthocyanin biosynthetic genes in grape berry skins[J].Plant Sci， 2004（167）：247.

[37]Chorti E， Guidoni S， Ferrandino A， et al. Effect of different cluster sunlight exposure levels on ripening and anthocyanin accumulation in Nebbiolo grapes[J].Amer J Enol Viticult， 2010（61）：23.

[38]Kataoka I， Sugiyama A， Beppu K. Role of ultraviolet radiation in accumulation of anthocyanin in berries of ‘Gros Colman’ grapes （Vitis vinifera L.）[J].J Jpn Soc Hort Sci， 2003（72）：1-6.

[39]雷鳴.植物生長調(diào)節(jié)劑、糖、光質(zhì)對紅地球葡萄果實(shí)品質(zhì)的影響[D].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文.合肥：2008：25-33.

[40]Christie P， Alfenito M， Walbot V. Impact of low-temperature stress on general phenylpropaniod and anthocyanin pathways： enhancement of transcript abundance and anthocyanin pigmentation in maize seedlings[J].Planta， 2004（194）： 541.

[41]Leyva A， Jarillo JA， Salinas J， et al. Low temperature induces the accumulation of phenylalanine ammonia-lyase and chalcone synthase mRNAs of Arabidopsis thaliana in a light-dependent manner[J].Plant Physiol， 1995（108）：39-46.

[42]Shvarts M， Borochov A， Weiss D. Low temperature enhances petunia flower pigmentation and induces chalcone synthase gene expression[J].Physiol Plant，1997（99）：67-72.

[43]Mori K， Sugaya S， Gemma H. Decreased anthocyanin biosynthesis in grape berries grown under elevated night temperature condition[J].Sci Hort， 2005（105）：319.

[44]Yamane T， Seok TJ， Goto-Yamamoto N， et al. Effects of temperature on anthocyanin biosynthesis in grape berry skins[J].Amer J Enol Viticult， 2006（57）：54.

[45]Mori K， Goto-Yamamoto N， Kitayama M， et al. Loss of anthocyanins in red-wine grape under high temperature[J].J Exp Bot， 2007（58）：1935.