含黃芪制劑中黃芪甲苷的含量測(cè)定

摘 要：該文旨在建立某黃芪制劑中黃芪甲苷的高效液相色譜法測(cè)定含量。所采用方法：采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）以黃芪甲苷為對(duì)照品對(duì)黃芪中黃芪甲苷進(jìn)行HPLC-分析，色譜柱為C18柱，甲醇-水（75∶25）為流動(dòng)相，流速1.0 mL/min，柱溫40 ℃；漂移管溫度83.8 ℃，載氣（空氣）流速2.0 L/min。結(jié)果：所建立的含量測(cè)定方法結(jié)果準(zhǔn)確，便捷，專屬性強(qiáng)，無(wú)干擾，可用于控制該制劑的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：黃芪甲苷 HPLC-ELSD 含量測(cè)定 含黃芪制劑

中圖分類號(hào)：R284 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-098X（2015）01（b）-0036-02

中藥黃芪含有黃芪甲苷、黃芪多糖等多種成份，其中黃芪甲苷為主要活性成分，具有降壓、保護(hù)心肌、減輕心肌缺血和增強(qiáng)免疫力等作用[1-2]。該研究建立某黃芪制劑（六類新藥，研發(fā)中。主要含黃芪、砂仁等）中黃芪甲苷的含量測(cè)定方法，為該制劑的質(zhì)量控制提供方案。

1 儀器、試藥與樣品

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜議；Alltech2000蒸發(fā)光散射檢測(cè)器； AB250D十萬(wàn)分之一電子天平。

1.2 試藥

黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純和分析純；其余所用試劑均為分析純；黃芪等藥材購(gòu)自廣州致信藥業(yè)有限公司。

1.3 樣品的制備

按制劑處方稱取黃芪30 g和其他藥材。將除黃芪外的其他藥材置圓底燒瓶中，加12倍量水，接揮發(fā)油提取器，提取1 h，所得揮發(fā)油棄去，水提液過(guò)濾，保留待用；藥渣加入黃芪，加8倍量水，加熱回流提取1 h，所得水提液過(guò)濾，保留待用；再加6倍量水，加熱回流提取0.5 h，水提液過(guò)濾，與前兩次水提液合并，濃縮至每毫升藥液中含藥材1 g，攪拌加入95%的乙醇至含醇量為60%，放置過(guò)夜，抽濾取濾液，即樣品液。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取干燥至恒重的黃芪甲苷對(duì)照品15 mg置100 mL量瓶中，加甲醇適量使溶解，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述溶液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得（每1 mL中含黃芪甲苷30 μg）。

2.1.2 供試品溶液的制備

精密稱取樣品液3 g，置蒸發(fā)皿中水浴上蒸干，加水20 mL使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20 mL，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次10 mL，取正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次10 mL，取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液的制備

用缺黃芪藥材的處方按1.3項(xiàng)的方法制得陰性樣品。精密稱取陰性樣品液3 g，按2.1.2項(xiàng)的方法制備，即得。

2.2 色譜條件的選擇

色譜柱DiscoverC18柱（25 cm×4.6 mm， 5 μm），流動(dòng)相甲醇-水（75：25），流速1.0 mL/min，柱溫40℃；ELSD：漂移管溫度83.8℃，載氣（空氣）流速2.0 L/min，撞擊器關(guān)閉。在上述色譜條件下，黃芪甲苷的保留時(shí)間合適，大約在8.7 min且峰形較好（圖1）；在與對(duì)照品對(duì)應(yīng)的位置上，供試品溶液中也有一色譜峰，且前后沒(méi)有其它組分干擾，達(dá)到基線分離（圖2）；而陰性對(duì)照溶液在該位置上沒(méi)有色譜峰（圖3）。

2.3 線性關(guān)系考察

用對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣10，20，30，40，50 μl，按上述色譜條件測(cè)定，以峰面積的常用對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)樣量的常用對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=1.5341X+7.3418；r=0.9994。表明黃芪甲苷在0.3～1.5 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度試驗(yàn)

重復(fù)進(jìn)樣對(duì)照品溶液5次，每次25 μl，分別測(cè)定峰面積，按上述回歸方程計(jì)算出進(jìn)樣量，結(jié)果RSD=2.00%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液25 μl，每隔4 h進(jìn)樣一次，8 h內(nèi)共測(cè)定3次，分別測(cè)定峰面積，按上述回歸方程計(jì)算出進(jìn)樣量，RSD=1.28%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取樣品液，平行取樣6份，制成供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算黃芪甲苷的含量，結(jié)果平均含量為0.0034%，RSD=4.23%。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已測(cè)知含量的樣品液6份，分別精密加入一定量的黃芪甲苷，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均加樣回收率為99.47%，RSD=3.46%（表1）。

3 討論

ELSD是高效液相色譜儀新一代通用型質(zhì)量檢測(cè)器，其檢測(cè)樣品組分應(yīng)是非揮發(fā)性的而流動(dòng)相應(yīng)是易揮發(fā)的溶劑，其中載氣流速和漂移管溫度是該檢測(cè)器的2個(gè)重要的可調(diào)參數(shù)，流速過(guò)高或過(guò)低會(huì)直接影響信噪比，從而影響峰面積和保留時(shí)間，而溫度過(guò)高或過(guò)低會(huì)直接影響溶劑的揮發(fā)程度，以致影響基線的穩(wěn)定性，因此，在試驗(yàn)中應(yīng)反復(fù)認(rèn)真進(jìn)行調(diào)試，本實(shí)驗(yàn)經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)與觀察，確定載氣流速為2.0 mL/min，漂移管溫度為83.8℃。所確立的方法可準(zhǔn)確測(cè)定該制劑中黃芪甲苷的含量。

參考文獻(xiàn)

[1]南京中醫(yī)藥大學(xué).中藥大辭典[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2006： 2813.

[2]孔祥瑞.中華醫(yī)學(xué)微量元素研究進(jìn)展[M].烏魯木齊：新疆科技衛(wèi)生出版社，1996：42-44.

[3]溫燕梅.黃芪的化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].中成藥，2010，28（6）：879-883.

[4]馬曉豐，田曉明，陳英杰，等.蒙古黃芪中黃酮類成分的研究[J].中草藥，2005，36（9）：1293-1296.