黃芪桂枝五物湯對肩周炎兔模型羥脯氨酸與總蛋白含量測定的實驗研究＊

董 琪 昝 強 鐵一局西安中心醫(yī)院 （西安710054）

肩關(guān)節(jié)周圍炎又稱粘連性肩關(guān)節(jié)炎，屬中醫(yī)“肩痹”、“肩凝”范疇，肩周炎好發(fā)于40歲以上病患，一般女性多于男性。其特征是肩部疼痛和肩關(guān)節(jié)活動障礙逐漸加劇。本病起病緩慢，病程較長，一般1年左右，較長者可達1～2年，屬自限性疾病，但隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，尤其是工作學(xué)習(xí)時電腦的普及，使得該病患者普遍性、年輕化，如果延遲治療或者治療不當，都會給患者造成很大痛苦及不便。為了給臨床治療肩周炎提供理論及實驗依據(jù)，通過對兔子持續(xù)冰敷加機械勞損的方法造模［1］，該模型中兔子肩部瘢痕勻漿中的羥脯氨酸、總蛋白等含量升高［2］，我們通過加用黃芪桂枝五物湯，來影響其瘢痕勻漿中羥脯氨酸及總蛋白的含量，達到治療肩周炎的目的，具體報道如下。

1 材料及方法 1.1 藥 物 黃芪桂枝五物湯組成：黃芪、芍藥、桂枝各9g，生姜18g，大棗4枚，由陜西中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥劑科提供，將藥物煎服前先預(yù)浸 ，冷水浸泡30min后煎煮，用水量以漫過藥面3～5cm，每劑藥煎煮2次，每次煎得量約100～150mL，兩次混合小于300mL，加蒸餾水至300mL留用。

1.2 實驗動物及飼料 健康家兔54只，雌雄不分，兔齡4～6月，體重2.5±0.5g，由中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物養(yǎng)殖場提供。基礎(chǔ)飼料由大麥粉20%，豆粉20%，玉米粉16%，麩皮16%，脫水菜（除去水分的包心菜）10%，魚粉10%，食鹽2%，酵母1%，其組成基本符合兔子常規(guī)飲食，由第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物養(yǎng)殖場提供。

1.3 動物模型制備 借鑒文獻［1－2］的造模方法進行造模。選取4～6月的健康大白兔54只，雌雄不分，體重2.5±0.5kg。除正常組外，各組均取兔右側(cè)肩部外側(cè)以Na2S脫毛，脫毛面積7cm×7cm。使兔俯臥，后肢和左前肢固定于兔臺，右前肢上臂與水平搖床固定連接。以280次／min頻率、1.5cm振幅平行搖動肩關(guān)節(jié)，每天持續(xù)8h，連續(xù)3d；然后將其仰臥固定于免籠上，將肩袖袋（自制）以水浸濕后裝冰塊（每塊3cm×3cm×1.5cm，每袋每次裝4塊）外敷兔右肩部，當冰塊融化將盡，及時更換，每天持續(xù)8h，連續(xù)3d。兔子左前肢呈輕度“外翻”畸形，左前肢活動明顯受限，可見輕度腫脹，疼痛反應(yīng)增強，局部軟組織肉眼可見不同程度的充血，且進食量及活動量減少，毛發(fā)有部分脫落。正常組造模期間正常飼養(yǎng)。第一次搖動家兔肩關(guān)節(jié)當日記為實驗第1d。

1.4 實驗分組及用藥 適應(yīng)性飼養(yǎng)5d后，隨機將54只大白兔隨機分為3組，正常組18只、模型組18只、實驗組18只。正常組常規(guī)飼養(yǎng)，不做干預(yù)處理；模型組：造模結(jié)束后，常規(guī)飼養(yǎng)；實驗組：按人和動物間體表面積折算的等效劑量比值計算用量給藥。

1.5 標本處理及觀察指標 標本處理：分別在造模成功后第7d、第14d、第21d將各組家兔分批處死，每組每批處死6只。用10%水合氯醛按2mL／kg麻醉后，取肱二頭肌長頭腱、岡上肌、岡下肌靠近關(guān)節(jié)囊的肌腱部分待檢，所取組織塊在冰面上用氯化鈉液漂洗干凈，除去血跡，濾紙吸干，稱重，按10%的比例往組織中加入勻漿介質(zhì)，用眼科剪于冰水浴中剪碎組織塊，然后在冰浴中超聲勻漿30s，之后用冷凍離心機2000rpm、4℃離心10min，取上清液送檢。最后腹腔動脈放血處死。待檢標本置于－70℃冰箱中保存留用，待收集所有標本后集中處理。

觀察指標：每天稱重1次，每日觀察兔子的生長情況，并記錄每日動物飼料的消耗情況。用生化檢測法檢測組織中羥脯氨酸及總蛋白的含量。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)處理采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計。各組實驗數(shù)據(jù)均采用均數(shù)加減標準差（±s）表示，先進行正態(tài)分布檢驗，繼而進行方差齊性檢驗，方差不齊用非參數(shù)檢驗判定組間差異，進行多組樣本均數(shù)兩兩之間的比較（P＜0.05兩組有統(tǒng)計意義，說明兩組有差異）。

2 結(jié) 果 2.1 一般情況觀察 2.1.1正常組一般情況：實驗過程中兔子生長狀況良好，毛發(fā)光澤，體重變化不明顯，動作自如，反應(yīng)靈敏，排泄物正常，未出現(xiàn)疾病及死亡情況。

2.1.2 模型組一般情況：造模后兔子左前肢呈輕度“外翻”畸形，左前肢活動明顯受限，可見輕度腫脹，疼痛反應(yīng)增強，局部軟組織肉眼可見不同程度的充血，且進食量及活動量減少，毛發(fā)有部分脫落。

2.1.3 實驗組一般情況：造模后一般情況大致同模型組。用藥1周后家兔左前肢組織腫脹、活動量、日進食量、疼痛刺激及毛發(fā)光澤情況均逐漸好于模型組，而差于正常組。

2.2 檢測結(jié)果 2.2.1用藥1周后，每組隨機處死6只，檢測其組織羥脯氨酸含量和總蛋白質(zhì)含量。模型組羥脯氨酸含量和總蛋白質(zhì)含量明顯高于正常組，兩組比較有差異（P＜0.05）；實驗組羥脯氨酸含量和總蛋白含量明顯低于模型組，兩組比較有差異（P＜0.05）；實驗組羥脯氨酸含量和總蛋白含量明顯高于正常組，兩組比較有差異（P＜0.05）；見表1。

表1 1周后總蛋白質(zhì)含量和羥脯氨酸含量比較（±s）

表1 1周后總蛋白質(zhì)含量和羥脯氨酸含量比較（±s）

注：與正常組比較，△P＜0.05，▲ P＜0.05；與模型組比較，◇P＜0.05

）6 2.53±0.44 18.64±3.27模型組 6 5.32±0.48△ 30.93±3.14△實驗組 6 3.98±0.47◇▲ 23.97±3.49正常組◇▲

2.2.2 用藥2周后，每組隨機處死6只，檢測其組織羥脯氨酸含量和總蛋白質(zhì)含量。模型組羥脯氨酸含量和總蛋白質(zhì)含量明顯高于正常組，兩組比較有差異（P＜0.05）；實驗組羥脯氨酸和總蛋白含量明顯低于模型組，兩組比較有差異（P＜0.05），實驗組羥脯氨酸含量和總蛋白含量明顯高于正常組，兩組比較有差異（P＜0.05）。見表2。

表2 2周后總蛋白質(zhì)含量和羥脯氨酸含量比較（±s）

表2 2周后總蛋白質(zhì)含量和羥脯氨酸含量比較（±s）

注：與正常組比較，△P＜0.05，▲P＜0.05；與模型組比較，◇P＜0.05

）6 2.69±0.48 16.64±3.02模型組 6 5.56±0.51△ 31.87±3.42△實驗組 6 3.21±0.32◇▲ 23.07±2.41正常組◇▲

2.2.3 用藥3周后，檢測其組織羥脯氨酸含量和總蛋白質(zhì)含量。模型組羥脯氨酸含量和總蛋白質(zhì)含量明顯高于正常組，兩組比較有差異（P＜0.05）；實驗組羥脯氨酸和總蛋白含量明顯低于模型組，兩組比較有差異（P＜0.05），實驗組羥脯氨酸含量和總蛋白含量與正常組比較無顯著差異（P＞0.05）。見表3。

表3 3周后總蛋白質(zhì)含量 和羥脯氨酸含量比較（±s）

表3 3周后總蛋白質(zhì)含量 和羥脯氨酸含量比較（±s）

注：與正常組比較，△P＜0.05，▲P＞0.05；與模型組比較，◇P＜0.05

）5 2.89±0.43 19.66±4.81模型組 4 5.86±0.49△ 31.97±5.44△實驗組 5 3.07±0.33◇▲ 21.67±3.41正常組◇▲

3 討 論 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為肩周炎患者活動受限主要與組織粘連形成瘢痕密切相關(guān)，組織中總蛋白能反映膠原蛋白的含量，膠原蛋白又是瘢痕組織中膠原纖維的主要成分，所以總蛋白含量測定可以反映瘢痕粘連的程度。羥脯氨酸和蛋白質(zhì)是參與膠原疤痕形成的主要物質(zhì)［2］，因此本實驗所選羥脯氨酸和總蛋白含量可以用來評價組織瘢痕粘連情況?，F(xiàn)代中醫(yī)認為肩周炎主要與外感風(fēng)、寒、濕邪以及勞損關(guān)系密切。若外邪加勞損，筋脈受損，瘀血內(nèi)阻，脈絡(luò)不通，不通則痛，日久筋脈失養(yǎng)，拘急不用。本病屬表虛內(nèi)實癥，虛、邪、瘀密切相關(guān)。肝腎虧虛是病變根本，風(fēng)、寒、濕邪及勞損是外因，瘀血是其病變過程中的病理產(chǎn)物。治療上以扶正祛邪為主，治法為補益肝腎，散寒祛濕，活血化瘀，益氣溫經(jīng)，和營通痹。黃芪桂枝五物湯方中黃芪為君藥，具有甘溫益氣，補在表之衛(wèi)氣；桂枝散風(fēng)寒而溫經(jīng)通痹，與黃芪配伍，益氣溫陽，和血通經(jīng)。桂枝得黃芪益氣而振奮衛(wèi)陽；黃芪得桂枝，固表而不致留邪；芍藥養(yǎng)血和營而通血痹，與桂枝合用，調(diào)營衛(wèi)而和表里，兩藥為臣；生姜辛溫，疏散風(fēng)邪，以助桂枝之力；大棗甘溫，養(yǎng)血益氣，以資黃芪、芍藥之功；與生姜為伍，又能和營衛(wèi)，調(diào)諸藥，以為佐使。方藥五味，配伍精當，共奏益氣溫經(jīng)，和血通痹之效。黃芪桂枝五物湯臨床治療肩周炎療效顯著，這與張保國［3］、秦保鋒［4］等觀點一致?，F(xiàn)代藥理研究證明黃芪桂枝五物湯有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用以及增強免疫，促進細胞代謝［5－6］。綜上所述，黃芪桂枝五物湯能有效治療外感風(fēng)、寒、濕邪以及勞損造成組織粘連的肩周炎。本實驗不足之處是樣本量太小，下一步應(yīng)增加樣本量，增加監(jiān)測指標，使實驗更有可靠性，更好地指導(dǎo)于臨床。

［1］ 王晨瑤，方劍喬，邵曉梅，等.肩髃穴電針對肩關(guān)節(jié)周圍炎家兔模型的干預(yù)作用［J］.浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2010，31（4）：478－480，482.

［2］ 袁 紅，陳 榕，黃大鵬，等.平衡針灸對肩周炎模型兔轉(zhuǎn)化生長因子β1、前列腺素E－2、羥脯氨酸影響的實驗研究［J］.環(huán)球中醫(yī)藥，2015，1（8）：43－45.

［3］ 張保國，劉慶芳.黃芪桂枝五物湯現(xiàn)代臨床應(yīng)用［J］.中成藥，2010，5（32）：837－840.

［4］ 秦保鋒，翁偉力，朱旭瑩.黃芪桂枝五物湯臨床研究進展［J］.現(xiàn)代診斷與治療，2013，12（24）：3654－3655.

［5］ 李 冀，孫新雨，畢珺輝.黃芪桂枝五物湯的臨證應(yīng)用及實驗研究進展［J］.中醫(yī)藥學(xué)報，2014，10（42）：108－111.

［6］ 韓兆瑩，田 明，劉 珍，等.黃芪桂枝五物湯的藥理研究現(xiàn)狀［J］.黑龍江醫(yī)藥，2013，6（5）：777 －778.