冬棗黃酮的提取及其抗氧化作用探討

摘 要：本文在對(duì)冬棗黃酮進(jìn)行提取的過(guò)程中，應(yīng)用的主要方法是超聲波提取法，試驗(yàn)以正交試及單因素為主，在對(duì)冬棗黃酮提取過(guò)程中的材料、方法及結(jié)果進(jìn)行詳細(xì)探討的基礎(chǔ)上，對(duì)LD50和S180荷瘤小鼠的測(cè)定及抗氧化展開(kāi)了研究。

關(guān)鍵詞：冬棗黃酮；提??；抗氧化

DOI：10.16640/j.cnki.37-1222/t.2015.22.029

0 前言

在科學(xué)技術(shù)不斷進(jìn)步的背景下，我國(guó)農(nóng)業(yè)技術(shù)也取得了一定成績(jī)，近年來(lái)，多種鮮食果品新品種得到開(kāi)發(fā)，冬棗就是其中的一種，它具有晚熟的特性，山東及河北等地是其主要生長(zhǎng)基地。在進(jìn)一步對(duì)其進(jìn)行研究的過(guò)程中人們發(fā)現(xiàn)，冬棗具有較高的營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)該果品當(dāng)中還擁有大量的黃酮，這一物質(zhì)對(duì)于細(xì)菌、疾病的預(yù)防以及植物生長(zhǎng)過(guò)程中開(kāi)花和結(jié)果都發(fā)揮著非常重要的功能。在這種情況下加強(qiáng)對(duì)冬棗黃酮的提取及其抗氧化作用的探討具有重要意義。

1 冬棗黃酮的提取

在將黃酮從冬棗中進(jìn)行提取的過(guò)程中，主要實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑闇y(cè)定其抗氧化活性。提取工藝的研究以正交實(shí)驗(yàn)法為主進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)最佳提取時(shí)機(jī)進(jìn)行確立，從而為開(kāi)展更深入的冬棗成分提取打下良好的基礎(chǔ)。

（1）具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。在對(duì)冬棗中黃酮進(jìn)行提取之前，首先將其進(jìn)行冷凍，實(shí)驗(yàn)中所需不同試劑都是分析純?cè)噭?，如乙醇、三氯化鐵和三氯乙酸等；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所需的儀器包括超聲波清洗機(jī)、粉碎機(jī)、SK-1快速混均器和真空干燥箱 DZF6050等[1]。

實(shí)驗(yàn)具體步驟如下：溫室中將冷凍過(guò)的鮮棗進(jìn)行解凍處理，在絞碎鮮棗的過(guò)程中要充分運(yùn)用粉碎機(jī)，提取過(guò)程中應(yīng)用多種溶劑，并對(duì)其進(jìn)行離心過(guò)濾。在對(duì)提取效果進(jìn)行評(píng)定的過(guò)程中應(yīng)以不同的抗氧化活性為基礎(chǔ)。

在測(cè)定其抗氧化活性的過(guò)程中，應(yīng)用鐵氰化鉀，該活性標(biāo)準(zhǔn)缺陷的制定以蘆丁為基礎(chǔ)。具體步驟如下：取磷酸緩沖溶液2.5毫升，它擁有6.6的pH值，取不同濃度蘆丁溶液，將磷酸緩沖溶液分別滴入其中，并加入1毫升濃度為百分之一的鐵氰化鉀，均勻攪拌過(guò)后，在五十?dāng)z氏度的基礎(chǔ)上持續(xù)加熱二十分鐘。并進(jìn)行快速冷卻，接下來(lái)將2.5毫升、濃度為百分之十的三氯乙酸加入其中，并在十分鐘內(nèi)進(jìn)行3500轉(zhuǎn)離心分離。接下來(lái)將產(chǎn)生的的溶液取出2.5毫升在加入FeCl3過(guò)后對(duì)其進(jìn)行均勻攪拌，帶溶液徹底靜止后對(duì)其吸光度進(jìn)行測(cè)試。吸光度值越小代表抗氧化性越弱。

在進(jìn)行超聲波提取試驗(yàn)的過(guò)程中，首先科學(xué)設(shè)計(jì)試驗(yàn)方案，具體步驟如下：在具塞試管中滴入五十毫升冬棗漿，將其置入超聲波清洗劑當(dāng)中，十五分鐘離心處理之后對(duì)產(chǎn)生的溶液進(jìn)行抗氧化活性測(cè)定。單因素實(shí)驗(yàn)應(yīng)最先開(kāi)展，在此基礎(chǔ)上正交試驗(yàn)為L(zhǎng)9（34），這樣一來(lái)能夠?qū)r(shí)間、比例及濃度進(jìn)行科學(xué)的選擇，促使冬棗黃酮提取過(guò)程中最佳工藝參數(shù)得以產(chǎn)生。

（2）實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。在測(cè)定總抗氧化活性的過(guò)程中，橫坐標(biāo)應(yīng)用蘆丁這一基礎(chǔ)，縱坐標(biāo)為吸光值。確定濃度不同的溶液吸光值選擇的點(diǎn)為700nm，這樣一來(lái)就能夠得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，并確定回歸方程：y=0.0038x-0.0069和r=0.9995。

接下來(lái)就是確定超聲波提取法最佳工藝參數(shù)，此時(shí)需要對(duì)乙醇相關(guān)提取工藝進(jìn)行深入考察，在單因素實(shí)驗(yàn)背景下，正交實(shí)驗(yàn)同樣應(yīng)用L9（34），這樣就能夠得到溫度、濃度、比例等限制提取效果的相關(guān)因素。經(jīng)對(duì)比可知，相關(guān)因素當(dāng)中，影響最大的是時(shí)間，影響最小的是乙醇溶液的濃度[2]。

在進(jìn)行冬棗黃酮提取的過(guò)程中應(yīng)用超聲波提取具有以下優(yōu)點(diǎn)，即簡(jiǎn)單的操作、時(shí)間短和高效率等?，F(xiàn)階段這種方法被廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留分析實(shí)驗(yàn)當(dāng)中。提取過(guò)程中包含多種方式，而“空化”作用是應(yīng)用超聲波提取的最主要原因，同時(shí)，值得注意的是在對(duì)熱不穩(wěn)定的植物進(jìn)行提取的過(guò)程中應(yīng)用超聲波是非常有效的，這是因?yàn)檫@種方法不需要進(jìn)行加熱。

2 LD50和S180荷瘤小鼠的測(cè)定及抗氧化作用研究

通常狀況下，氧化與抗氧化在機(jī)體當(dāng)中通常能夠保持一種動(dòng)態(tài)的平衡，一旦不同原因?qū)е聶C(jī)體出現(xiàn)較高的自由基水平，將使抗氧化能力大大減弱，從而導(dǎo)致一系列嚴(yán)重疾病，如癌癥和衰老迅速等。對(duì)于這些疾病的預(yù)防就要從抗氧化損傷入手，而冬棗中含有的黃銅就具有較高的抗氧化損傷功能，在這種情況下，加強(qiáng)對(duì)其抗氧化作用的研究具有重要意義。以下針對(duì)冬棗黃酮對(duì)LD50和S180荷瘤小鼠的抗氧化作用進(jìn)行了詳細(xì)的研究。

（1）半數(shù)致死量（LD50）的測(cè)定。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)用昆明種小鼠十六只，雌雄各八只，將其進(jìn)行隨機(jī)分配成四組。在不限制飲水的狀況下，分別將不同劑量的冬棗黃酮提取物灌入其胃中，并詳細(xì)記錄其產(chǎn)生的不同癥狀及死亡特征。如果未發(fā)現(xiàn)死亡或中毒癥狀，則應(yīng)逐漸加大劑量重新實(shí)驗(yàn)。經(jīng)過(guò)仔細(xì)觀察，死亡和中毒現(xiàn)象都沒(méi)有發(fā)生，當(dāng)該劑量達(dá)到五千毫克每千克時(shí)同樣安全，這說(shuō)明該液體屬于五毒級(jí)。

（2）對(duì)S180荷瘤小鼠的抗氧化作用研究。應(yīng)用昆明種小鼠五十只，確定其健康程度，將其進(jìn)行普通水適應(yīng)性喂養(yǎng)七天之后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。將環(huán)磷酞胺液體注射入實(shí)驗(yàn)物體內(nèi)，將五十只小鼠分為五組，分別進(jìn)行腫瘤對(duì)照、EED和CY對(duì)照等。將其中一組放置于無(wú)菌空間中，對(duì)接種了7d的S180荷瘤小鼠的腹水進(jìn)行抽取，運(yùn)用顯微鏡進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)其中擁有百分之九十五的活細(xì)胞，運(yùn)用生理鹽水對(duì)其進(jìn)行稀釋?zhuān)⒃趯?shí)驗(yàn)物皮下進(jìn)行注射，每只注射0.2毫升。

接種過(guò)后二十四小時(shí)，對(duì)于不同分組的小鼠進(jìn)行不同程度的干預(yù)，例如，對(duì)于CY組，每日應(yīng)用二十毫克每千克的環(huán)磷酞胺進(jìn)行灌胃，以后每隔一天進(jìn)行一次腹腔注射。

經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)物的一般狀態(tài)進(jìn)行了掌握，通常狀況下，小鼠的生存質(zhì)量都保持良好，同時(shí)擁有良好的活動(dòng)情況及精神狀態(tài)，對(duì)其皮毛進(jìn)行觀察的過(guò)程中可以發(fā)現(xiàn)，其始終保持光潔，體內(nèi)腫瘤的生長(zhǎng)速度也能夠得到有效控制。由此可以看出，冬棗黃酮對(duì)于抑制腫瘤和細(xì)菌具有重要作用。

3 結(jié)論

本文通過(guò)運(yùn)用超聲波提取法，有效確定了冬棗黃酮提取的最佳工藝條件，并在昆明小鼠實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上對(duì)黃酮的抗氧化作用及抑制細(xì)菌生長(zhǎng)功能進(jìn)行了詳細(xì)的分析。實(shí)驗(yàn)表明，現(xiàn)階段在科學(xué)技術(shù)不斷進(jìn)步的背景下，我國(guó)應(yīng)積極加強(qiáng)對(duì)冬棗這一新果品的種植，并對(duì)其中的黃銅進(jìn)行大量提取，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)研究，逐漸提高其抗氧化功能，為人類(lèi)醫(yī)學(xué)等方面的進(jìn)步做貢獻(xiàn)。

參考文獻(xiàn)：

[1]胡迎芬.冬棗黃酮的提取分離及抗氧化、抑瘤活性研究[D].青島大學(xué)，2009.