淡竹葉黃酮對(duì)大鼠心肌缺血-再灌注損傷作用研究

汪新亮

(湖北科技學(xué)院 藥學(xué)院，湖北 咸寧 437100)

?

淡竹葉黃酮對(duì)大鼠心肌缺血-再灌注損傷作用研究

汪新亮

(湖北科技學(xué)院 藥學(xué)院，湖北 咸寧 437100)

目的：探討淡竹葉黃酮對(duì)大鼠心肌缺血-再灌注損傷模型的機(jī)制作用。方法：將30只SD級(jí)大鼠隨機(jī)分為竹葉黃酮組、假手術(shù)組及缺血再灌注組，各10只；竹葉黃酮組小鼠注射淡竹葉黃酮，缺血再灌注組及假手術(shù)組小鼠注射等分量生理鹽水，連續(xù)1周，末次冠脈結(jié)扎手術(shù)前2h給予SD大鼠腹腔注射給藥，左冠狀動(dòng)脈前降支中上1/3處作為SD大鼠結(jié)扎部位，結(jié)扎手術(shù)完成后1h剪開結(jié)扎線，用止血鉗將大鼠胸腔夾閉，再灌注2h。檢測所有小鼠CK水平和血清LDH，采用TTC染色法對(duì)心肌梗死面積進(jìn)行測定，檢測心肌組織中MDA(丙二醛)、SOD(超氧化物歧化酶)的含量。結(jié)果：與缺血再灌注組和假手術(shù)組比較，淡竹葉黃酮組小鼠的SOD超氧化物歧化酶活性明顯增強(qiáng)，心肌梗死面積顯著減小，SD大鼠丙二醛及血清LDH和CK含量明顯下降。結(jié)論：淡竹葉黃酮對(duì)大鼠心肌缺血-再灌注損傷有一定保護(hù)作用，其機(jī)制可能與增強(qiáng)心肌抗氧化能力及穩(wěn)定心肌細(xì)胞定位和增加超氧化物歧化酶活性有關(guān)。

淡竹葉黃酮；心肌缺血-再灌注損傷；作用；機(jī)制

隨著我國科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，臨床醫(yī)療水平不斷提升，冠狀動(dòng)脈再通術(shù)的先進(jìn)醫(yī)學(xué)療法在臨床中應(yīng)用逐漸成熟，如冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)、冠狀動(dòng)脈介入術(shù)及藥物溶栓術(shù)等，能對(duì)缺血受損心肌進(jìn)行及時(shí)再通，大大降低現(xiàn)階段急性心血管不良事件的病死率及致殘率，為急性心血管疾病患者帶來新的曙光。早期再灌注治療缺血心肌疾病能夠?qū)⒐Ｋ烂娣e降至最小，還能夠令缺血心肌再次恢復(fù)生機(jī)，在實(shí)際治療過程中，冠狀動(dòng)脈閉塞一定時(shí)間再進(jìn)行灌注會(huì)給患者心肌細(xì)胞造成一定損傷，心肌梗死后4h對(duì)血管進(jìn)行再通難以收獲到預(yù)期的效果，還加快心肌細(xì)胞的死亡速率。目前，隨著心細(xì)血管分子生物學(xué)研究的深入，已逐步證實(shí)心肌細(xì)胞凋亡與心肌缺血再灌注有著密切關(guān)系，細(xì)胞凋亡現(xiàn)象存在于缺血再灌注損傷過程，進(jìn)而導(dǎo)致不可逆轉(zhuǎn)性細(xì)胞凋亡速度加快，且缺血再灌注損傷的持續(xù)時(shí)間長短直接影響心肌細(xì)胞凋亡數(shù)量。冠狀動(dòng)脈再通嚴(yán)重并發(fā)癥為心肌缺血再灌注損傷，在心肌缺血再灌注過程中易導(dǎo)致再灌注性心律失常、冠狀動(dòng)脈無復(fù)流及心肌頓抑和心肌細(xì)胞死亡等形式的心肌損傷性改變[1]。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 SD大鼠50只(除試驗(yàn)用30只，20只備用)，雄性，體重285～355g，由相關(guān)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2 試劑與藥品 TTC(氯化三苯基四氮唑)；含90.3%的淡竹葉黃酮，采用生理鹽水進(jìn)行稀釋；超氧化物歧化酶活性(SOD)試劑盒，丙二醛(MDA)試劑盒，血清LDH測試盒，CK測試盒，考馬斯亮蘭蛋白試劑盒。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 選取標(biāo)準(zhǔn) SD大鼠基本健康條件符合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)且得到科學(xué)證實(shí)，對(duì)研究SD大鼠進(jìn)行相關(guān)傳染疾病測試；大鼠精神狀態(tài)良好，具有足夠活動(dòng)能力，能正常進(jìn)食，且大鼠生命強(qiáng)弱程度及其他標(biāo)準(zhǔn)具有統(tǒng)一性[2]。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 基本健康條件不符合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，具有微型或中型甚至重型傳染疾病，體重較其他SD大鼠超重，生命跡象微弱。

1.3 操作方法

1.3.1 分組 將30只SD級(jí)大鼠隨機(jī)分為竹葉黃酮組、假手術(shù)組及缺血再灌注組，各10只。竹葉黃酮組SD大鼠注射30mg·kg-1·d-1的淡竹葉黃酮，缺血再灌注組及假手術(shù)組SD大鼠注射30mg·kg-1·d-1的生理鹽水，連續(xù)1周。在末次冠脈結(jié)扎手術(shù)前2h給予SD大鼠腹腔注射給藥。

1.3.2 制備大鼠心肌梗死模型 對(duì)SD大鼠腹腔注射10%的水合氨醛麻醉劑(0.3mL/100g)，在無菌條件下切開氣管且插管，采用專用動(dòng)物呼吸機(jī)對(duì)其進(jìn)行呼吸，維持頻率60次/min，潮氣量3mL。

1.3.3 結(jié)扎 對(duì)大鼠胸部去毛且消毒，在左冠狀動(dòng)脈前降支中上1/3處作為SD大鼠結(jié)扎部位，切開皮膚2cm，在第四第五助鈍性分離肌層，將胸腔打開，剪開SD大鼠心包，輕壓右側(cè)胸腔，將心臟擠出，在預(yù)定位置進(jìn)行結(jié)扎，若左心室出現(xiàn)室壁變白現(xiàn)象，則說明結(jié)扎成功[3]。

1.3.4 術(shù)后處理 結(jié)扎手術(shù)完成后1h剪開結(jié)扎線，用止血鉗將大鼠胸腔夾閉，再灌注2h，檢測CK水平和血清LDH，采用TTC染色法對(duì)心肌梗死面積進(jìn)行測定，檢測心肌組織中MDA(丙二醛)、SOD(超氧化物歧化酶)的含量。

2 結(jié)果

測試數(shù)據(jù)顯示：與缺血再灌注組和假手術(shù)組比較，淡竹葉黃酮組小鼠的SOD超氧化物歧化酶活性明顯增高，SD大鼠丙二醛及血清LDH和CK含量明顯下降[4]。見圖1。

圖1 各組小鼠生化指標(biāo)比較

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：淡竹葉黃酮對(duì)大鼠心肌缺血-再灌注損傷有一定保護(hù)作用，其機(jī)制可能與增強(qiáng)心肌抗氧化能力及穩(wěn)定心肌細(xì)胞定位和增加超氧化物歧化酶活性有關(guān)。因此，實(shí)驗(yàn)明確淡竹葉黃酮對(duì)抑制心肌缺血再灌注損傷細(xì)胞凋亡的作用機(jī)理，為預(yù)防治療冠心病、改善再灌注損傷心肌功能提供相應(yīng)具體數(shù)據(jù)，在一定程度上有助于降低臨床死亡率及致殘率，進(jìn)而提高患者的生活質(zhì)量，但具體淡竹葉黃酮對(duì)人體心肌血管疾病的作用機(jī)制，還需臨床進(jìn)一步研究。

[1] 邵瑩,吳啟南,周婧,等.淡竹葉黃酮對(duì)大鼠心肌缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2013(2):241-247.

[2] 王健.冠心舒通膠囊對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷細(xì)胞凋亡影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué),2013(1):201-206.

[3] 楊明,朱姝,隋殿軍,等.蜂膠總黃酮對(duì)大鼠心肌缺血-再灌注損傷誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2011(5):551-554.

[4] 李慶林,王成永,彭代銀,等.黃蜀葵花總黃酮對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012(2):39-42.

(責(zé)任編輯：李嵐春)

2014-11-26

汪新亮(1976-)，男，湖北科技學(xué)院講師，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)。

R285.5

A

1673-2197(2015)06-0029-02

10.11954/ytctyy.201506012