骨癆敵顆粒對(duì)結(jié)核二聯(lián)療法致小鼠肝損傷的影響＊

周春梅 胡宗苗 王興海 白吉慶 張恩戶 陜西中醫(yī)藥大學(xué)（咸陽(yáng) 712046）

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的傳染性呼吸道疾病，是引起全球關(guān)注的重大傳染性疾?。?］。目前，二聯(lián)療法（異煙肼＋利福平，RFP＋I(xiàn)NH）是WHO推薦的一線抗結(jié)核藥，但RFP和INH的代謝場(chǎng)所均為肝臟，具有肝毒性，且聯(lián)合用藥對(duì)肝損害更嚴(yán)重、發(fā)生率更高［2］。骨癆敵注射液為從民間驗(yàn)方中篩選研發(fā)出的治療骨、關(guān)節(jié)結(jié)核的中藥注射劑，臨床效果顯著。本文觀察其口服制劑－骨癆敵顆粒劑對(duì)結(jié)核二聯(lián)療法致小鼠肝損傷的影響，以評(píng)價(jià)其對(duì)二聯(lián)療法的減毒作用。

1 材料與方法 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性昆明種小鼠，體重（20±2）g，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（軍）2012－007。動(dòng)物飼養(yǎng)于陜西中醫(yī)學(xué)院中藥藥理實(shí)驗(yàn)室，自由攝食飲水，動(dòng)物房自然明暗，室溫（20±2）℃。

1.2 藥品與試劑 骨癆敵顆粒（1g相當(dāng)于生藥4g），陜西中醫(yī)學(xué)院制藥廠自制，由參三七、骨碎補(bǔ)、黃芪、乳香和沒(méi)藥制成，具有益氣養(yǎng)血、壯骨補(bǔ)腎、活血化瘀等功效，用于骨關(guān)節(jié)、淋巴、肺等各種結(jié)核病；異煙肼片（規(guī)格：100mg×100片），西安利君制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)1405290；利福平膠囊（規(guī)格：0.15g×100s），成都錦華藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)130805；實(shí)驗(yàn)用卡介苗凍干粉（規(guī)格：50mg／瓶），由西安茂新生物科技有限公司提供。

1.3 主要儀器設(shè)備 BT224S電子天平，德國(guó)賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；TGL－16M臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，濟(jì)南博鑫生物技術(shù)有限公司；PUZS－300全自動(dòng)生化分析儀，南京普朗醫(yī)用設(shè)備有限公司；DMBH200顯微鏡，舜宇光學(xué)科技有限公司。

1.4 方 法 取雄性昆明種小鼠，皮下注射卡介苗0.05mg／只后隨機(jī)分為對(duì)照組、二聯(lián)療法組、骨癆敵顆粒高、低劑量組，每組10只。二聯(lián)療法組和骨癆敵顆粒高、低劑量組每天給小鼠灌胃異煙肼80（mg·kg－1）加利福平120（mg·kg－1），1h后，骨癆敵顆粒高、低劑量組分別灌胃骨癆敵顆粒0.2g生藥／kg、0.1g生藥／kg；二聯(lián)療法組、對(duì)照組給予等量生理鹽水，1d1次，連續(xù)14d。最后一次灌胃后禁食不禁水12h，各組小鼠均摘眼球采血，分離血清，檢測(cè)血清ALT、AST的活性。處死各組動(dòng)物，剖取肝臟，肉眼觀察肝臟大體形態(tài)和顏色，精密稱取完整肝臟的重量，計(jì)算肝指數(shù) ［＝肝重（mg）／體重（g）×100%］，取肝左葉，10%福爾馬林固定，常規(guī)制片，蘇木素－伊紅（HE）染色，光鏡下觀察肝組織的病理學(xué)變化。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，通過(guò)單因素方差分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果 2.1 骨癆敵顆粒對(duì)小鼠一般情況的影響實(shí)驗(yàn)期間，對(duì)照組小鼠飲食、排泄均正常，且毛色光潔，動(dòng)作靈活，精神良好；二聯(lián)療法組小鼠飲食明顯減少，大小便顏色失常，均為橘紅色，且毛色發(fā)黃易脫落，活動(dòng)遲緩，有不同程度的精神萎靡；骨癆敵顆粒高、低劑量組小鼠的飲食、排泄、毛色、精神等情況較二聯(lián)療法組明顯好轉(zhuǎn)，但比對(duì)照組稍差。

2.2 骨癆敵顆粒對(duì)小鼠肝臟的影響 對(duì)照組小鼠的肝臟顏色均勻，呈紅褐色，質(zhì)地柔軟，邊緣較??；二聯(lián)療法組與對(duì)照組相比，小鼠肝臟整體顏色變淺，呈黃褐色，體積增大，質(zhì)地較脆，邊緣增厚；骨癆敵顆粒高、低劑量組與二聯(lián)療法組相比，小鼠肝臟顏色有所恢復(fù)，偏紅褐色，體積縮小，質(zhì)地較柔軟，有輕微水腫。

2.3 骨癆敵顆粒對(duì)小鼠血清ALT、AST及肝指數(shù)的影響

見(jiàn)表1。

表1 骨癆敵顆粒對(duì)小鼠血清ALT、AST及肝指數(shù)的影響（±s）

表1 骨癆敵顆粒對(duì)小鼠血清ALT、AST及肝指數(shù)的影響（±s）

注：與二聯(lián)療法組比較，△P＜0.05，▲P＜0.01

組 別 n ALT（IU／L） AST（IU／L） 肝指數(shù)（mg／g）對(duì)照組 10 52.40±8.95▲ 156.40±20.00△ 38.82±2.54▲二聯(lián)療法組 10 88.20±9.80 213.40±44.52 57.18±3.74骨癆敵低劑量組 10 70.90±7.53▲ 161.50±7.43△ 53.04±3.74骨癆敵高劑量組 10 51.20±12.26▲ 146.70±29.55▲ 48.90±2.65▲

2.4 骨癆敵顆粒對(duì)小鼠肝組織病理學(xué)檢查的影響 見(jiàn)圖1。對(duì)照組小鼠的肝細(xì)胞無(wú)壞死和炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肝小葉結(jié)構(gòu)非常清晰，肝細(xì)胞索圍繞中央靜脈呈放射狀排列；二聯(lián)療法組小鼠的大部分肝細(xì)胞發(fā)生空泡變性和點(diǎn)灶性壞死，且有明顯的炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肝小葉結(jié)構(gòu)受到破壞，肝細(xì)胞索排列非常紊亂，且肝血竇受擠壓嚴(yán)重變形；骨癆敵顆粒低劑量組和骨癆敵顆粒高劑量組與二聯(lián)療法組相比小鼠肝臟組織的形態(tài)差異顯著，骨癆敵顆粒低劑量組小鼠的肝細(xì)胞有不同程度變性，但無(wú)明顯肝細(xì)胞壞死，肝小葉結(jié)構(gòu)較清晰，但肝細(xì)胞索排列較紊亂；骨癆敵顆粒高劑量組小鼠的肝細(xì)胞損傷明顯減輕，無(wú)壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，僅有少量肝細(xì)胞輕度水腫，肝小葉結(jié)構(gòu)趨于正常，且肝細(xì)胞索圍繞中央靜脈大致呈放射狀排列。

圖1 骨癆敵顆粒對(duì)小鼠肝組織病理學(xué)的影響（HE染色×100）

3 討 論 異煙肼和利福平是現(xiàn)今臨床上治療結(jié)核病的一線藥物，二者的聯(lián)合用藥是抗結(jié)核病的首選方案，且抗結(jié)核的有效率很高，但二者均具有致肝損傷的不良反應(yīng)。異煙肼在肝內(nèi)分解的產(chǎn)物乙酰肼被認(rèn)為與肝損害有關(guān)；利福平可誘導(dǎo)肝臟P450代謝酶的活性，與異煙肼合用會(huì)加重肝損傷［3］。ALT、AST主要分布在肝組織，正常情況下它們?cè)谘逯械暮亢艿停闻K的實(shí)質(zhì)細(xì)胞受損或壞死時(shí)，血清中ALT、AST水平會(huì)明顯升高，并且它們的水平變化與肝細(xì)胞受損的程度一致，所以血清中的ALT、AST水平是檢測(cè)肝細(xì)胞損傷的敏感指標(biāo)，用于診斷肝臟的實(shí)質(zhì)損傷［4］。

骨癆敵顆粒劑由三七、黃芪、骨碎補(bǔ)、乳香（制）、沒(méi)藥（制）五味中藥制成，具有益氣養(yǎng)血、壯骨補(bǔ)腎、活血化瘀的功效，用于骨關(guān)節(jié)、淋巴、肺等各種結(jié)核病。方中三七可止血、活血、化瘀，有保肝、抗炎等藥理作用，其有效成分為三七皂苷，能顯著降低RFP和INH合用引起的血清ALT、AST及肝臟指數(shù)升高的水平，對(duì)RFP和INH合用引起的肝損傷有明顯的保護(hù)作用；黃芪有增強(qiáng)免疫、保肝、抗腫瘤、抑制病毒等藥理作用，有效成分為黃芪多糖［5］；骨碎補(bǔ)能補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨，有抗骨質(zhì)疏松、抗炎等作用；乳香可消炎、鎮(zhèn)痛，能促進(jìn)傷口愈合；沒(méi)藥具有抗腫瘤、保肝、凝血、鎮(zhèn)痛等作用，研究表明沒(méi)藥提取物能保護(hù)CCl4對(duì)大鼠造成的肝損傷［6］。故本實(shí)驗(yàn)以異煙肼和利福平聯(lián)合用藥造成小鼠肝損傷模型，通過(guò)檢測(cè)血清ALT、AST水平及計(jì)算肝指數(shù)，并結(jié)合病理切片探查骨癆敵顆粒對(duì)小鼠肝臟的影響。結(jié)果顯示，大劑量的骨癆敵顆粒能顯著降低血清ALT、AST及肝指數(shù)水平，減輕結(jié)核二聯(lián)療法所致的肝損傷；同時(shí)，骨癆敵顆粒能顯著改善RFP和INH聯(lián)合使用導(dǎo)致小鼠肝損傷的病理學(xué)變化，并隨劑量增加肝損傷逐漸減輕，說(shuō)明骨癆敵顆?？杀Ｗo(hù)小鼠肝臟，對(duì)RFP和INH合用所致小鼠肝損傷有預(yù)防作用。

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