HPLC法同時測定桂枝配方顆粒中肉桂酸和桂皮醛的含量

劉丹萍，趙惠玲，劉海燕， 李耀華 ，唐 軍，韋相忠

(廣西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,廣西 南寧 530200)

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HPLC法同時測定桂枝配方顆粒中肉桂酸和桂皮醛的含量

劉丹萍，趙惠玲，劉海燕， 李耀華*，唐 軍，韋相忠

(廣西中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院,廣西 南寧 530200)

目的：建立高效液相色譜法(HPLC)同時測定桂枝配方顆粒中肉桂酸、桂皮醛含量的方法。方法：色譜柱為Diamonsil C18(2)柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脫;檢測波長為290nm，柱溫為25℃。結(jié)果：肉桂酸在0.032 7～0.327 0μg范圍內(nèi)與相應(yīng)的峰面積呈良好線性關(guān)系，桂皮醛在0.642 0～1.926μg范圍內(nèi)與相應(yīng)的峰面積呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為0.999 0、0.999 9；肉桂酸、桂皮醛平均回收率分別為96.21%、101.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值(RSD)分別為1.0%、1.6%。結(jié)論：該方法簡便、快捷，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可作為桂枝配方顆粒含量測定方法。

桂枝配方顆粒；肉桂酸；桂皮醛；高效液相色譜法；含量測定

桂枝為樟科肉桂(Cinnamomumcassiapresl)的干嫩枝條，具有發(fā)汗解肌、散寒止痛、溫通筋脈、助陽化氣、平?jīng)_降氣之功效[1]。臨床上多用于緩和腸胃刺激、強(qiáng)心、改善微循環(huán)、抗炎、抗血小板凝集等[2]。桂枝主要含有桂皮醛、桂皮醇、肉桂酸、甲氧基桂皮醛等活性成分[3]。中國藥典2010年版只對桂枝進(jìn)行桂皮醛含量測定[1]，同時鑒別和測定桂枝中桂皮醛和肉桂酸含量的文獻(xiàn)報道較少。近年來桂枝的研究報道只有桂皮醛的含量測定，提取工藝、薄層鑒別等研究[4-7]，目前尚無同時測定桂枝配方顆粒中肉桂酸和桂皮醛含量的報道，本研究應(yīng)用HPLC法同時測定桂枝配方顆粒中肉桂酸、桂皮醛的含量，以期為桂枝配方顆粒的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗材料

美國安捷倫公司Agilent1100型高效液相色譜儀，Agilent1100LC化學(xué)工作站，KQ5200B型超聲波儀器(昆山市超聲儀有限公司)；LG16高速微量離心機(jī)(上海安亭)；甲醇(色譜純，分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，乙醇(色譜純，分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，水為超純水，其它試劑均為分析純。肉桂酸對照品(中國食品藥品檢定研究院提供，批號：110786-200503)；桂皮醛對照品 (中國食品藥品檢定研究院，批號：110710-200212) 均為供含量測定用；桂枝配方顆粒由江陰天江藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號：1204025、1202119、1206116。

1.2 色譜條件

色譜柱：迪馬Diamonsil C18(2)柱(4.6mm×250mm，5μm)；紫外檢測波長為290nm；柱溫：25℃；進(jìn)樣體積：10μL；流動相：乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脫，見表1。

表1 流動相洗脫程序

1.3 樣品制備

取桂枝配方顆粒(批號：1204025)0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25mL，超聲提取30min，取出，放冷至室溫，用50%乙醇補(bǔ)足損失的重量，搖勻，慮過，用10 000r/min離心10min,取上清液，即得。

1.4 對照品溶液的制備

分別精密稱取肉桂酸對照品3.420mg、桂皮醛6.355mg，用甲醇溶解并定溶至10mL容量瓶中。分別配制成肉桂酸濃度為0.136 8mg/mL,桂皮醛濃度為0.214 2mg/mL的對照品溶液。

2 實(shí)驗結(jié)果

2.1 精密度實(shí)驗

分別精密吸取桂皮醛、肉桂酸對照品10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測峰面積，結(jié)果兩種對照品溶液RSD分別為1.4%、0.11%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.2 重復(fù)性試驗

取桂枝配方顆粒(批號：1204025)約0.25g，按上述樣品溶液制備方法和色譜條件，平行實(shí)驗6次，結(jié)果肉桂酸平均含量為2.943mg/g、RSD為0.98%(n=6)，桂皮醛平均含量為1.120mg/g、RSD為0.38%(n=6)，表明本方法重現(xiàn)性良好。

2.3 穩(wěn)定性試驗

取桂枝配方顆粒(批號：1204025)0.25g,按上述樣品溶液制備方法和色譜條件，分別在0、2、4、6、8、12、24h測定峰面積，結(jié)果桂皮醛、肉桂酸的RSD分別為1.4%、1.0%，表明樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 線性關(guān)系考察

分別精密稱取肉桂酸對照品0.327 0mg、桂皮醛6.420mg，用甲醇溶解并定溶至10mL容量瓶中，分別配制成濃度為肉桂酸0.032 70mg/mL,桂皮醛0.642 0mg/mL的對照品溶液。肉桂酸進(jìn)樣體積分別為1、2、4、6、8、10μL，桂皮醛進(jìn)樣體積分別為1、3、4、5、6μL，以峰面積值為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果肉桂酸標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=6 763.5X+1.871 3，r=0.999 0(n=5)，桂皮醛標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=11 348X+446.43，r=0.999 9(n=5)，結(jié)果表明，肉桂酸在0.032 7～ 0.327μg范圍內(nèi)與相應(yīng)的峰面積呈良好線性關(guān)系，桂皮醛在0.642～ 1.926μg范圍內(nèi)與相應(yīng)的峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.5 加樣回收率試驗

稱取桂枝配方顆粒(批號：11070166)6份各0.125g，精密稱定，精密加入肉桂酸與桂皮醛對照品溶液。按供試品溶液制備項下操作，按上述色譜條件測定含量，計算回收率，得肉桂酸平均回收率為96.21%，RSD為1.0%；桂皮醛平均回收率為101.4%，RSD為1.6%。結(jié)果見表2、表3。

表2 肉桂酸加樣回收率試驗結(jié)果

表3 桂皮醛加樣回收率試驗結(jié)果

2.6 樣品含量測定

取不同產(chǎn)地桂枝配方顆粒(批號：1204025)0.25g，精密稱定，按樣品方法制備，在上述色譜條件下，計算含量，結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 提取時間選擇

采用30min、45min、60min不同的提取時間，結(jié)果30min與45min、60min差別不大，故采用45min為提取時間。

表4 桂枝配方顆粒樣品含量測定結(jié)果

3.2 提取溶劑選擇

供試品溶液的處理過程中，曾嘗試采用50%、75%、100%不同濃度的甲醇和乙醇作為提取溶劑，50%的溶劑提取效果最好，甲醇與乙醇提取含量差別不大，從環(huán)保的方面考慮，選擇50%的乙醇作為提取溶劑。

本研究以HPLC法測定桂枝配方顆粒中肉桂酸、桂皮醛的含量，實(shí)驗方法簡便、快速、準(zhǔn)確度高，從不同批號的測定結(jié)果來看，可以作為桂枝配方顆粒中肉桂酸和桂皮醛的含量測定方法。

[1] 中華人民共和國國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] 肖培根.新編中藥志[M].第3卷.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2002:575.

[3] 劉江云，楊學(xué)東，徐麗珍，等.桂枝的化學(xué)成分研究[J].中草藥，2002,33(8)：681-683.

[4] 梁奇，吳宗彬.HPLC測定桂枝配方顆粒中桂皮醛含量[J].中國實(shí)用醫(yī)藥，2008，3(10)：13-14.

[5] 劉勇，陳娟，楊建設(shè)，等.桂枝配方顆粒提取制備工藝及其鑒別的研究[J].中草藥，2009,40(149):204-206.

[6] 將華，赫福，李艷榮，等.HPLC同時測定桂枝配方顆粒中桂皮酸、芍藥苷、甘草酸含量[J].中國中藥雜志，2008,33(2):149-153.

[7] 湯小蕾，趙清.桂枝配方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[J].中國藥師，2008，11(8):954-955.

(責(zé)任編輯：宋勇剛)

Determine Guizhi Formula Grains Cinnamic Acid and Cinnamic Aldehyde Content by HPLC

Liu Danping,Zhao Huiling,Liu Haiyan,Li Yaohua*,Tang Jun,Wei Xiangzhong

(College of Pharmacy，Guangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanning 530200，China)

Objective:To establish an HPLC method for the content determination of cinnamic acid and cinnamic aldehyde in guizhi formula grains.Methods:The analytical method was carried out with Diamonsil C18(2) (4.6mm×250mm,5μm)columnand.The mobile phase was consisted of b isn-0.1% phosphoric acid.The detection wavelength was 290nm.Column temperature is 25℃.Results:The calibration curve was linear within the range of 0.032 7～0.327μg(r=0.999 0) and 0.642～ 1.926μg (r=0.999 9) for cinnamic acid and cinnamic aldehyde respectively.The average recoveries were 96.21 % (RSD=1.0%),101.4%(RSD=1.6%) for cinnamic acid and cinnamic aldehyde.Conclusion:The method is simple,accurate,reproducible and precise,and applicable for the determination of guizhi formula grains formula granule.

Guizhi Formula Grains； Cinnamic Acid ；Cinnamic Aldehyde；HPLC；Content Determination

2015-04-28

劉丹萍(1990-)，女，廣西中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，研究方向為藥物新劑型。

李耀華(1978-)，男，廣西中醫(yī)藥大學(xué)講師，研究方向為中藥質(zhì)量控制。E-mail:yaohuali@163.com

R284.2

A

1673-2197(2015)18-0011-02

10.11954/ytctyy.201518006