婦樂(lè)顆粒對(duì)家兔盆腔炎模型炎癥細(xì)胞因子及ICAM－1的影響＊

劉鳳萍 張民英 陜西省漢中市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科（漢中723000）

盆腔炎（Pelvic inflammatory disease，PID）是女性生殖器及其周圍結(jié)締組織炎癥的總稱，具體可見子宮內(nèi)膜炎、子宮肌炎、輸卵管炎、盆腔腹膜炎等臨床病癥，炎性滲出、生殖器官粘連，局部組織增厚或發(fā)生瘢痕增生為其病理實(shí)質(zhì)改變［1］，該病為婦科常見病，嚴(yán)重者可導(dǎo)致不孕，或?qū)е侣耘枨煌?、異位妊娠等并發(fā)癥。統(tǒng)計(jì)顯示，全世界每年被診斷為盆腔炎的婦女約有78萬(wàn)，而在我國(guó)，其發(fā)病率也在逐年攀升，對(duì)婦女健康產(chǎn)生嚴(yán)重影響。由于該病發(fā)生發(fā)展及癥狀的不典型性，目前臨床對(duì)其診療比較局限。婦樂(lè)顆粒由忍冬藤、大黃（制）、大血藤、大青葉、蒲公英、牡丹皮、赤芍、川楝子、延胡索（制）、甘草等多味中藥組成，具有清熱涼血，活血化瘀，消腫止痛之功效，主要用于治療急性盆腔炎、急性附件炎、急性子宮內(nèi)膜炎等引起的帶下、腹痛等癥。但該制劑缺乏治療盆腔炎的基礎(chǔ)研究，本研究觀察了婦樂(lè)顆粒對(duì)家兔盆腔炎模型血清 IL－2、IL－8、IL－10、TNF－α水平及子宮、輸卵管細(xì)胞粘附分子（ICAM－1）的影響，初步探討了婦樂(lè)顆粒治療盆腔炎的作用機(jī)理，為臨床提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材 料 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 5～6個(gè)月齡健康新西蘭雌兔，性成熟，未交配，購(gòu)自西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字第08－018，于陜西中醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室普通清潔環(huán)境分籠飼養(yǎng)，保持12h晝夜節(jié)律，室溫（22±1）℃，自由攝食飲水。

1.2 藥品與試劑 婦樂(lè)顆粒（四川綠葉寶光藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字Z51020624），婦科千金片（株洲千金藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z43020027）；兔血清ELISA檢測(cè)試劑盒 Rabbit IL－2ELISA KIT（批 號(hào)：EIA－16243）、Rabbit IL－8 ELISA KIT（批號(hào)：EIA－16251）、Rabbit IL－10ELISA KIT（批號(hào)：EIA－16198） 、Rabbit TNF－α ELISA KIT（批 號(hào)：EIA－16182），購(gòu)自美國(guó)BD公司；細(xì)胞黏附分子 （ICAM －1）抗體（批號(hào)：bs－4782R）購(gòu)自博奧斯公司。

1.3 主要儀器 酶標(biāo)儀（BioTek），電子分析天平（賽多利斯），超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司），倒置顯微鏡（日本尼康），RM2016病理切片機(jī)（上海徠卡儀器有限公司）。

2 方 法 2.1 菌液制備 金黃色葡萄球菌及大腸埃希菌標(biāo)準(zhǔn)菌株以1∶1比例混合，于實(shí)驗(yàn)前1h稀釋為1×107／L濃度菌液。

2.2 造模與分組 所有家兔于實(shí)驗(yàn)前稱重、測(cè)肛溫、化驗(yàn)血常規(guī)，排除炎癥，并隨機(jī)抽取3只家兔進(jìn)行腹腔鏡檢查術(shù)，觀察健康家兔盆腔狀況。預(yù)留10只家兔作為對(duì)照組，其余家兔實(shí)驗(yàn)前6h肌內(nèi)注射孕馬血清50IU，造模時(shí)家兔固定，暴露外陰，將一次性無(wú)菌輸液管插入家兔泌尿生殖口內(nèi)約8cm；回抽順利無(wú)液體，注入混合菌液（1mL／kg），觀察30s無(wú)液體外溢，將兔倒置5min后放回飼養(yǎng)籠，第49d靜脈麻醉下剖腹探查，家兔子宮質(zhì)脆、充血，輸卵管管壁增厚粗糙并與周圍組織粘連，或外觀略呈串珠樣改變確定模型成功，常規(guī)關(guān)腹。造模成功的家兔隨機(jī)分為模型組、婦樂(lè)顆粒組、婦科千金片組，每組10只，分別灌服蒸餾水、婦樂(lè)顆粒1.028g／kg、婦科千金片0.225g／kg，對(duì)照組也灌服蒸餾水，1d1次，連續(xù)30d。用藥劑量系根據(jù)臨床人用劑量換算家兔給藥量。

2.3 取材與標(biāo)本處理 給藥結(jié)束后，家兔次日清晨戊巴比妥鈉麻醉，腹主動(dòng)脈取血20mL，ELISA法檢測(cè)白介素IL－2、IL－8、IL－10，腫瘤壞死因子TNF－α水平；剖腹觀察盆腔臟器變化，處死，取子宮及雙側(cè)輸卵管放入4%多聚甲醛溶液中固定，常規(guī)包埋，石蠟切片，做細(xì)胞黏附分子 （ICAM －1）免疫組化染色。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，t檢驗(yàn)單因素方差分析。

3 結(jié) 果 3.1婦樂(lè)顆粒對(duì)家兔血清中IL－2、IL－8水平的影響 表1可見，婦樂(lè)顆?？烧{(diào)節(jié)盆腔炎家兔血清中IL－2、IL－8的平衡。

表1 家兔血清中IL－2、IL－8水平變化（±s，n＝10）

表1 家兔血清中IL－2、IL－8水平變化（±s，n＝10）

注：與對(duì)照組比較，◇P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，◆P＜0.01

組別 給藥劑量 IL－2（pg／mL） IL－8（pg／mL）－ 122.14 ±9.03 45.64±7.52模型組 － 81.38±17.15◇ 126.26±23.54◇婦樂(lè)顆粒組 1.028g／kg 114.62±13.43▲ 54.46±9.46◆婦科千金片組 0.225g／kg 116.85±12.54▲ 55.48±11.45對(duì)照組◆

3.2 婦樂(lè)顆粒對(duì)家兔血清中IL－10、TNF－α水平的影響表2可見，婦樂(lè)顆?？烧{(diào)節(jié)盆腔炎家兔血清中IL－10、TNF－α的水平。

3.3 婦樂(lè)顆粒對(duì)家兔子宮、輸卵管組織中ICAM－1的表達(dá) 與正常組比較，模型組家兔子宮、輸卵管組織ICAM－1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯升高；與模型組比較，婦樂(lè)顆粒組、婦科千金片組家兔子宮、輸卵管組織ICAM－1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均顯著下降，如表3、圖1。

表2 家兔血清中IL－10、TNF－α水平變化（±s，n＝10）

表2 家兔血清中IL－10、TNF－α水平變化（±s，n＝10）

注：與對(duì)照組比較，◇P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，◆P＜0.01

）48.01±11.64模型組 － 43.54±15.64◇108.24±34.51◇婦樂(lè)顆粒組 1.028g／kg 78.94±11.74◆ 61.48±13.33◆婦科千金片組 0.225g／kg 75.30±8.94◆ 59.21±8.59對(duì)照組 － 89.55±9.82◆

圖1 各組家兔子宮、輸卵管組織中ICAM－1的表達(dá)

表3 家兔子宮、輸卵管組織中ICAM－1陽(yáng)性表達(dá)（±s，n＝10）

表3 家兔子宮、輸卵管組織中ICAM－1陽(yáng)性表達(dá)（±s，n＝10）

注：與對(duì)照組比較，◇P＜0.01；與模型組比較，◆P＜0.01

69.33±19.45模型組 － 136.34±45.54◇婦樂(lè)顆粒組 0.225g／kg 84.74±41.74◆婦科千金片組 1.028g／kg 87.30±38.94 ICAM－1對(duì)照組組別 給藥劑量－◆

4 討 論 盆腔炎為臨床青春期及育齡婦女常見病，細(xì)胞因子的異常表達(dá)與其炎癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、膠原蛋白沉積及組織纖維化是該病常見病理表現(xiàn)。大量研究表明，各種白介素與其相應(yīng)受體結(jié)合，通過(guò)一系列信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)，繼而表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮生物效應(yīng)，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)、免疫應(yīng)答等重要作用，參與炎癥反應(yīng)的全程。

介導(dǎo)細(xì)胞免疫的IL－2由Th1型細(xì)胞分泌，其表達(dá)下降可導(dǎo)致細(xì)胞因子代謝增強(qiáng)，血中皮質(zhì)醇分泌增多，并誘導(dǎo)抑制性細(xì)胞活性，使淋巴細(xì)胞對(duì)致分裂原反應(yīng)下降［2］。IL－8能增進(jìn)白細(xì)胞產(chǎn)生免疫應(yīng)答，使白細(xì)胞趨化及游走能力加強(qiáng)［3］，對(duì)炎癥部位中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的募集和活化、白細(xì)胞黏附分子表達(dá)十分重要［4］。IL－10是典型的抗炎與免疫抑制性細(xì)胞因子，是由Th2型細(xì)胞分泌的負(fù)調(diào)節(jié)因子。TNF－α是受致炎因子刺激后由單核－巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的具有多種免疫功能細(xì)胞因子［5］，對(duì)機(jī)體具有雙重作用，炎癥初始，血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附因子會(huì)產(chǎn)生適量的TNF－α，提高機(jī)體自身免疫力，通過(guò)調(diào)節(jié)多種免疫細(xì)胞因子共同殺滅入侵致病原，有助于免疫系統(tǒng)發(fā)揮抗炎作用，但隨著炎癥的進(jìn)展，過(guò)量的TNF－α產(chǎn)生，則產(chǎn)生劇烈的呈現(xiàn)毒性作用的免疫反應(yīng)，過(guò)度表達(dá)的TNF－α將趨化中性粒細(xì)胞發(fā)生炎性浸潤(rùn)，同時(shí)促進(jìn)其它炎性因子表達(dá)，導(dǎo)致進(jìn)一步炎性病理改變。在炎癥狀態(tài)下，活化的T細(xì)胞和B細(xì)胞使細(xì)胞間黏附分子1（ICAM－1）表達(dá)上調(diào)。ICAM－1是免疫球蛋白超家族成員，其表達(dá)增強(qiáng)將會(huì)通過(guò)與其配體結(jié)合，介導(dǎo)炎癥細(xì)胞活化、遷移及細(xì)胞間粘附，引起局部微血管阻塞等，進(jìn)而導(dǎo)致組織器官結(jié)構(gòu)和功能的嚴(yán)重?fù)p傷［6］。可見抑制ICAM－1表達(dá)對(duì)于阻止粘連的發(fā)生，包塊的形成，最終促使盆腔炎康復(fù)都具有重要意義。

［1］ 段丹梅.婦科千金片對(duì)慢性盆腔炎模型大鼠TNF－α、IL－2IL－6表達(dá)的影響［J］.中醫(yī)學(xué)報(bào)，2014，29（10）：1467－1468.

［2］ 李 強(qiáng)，曹德勝.高原重癥急性胰腺炎患者血清IL－2、IL－8變化的臨床意義［J］.山東醫(yī)藥，2010，50（21）：3.

［3］ 李亞珍，傅應(yīng)云，韓雪梅，等.糖皮質(zhì)激素對(duì)慢性阻塞性肺疾病患者IL－8及 TNF－α的影響［J］.廣東醫(yī)學(xué)，2011，32（5）：602－604.

［4］ 袁建菱，郭建生，左之文，等.婦科千金片對(duì)盆腔炎模型大鼠血清中IL－2、IL－6、IL－8含量的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2013，28（1）：250－252

［5］ 王振亮，姚乃禮.石藤膠囊對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠TNF－α，IL－1β的影響［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（8）：195－198.

［6］ 黃秀錦，朱 葉.保婦康對(duì)慢性盆腔炎大鼠ICMI－1、TGF－β1mRNA及炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響［J］.中藥藥理與臨床，2014，30（1）：116－118.