消腫止痛膏對(duì)角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足腫脹模型IL－1β、TNF－α炎癥因子的影響＊

楊 進(jìn) 胡彥偉 李彥民 陜西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院骨科 （咸陽712000）

急性軟組織損傷作為臨床骨傷科常見疾病，如不及時(shí)治療，輕者則出現(xiàn)遷延日久的慢性持續(xù)性疼痛，影響患者的肢體活動(dòng)及功能的恢復(fù)，甚者導(dǎo)致患者自理能力受阻［1］。消腫止痛膏是我院創(chuàng)傷骨科基于急性軟組織損傷“氣滯血瘀”的基本病機(jī)特點(diǎn)，臨床主要用于創(chuàng)傷引起的急性軟組織損傷的早期。角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足腫脹模型是如今醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常用的經(jīng)典急性炎癥模型，主要用于臨床篩選和評(píng)價(jià)藥物的抗炎作用和炎癥機(jī)制的實(shí)驗(yàn)性研究［2］。本此研究主要通過建立角叉菜膠足腫脹模型評(píng)價(jià)消腫止痛膏的抗炎消腫作用，為消腫止痛膏廣泛推廣于臨床提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)?，F(xiàn)將研究結(jié)果匯報(bào)如下。

1 材 料 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年的SD級(jí)大鼠84只，雌雄各半，體重200g±20g，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（陜）2012－005。

1.2 藥物和試劑 消腫止痛膏，由陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑室提供；雙氯芬酸鈉凝膠（扶他林乳膏），由陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院提供（國(guó)藥準(zhǔn)字 H10900074）；角叉菜膠Sigma公司，批號(hào)：122k14456；IL－1β、TNF－αELISA 試劑盒，購自伊萊瑞特生物科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 酶標(biāo)儀，RT－6000，深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司；隔水式恒溫培養(yǎng)箱，DHG－9140A型，上海一恒科技有限公司；離心機(jī)，KDC－40，科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司；臺(tái)式電子天平，F(xiàn)A1104，上海恒平科學(xué)儀器有限公司。

2 方 法 2.1 動(dòng)物分組 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在室溫20～25℃，濕度40～70%的條件下，自由飲食常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。將64只大鼠稱重后按照體重大小編號(hào)后，完全隨機(jī)法將大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、消腫止痛膏組、扶他林乳膏組，每組16只。

2.2 造模及給藥 模型組大鼠給予凡士林賦形劑取適量外涂，1d1次；消腫止痛膏組給予消腫止痛膏外敷治療，將消腫止痛膏取適量均勻涂抹于大鼠右足處，并用膠布固定，1d1次，如有脫落及時(shí)更換。扶他林乳膏組給予扶他林乳膏治療，1d3次；空白組不做處理。各組用藥均以完全包裹腫脹區(qū)域?yàn)槎龋鹘M療程均為7d，7d后純凈水沖洗靜每只大鼠右后腿相應(yīng)藥物，自然風(fēng)干。

2.3 大鼠血清中IL－1β、TNF－α的測(cè)定 分別于致炎后3h、8h同時(shí)間內(nèi)于消腫止痛膏組、扶他林乳膏組、模型組、空白組各隨機(jī)選取8只動(dòng)物，在無菌條件下腔靜脈取血5mL，于抗凝管中，2500r／min轉(zhuǎn)速離心5min，取血清4℃保鮮冰箱保存?zhèn)溆茫徊捎妹嘎?lián)免疫吸附法（ELISA）對(duì)大鼠血清內(nèi)IL－1β、TNF－α定量進(jìn)行檢測(cè)，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行，終止反應(yīng)后于450nm處讀取吸光度值。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析，IL－1β及TNF－α含量數(shù)據(jù)均用均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)，若正態(tài)分布，方差齊，組間采用t檢驗(yàn)；若方差不齊則采用單因素或非參數(shù)卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果 3.1 各組大鼠3、8h血清內(nèi)IL－1β、TNF－α含量檢測(cè)結(jié)果 各組血清內(nèi)IL－1β、TNF－α含量在致炎后各時(shí)相均高于空白組（P＜0.05）。各時(shí)相點(diǎn)各組血清內(nèi)IL－1β、TNF－α含量均低于模型組，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。消腫止痛膏組與扶他林乳膏組相比，3h消腫止痛膏組血清內(nèi)IL－1β、TNF－α含量較扶他林乳膏組略高，兩組間差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。8h消腫止痛膏組血清內(nèi)IL－1β、TNF－α與扶他林乳膏組相比組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表1、2。

表1 致炎后3h各組大鼠IL－1β、TNF－α含量比較（±s，n＝8）

表1 致炎后3h各組大鼠IL－1β、TNF－α含量比較（±s，n＝8）

注：與空白組相比，△P＜0.05，與模型組相比，▲P＜0.05；與扶他林乳膏組相比，◆P＞0.05

組 別 IL－1β（ng／L） TNF－α（ng／L）空白組 82.17±3.13 96.80±6.31▲模型組 211.06±10.53 218.57±7.57△消腫止痛膏組 195.52±8.60 207.15±9.37△▲◆扶他林乳膏組 195.50±9.50 205.52±8.69△▲

表2 致炎后8h各組大鼠IL－1β、TNF－α含量比較（±s，n＝8）

表2 致炎后8h各組大鼠IL－1β、TNF－α含量比較（±s，n＝8）

注：與空白組相比，△P＜0.05；與模型組相比，▲P＜0.05；與扶他林乳膏組相比，◆P＞0.05

組 別 IL－1β（ng／L） TNF－α（ng／L）空白組 84.78±4.30 89.07±6.36◆▲◆模型組 120.69±11.68 133.19±14.34△消腫止痛膏組 84.74±4.30 94.37±5.91▲◆△扶他林乳膏組 83.64±7.62 93.64±5.83▲△

4 討 論 消腫止痛膏是陜中附院創(chuàng)傷骨科依據(jù)中醫(yī)藥的基礎(chǔ)理論及軟組織損傷機(jī)理，總結(jié)臨床及前輩經(jīng)驗(yàn)，以活血化瘀為治療準(zhǔn)則，經(jīng)過臨床反復(fù)驗(yàn)證，不斷加減運(yùn)用配制出的臨床經(jīng)驗(yàn)方。消腫止痛膏主要以熟地、當(dāng)歸、川芎、赤芍、酒大黃、川烏、草烏、乳香、沒藥、三七、黃柏、蒼術(shù)、香附、連翹、藏紅花、冰片、蟄蟲、骨碎補(bǔ)、自然銅為佐使藥19味中藥共同組成，急性軟組織損傷其臨床表現(xiàn)以紅、腫、熱、痛為主，其病因主要是外傷損傷血絡(luò)，血溢脈外，形成瘀血阻滯，故本方以四物湯的熟地、當(dāng)歸、川芎、赤芍為君藥主活血化瘀；以酒大黃、川烏、草烏、乳香、沒藥、蒼術(shù)、香附、藏紅花三七等溫經(jīng)通脈，活血行氣藥幫助君藥行氣、活血化瘀；瘀血阻脈，阻礙氣機(jī)，氣郁化熱，所以臨床損傷部位常見發(fā)熱，紅腫，故在治療中配以黃柏、連翹清熱兼以涼血止血，主要合用共為臣藥；外傷出血，血溢脈外，故以寒涼之冰片涼血止血，其性辛香，又能活血，使血止而無留瘀之弊，蟄蟲、骨碎補(bǔ)、自然銅為臨床活血療傷之常用藥，可活血療傷，生新接骨，共為佐使藥；諸藥合用具有活血止血，理氣化瘀、止痛之功，臨床療效顯著。中藥外用是通過透皮吸收作用于創(chuàng)傷局部，從而維持局部相對(duì)穩(wěn)定的血藥濃度，起到、散瘀、消腫和止痛的功效［3］。急性軟組織損傷的早期，現(xiàn)代研究表明其特點(diǎn)是微循環(huán)破壞出血以及急性炎癥反應(yīng)［4］，因此抑制微循環(huán)破壞導(dǎo)致的出血，促進(jìn)微循環(huán)的恢復(fù)以及抑制炎癥反應(yīng)成為治療的關(guān)鍵［5－6］。本實(shí)驗(yàn)表明消腫止痛膏可能是以減少或降低血清內(nèi)IL－1β、TNF－α含量，減少炎癥介質(zhì)的釋放，消除或改善損傷組織充血水腫，抑制炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展，且具有與扶他林乳林膏相當(dāng)?shù)目寡紫[效果。

［1］ 趙藝平，牛淑亮，竇群立.消腫噴劑促進(jìn)急性軟組織損傷修復(fù)66例［J］.陜西中醫(yī)，2012，33（9）：1174－1175.

［2］ 朱 蕾，李 娟，武丹威，等.羥胺三唑?qū)遣娌苏T導(dǎo)急性炎癥的抗炎作用［J］.中國(guó)臨床藥理與治療學(xué)雜志，2013，6（4）：601－605.

［3］ 章建華，丁偉國(guó).三黃軟膏外敷治療大鼠急性軟組織損傷的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中醫(yī)正骨，2012，22（3）：6－9.

［4］ 章建華，丁偉國(guó).消腫定痛散濕敷治療急性軟組織損傷147例［J］.光明中醫(yī)，2012，27（10）：2007－2008.

［5］ 肖百全，朱少璇，楊 威，等.芍藥甘草湯對(duì)角叉菜誘導(dǎo)的炎癥相關(guān)指標(biāo)時(shí)序性變化的研究 ［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)與方劑學(xué)雜志，2013，6（4）：601－605.