超臨界CO2萃取天然產(chǎn)物的應(yīng)用現(xiàn)狀

白 亮，陶永清 *，肖傳作，趙 輝，王素英，石 洋

（1.天津商業(yè)大學(xué)生物技術(shù)與食品科學(xué)學(xué)院，天津市食品生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300134；2.青島利和萃取科技有限公司，山東 青島 266111）

天然產(chǎn)物是從動(dòng)、植物中提取的具有良好生物活性功能的物質(zhì)，主要包括萜類、酚類、醌類、生物堿等，這些物質(zhì)具有抗炎、抗氧化、抗病毒、抗菌等多種功能[1-3]，被廣泛應(yīng)用于食品、藥品、化妝品等行業(yè)。目前，大多數(shù)的天然活性物質(zhì)依靠傳統(tǒng)溶劑法來提取，不僅工藝繁瑣、所獲得的產(chǎn)品純度較低，而且會(huì)對環(huán)境造成一定的影響。

超臨界CO2（supercritical dioxide，SC-CO2）萃取技術(shù)是利用處于臨界壓力和臨界溫度以上的流體具有的特殊功能，使萃取過程中萃取物和萃取劑得到有效的分離，更加有利于萃取的進(jìn)行。超臨界CO2萃取技術(shù)是一種發(fā)展迅速的萃取、分離、精制技術(shù)，具有傳統(tǒng)提取方法所不具備的優(yōu)點(diǎn)，如高效、無溶劑殘留、選擇性強(qiáng)、操作條件溫和等[4-5]，可以有效的保留萃取物中的易揮發(fā)性和熱敏性成分。隨著人們對超臨界流體萃取技術(shù)的不斷研究和認(rèn)識(shí)，該技術(shù)逐漸應(yīng)用于越來越多的天然活性物質(zhì)的提取[6]，相關(guān)技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展和成熟，使超臨界流體萃取的巨大應(yīng)用潛力得以實(shí)現(xiàn)，成為可能取代傳統(tǒng)溶劑法的綠色工藝之一。該文綜述了超臨界CO2萃取技術(shù)的基本原理及其在天然活性物質(zhì)提取中的應(yīng)用，展望了該技術(shù)的應(yīng)用前景。

1 超臨界CO2萃取技術(shù)的基本原理

超臨界CO2萃取技術(shù)是利用超臨界流體的特殊溶解性來提取原料中的活性物質(zhì)。物質(zhì)之間的溶解能力主要取決于物質(zhì)分子之間的相似性，這種相似性主要體現(xiàn)在分子結(jié)構(gòu)相似和分子間作用力的相似，而分子結(jié)構(gòu)的相似性也可以歸結(jié)為作用能的相似。增大壓力CO2溶劑密度增加，對溶質(zhì)的作用能增強(qiáng)及分子間作用力增大，使溶質(zhì)的溶解度增大；溫度升高則加強(qiáng)了物質(zhì)的揮發(fā)性，有利于萃取過程的進(jìn)行。因此通過調(diào)節(jié)壓力和溫度，改變CO2溶劑的密度，進(jìn)而增強(qiáng)CO2溶劑的溶解能力，提取目標(biāo)物質(zhì)，之后再通過減壓、升溫等操作實(shí)現(xiàn)萃取劑與目標(biāo)物質(zhì)的分離。臨界點(diǎn)附近及超臨界區(qū)域的壓力和溫度調(diào)控是獲取高純度目標(biāo)物質(zhì)的關(guān)鍵，萃取效率與被萃取物質(zhì)的極性、分子質(zhì)量大小、沸點(diǎn)等存在著密切的關(guān)系[7-8]。超臨界流體與氣體、液體的物理性質(zhì)比較見表1。從表1可知，超臨界流體兼有液體和氣體的雙重特性，擴(kuò)散系數(shù)大，黏度小，滲透性好，與液體溶劑相比，可以更快地完成傳質(zhì)，達(dá)到平衡，促進(jìn)高效分離過程的實(shí)現(xiàn)，CO2作為超臨界流體更適合天然活性物質(zhì)的提取。

表1 超臨界流體與液體、氣體性質(zhì)的比較[9]Table 1 Comparison of the properties of the supercritical fluid,liquid and gas

2 超臨界CO2萃取技術(shù)的應(yīng)用

目前，CO2已經(jīng)成為最主要的超臨界流體，無污染、無有機(jī)溶劑殘留、高效、成本低等優(yōu)點(diǎn)使超臨界CO2流體萃取技術(shù)成為了一種高效的“綠色技術(shù)”，在天然活性物質(zhì)的提取方面得到了廣泛的研究和應(yīng)用[10-12]。

2.1 提取植物精油

植物精油含有酚類、萜類等多種天然活性物質(zhì)[13]，具有良好的揮發(fā)性，易被人體吸收，同時(shí)具有抗氧化、抗菌等多種生物活性功能[14]，還可以實(shí)現(xiàn)平衡體內(nèi)機(jī)能、美容護(hù)膚等功效，因此成為一些化妝品、保健品、藥物的重要組成或添加成分。隨著人們對天然產(chǎn)品的青睞，對天然植物精油的研究和產(chǎn)品開發(fā)得到了越來越多的關(guān)注[15-16]。目前，傳統(tǒng)的提取方法，如水蒸氣蒸餾（hydro-distillation，HD）、索氏提取（Soxhlet extraction，SE）、有機(jī)溶劑提?。╫rganic solvent extraction，OSE）等存在提取率低、提取物質(zhì)量差、溶劑殘留、工藝時(shí)間長等問題。SC-CO2萃取技術(shù)作為一種高效的提取技術(shù)，克服了上述方法的缺點(diǎn)，溫和的操作條件避免了提取物中熱敏性有效成分的破壞；不會(huì)出現(xiàn)溶劑殘留；而且萃取時(shí)間也明顯縮短。因此，超臨界CO2萃取工藝在植物精油的提取中得到了越來越多的應(yīng)用[17-22]。

SHAO Q S等[23]采用SC-CO2技術(shù)從金線蓮中提取精油，得到的最佳提取條件為萃取壓力35 MPa，萃取溫度37.6 ℃，CO2流量8 L/h，萃取時(shí)間150 min；并且將SC-CO2與水蒸氣蒸餾、索氏提取作了對比，發(fā)現(xiàn)3種方法提取的精油中主要成分為羧酸類物質(zhì)，超臨界CO2萃取所得到的精油組分與SE法相似，并且提取物抗氧化能力強(qiáng)于其他兩種提取方法。通過對比3種方法的提取物成分發(fā)現(xiàn)，溫度高是引起抗氧化能力降低的主要原因。RUTTARATTANAMONGKOL K等[24]研究表明，從辣木種子中提取精油時(shí)，SC-CO2、SE、物理壓榨3種方法所獲得辣木種子精油成分并沒有太大的區(qū)別，采用SC-CO2方法時(shí)，低壓（15 MPa）萃取階段，升高溫度，流體密度降低，溶質(zhì)的蒸汽壓升高，而萃取率下降，表明流體密度對萃取率的影響要大于溶質(zhì)蒸汽壓；隨著壓力的逐漸升高，流體密度增大，萃取率提高。目前，國內(nèi)外對不同植物中提取精油的實(shí)例見表2，表明SC-CO2萃取技術(shù)可以較好地應(yīng)用于植物精油分離提取。

表2 SC-CO2工藝提取植物精油實(shí)例Table 2 Examples of extraction of essential oils with supercritical CO2technology

不同的提取工藝，對精油的提取效果產(chǎn)生不同的影響[23]。在保證提取率的前提下，工藝消耗是主要因素，同時(shí)也是天然物質(zhì)實(shí)現(xiàn)工業(yè)化提取的關(guān)鍵。DE MELO M M R等[25]研究表明，在利用咖啡渣提取咖啡因方面，超臨界流體萃?。╯upercritical fluid extration，SFE）比傳統(tǒng)的SE具有更大的優(yōu)勢，其工藝消耗要低于SE，保持萃取壓力19 MPa，溫度為40 ℃和55 ℃兩個(gè)水平，萃取時(shí)間為2 h。通過氣相色譜分析提取物中的成分，發(fā)現(xiàn)SC-CO2與SE所得到的精油提取物中主要成分亞油酸和棕櫚酸含量差別不大。之后通過以制造成本（cost of manufacturing，COM）和凈收入計(jì)算為主，進(jìn)行不同的操作條件變更和單元安排，通過敏感性分析表明了SC-CO2在咖啡渣利用上的經(jīng)濟(jì)可行性要優(yōu)于SE。

2.2 提取天然色素

天然色素是具有良好生理活性的染色物質(zhì)，根據(jù)其來源不同可以將其劃分為植物色素、動(dòng)物色素和微生物色素。天然色素因具備抗氧化、抗癌等多種生物活性功能[26-30]，在化妝品、保健品等方面得到了良好的應(yīng)用[31]，而且已經(jīng)有部分天然色素作為食品級色素在食品行業(yè)中發(fā)揮著重要的作用，如焦糖色素、胡蘿卜素、姜黃色素等。

植物是天然色素的主要來源，絕大多數(shù)的植物色素為花青素類、類胡蘿卜素類、黃酮化合物等。隨著天然色素市場需求的不斷提升，采用SC-CO2萃取技術(shù)提取天然色素得到了越來越多的關(guān)注和研究[32-36]。目前，國內(nèi)外對不同植物中提取天然色素的實(shí)例見表3，表明SC-CO2萃取技術(shù)可以較好地應(yīng)用于植物色素分離提取。

表3 超臨界CO2提取植物色素實(shí)例Table 3 Examples of extraction of natural pigments from plants with supercritical CO2extraction technology

為了進(jìn)一步提高天然色素的提取率，SFE的相關(guān)工藝也在進(jìn)一步改進(jìn)。LIAU B C等[37]采用超臨界CO2流體-洗脫色譜技術(shù)從眼點(diǎn)擬微綠球藻中提取玉米黃素，在開始階段索氏提取法的萃取率要稍高于SFE的萃取率，之后，添加乙醇作為夾帶劑，超臨界流體萃取在洗脫階段的產(chǎn)率增加了近20倍，高于索氏提取，為眼點(diǎn)擬微綠球藻中玉米黃素資源的開發(fā)提供了新的方法。MACHADO F R S等[38]采用超臨界強(qiáng)制分散溶液技術(shù)（solution enhanced dispersion by supercritical fluids，SEDS）制備蝦青素結(jié)晶，以超臨界CO2流體為抗溶劑，當(dāng)超臨界CO2流體向雨生紅球藻的二氯甲烷提取液中擴(kuò)散時(shí)，造成溶液的過飽和從而使溶質(zhì)沉淀析出形成細(xì)小的顆粒，而析出的小顆粒會(huì)在新型高分子3-羥基丁酸酯和3-羥基戊酸酯的共聚物（copolyer poly hydroxybutirate-co-hydrovalerate，PHBV）聚集被包封，從而獲得蝦青素的提取物。研究發(fā)現(xiàn)，抗溶劑壓力（沉淀壓力）和提取劑比是影響包封效率的重要因素。當(dāng)壓力增加時(shí)，結(jié)晶顆粒的粒徑縮小，結(jié)晶顆粒的粒徑可以在一定程度上反映出溶液中蝦青素提取物的含量；二氯甲烷溶劑比也會(huì)對結(jié)晶顆粒產(chǎn)生影響，比值的升高會(huì)就減小粒徑，但二者與粒徑并非正相關(guān)的線性關(guān)系，進(jìn)一步研究得到了最佳的包封率為48.25%，其條件為二氯甲烷溶液比為10 mg/mL（在開始提取蝦青素階段），沉淀壓力為8 MPa。為其他天然物質(zhì)的獲取提供了新的方法。

2.3 提取生物堿

生物堿是一類含氮的堿性有機(jī)物，大多數(shù)具有復(fù)雜的環(huán)狀結(jié)構(gòu)，具有顯著生物活性[39]，是中藥重要的有效成分之一。目前有機(jī)溶劑提取法是植物生物堿提取的主要方法，而溶劑殘留是傳統(tǒng)溶劑法提取生物堿所面臨的一個(gè)難題。在使用有機(jī)溶劑提取植物生物堿時(shí)不可避免地會(huì)殘留提取劑，從而影響提取物的質(zhì)量，甚至帶有毒性，增加了相關(guān)天然產(chǎn)品的潛在危害性。傳統(tǒng)有機(jī)溶劑提取法提取率低、提取時(shí)間長、廢液處理等問題限制了生物堿的獲取。近年來，超臨界流體萃取技術(shù)在中藥提取中的應(yīng)用越來越來廣泛，為生物堿的有效提取提供了新的方法。

生物堿大多數(shù)難溶于水，易溶于氯仿、丙酮、乙醇等有機(jī)溶劑，因此一般都需要使用少量夾帶劑來提取。張玉紅等[40]研究了超臨界CO2提取喜樹種子中喜樹堿的工藝，保持CO2流量為20 L/h，探討了萃取壓力、萃取溫度、夾帶劑和萃取時(shí)間對喜樹種子中喜樹堿提取率的影響。通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)確定SC-CO2提取喜樹種子中喜樹堿的最佳工藝條件為萃取壓力25 MPa，萃取溫度50 ℃，萃取時(shí)間129 min，夾帶劑為體積分?jǐn)?shù)為90%的乙醇，在該條件下，喜樹堿的平均提取率為76.98%，所得到的萃取物中喜樹堿的質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)43.68%。李新德等[41]采用SC-CO2提取伊貝母中的總生物堿，以萃取壓力、萃取溫度、萃取時(shí)間，夾帶劑流量為考察因素，通過單因素試驗(yàn)考察了各因素對伊貝母中的總生物堿提取率的影響，壓力對其影響最為明顯，再進(jìn)一步通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)確定了最佳工藝條件為壓力20 MPa，溫度45 ℃，時(shí)間2 h，夾帶劑流速為2.5 mL/min，該條件下總生物堿萃取率達(dá)到0.209%。

3 結(jié)論與展望

植物精油、天然色素、生物堿等天然活性物質(zhì)因具備良好的生物功能而稱為研究開發(fā)熱點(diǎn)，具有巨大的市場需求。采用傳統(tǒng)的提取法如索氏提取、有機(jī)溶劑提取等方法獲取這些物質(zhì)時(shí)存在溶劑殘留、提取率低、提取工藝時(shí)間長等缺點(diǎn)，同時(shí)也不符合綠色工藝的生產(chǎn)理念，會(huì)對環(huán)境造成一定的影響。

SC-CO2萃取工藝作為一種高效的提取、分離技術(shù)，具有試劑成本低、無溶劑殘留、操作條件溫和、工藝時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)在天然產(chǎn)物的提取中得到了廣泛的研究和應(yīng)用。而SC-CO2萃取技術(shù)需要提供一定的壓力環(huán)境，所以其設(shè)備的成本較高；缺少從實(shí)驗(yàn)到產(chǎn)業(yè)化過渡的數(shù)據(jù)支持和工藝?yán)碚摶A(chǔ)也同樣限制了超臨界工藝的發(fā)展。這些問題會(huì)隨著人們對萃取技術(shù)的不斷研究、相關(guān)萃取模型的完善和提取工藝的改進(jìn)而得到解決[42-43]。目前，SC-CO2技術(shù)已經(jīng)在咖啡因脫出、啤酒花提取等工藝中取得了成功并且實(shí)現(xiàn)了其工業(yè)化。此外，SC-CO2萃取工藝與精餾、高效液相色譜、氣相色譜等技術(shù)的聯(lián)用，更進(jìn)一步提高了萃取效果及分離、檢測的效率，對實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物質(zhì)的充分提取提供了保障。隨著科學(xué)技術(shù)發(fā)展，SC-CO2技術(shù)將在天然活性物質(zhì)的提取中得到更為廣闊的應(yīng)用前景。

[1]ARRANZ E,JAINE L,LóPEZ DE LAS HAZAS M C,et al.Supercritical fluid extraction as an alternative process to obtain essential oils with anti-inflammatory properties from marjoram and sweet basil[J].Ind Crop Prod,2015,67:121-129.

[2]GORNEMANN T,NAYAL R,PERTZ H H,et al.Antispasmodic activity of essential oil from Lippia dulcis Trev[J].J Ethnopharmacol,2008,117(1):166-169.

[3]MATASYOH J C,MAIYO Z C,NGURE R M,et al.Chemical composition and antimicrobial activity of the essential oil of Coriandrum sativum[J].Food Chem,2009,113(2):526-529.

[4]NIK NORULAINI N A,ZAIDUL I S M,ANUAR O,et al.Optimization of SC-CO2extraction of zerumbone from Zingiber zerumbet (L.)Smith[J].Food Chem,2009,114(2):55-60.

[5]REVERCHON E,DE MARCO I.Supercritical fluid extraction and fractionation of natural matter[J].J Supercrit Fluid,2006,38(2):146-166.

[6]BRUNNER G,BUDICH M.Chapter 4.2-Separation of organic compounds from aqueous solutions by means of supercritical carbon dioxide[J].Supercritical Fluids as Solvents and Reaction Media,2010:321-342.

[7]GUARDO A,COUSSIRANT M,RECASENS F,et al.CFD studies on particle-to-fluid mass and heat transfer in packed beds:free convection effects in supercritical fluids[J].Chem Eng Sci,2007,62 (18-20):72-78.

[8]NEI H Z,FATEMI S,MEHRNIA M R,et al.Mathematical modeling and study of mass transfer parameters in supercritical fluid extraction of fatty acids from Trout power[J].Biochem Eng J,2008,40(1):72-78.

[9]李弈為，賴萬東.大蒜精油的超臨界CO2萃取技術(shù)與有效成分分析[J].化工設(shè)計(jì)通訊，2013，39（3）：80-85.

[10]AZMIR J,ZAIDUL I,RAHMAN M,et al.Techniques for extraction of bioactive compounds from plant materials:A review[J].J Food Eng,2013,117(4):426-436.

[11]BECKMAN E J.Supercritical and near-critical CO2in green chemical synthesis and processing[J].J Supercrit Fluid,2004,28(2-3):121-192.

[12]CHENA W H,CHENA C H,CHANGA C,et al.Supercritical carbon dioxide extraction of triglycerides from Aquilaria crassna seeds[J].Sep Purif Technol,2010,73(2):135-141.

[13]CAVALCANTI R N,VEGGI P C,MEIRELES M A A.Supercritical fluid extraction with a modifier of antioxidant compounds from jabuticaba(Myrciaria cauliflora)byproducts:economic viability[J].Procedia Food Sci,2011,1:1672-1678.

[14]EVRENDILEK G A.Empirical prediction and validation of antibacterial inhibitory effects of various plant essential oils on common pathogenic bacteria[J].Int J Food Microbiol,2015,202:35-41.

[15]ERTAS A,BOGA M,YILMAZ M A,et al.A detailed study on the chemical and biological profiles of essential oil and methanol extract of Thymusnummularius (Anzer tea):rosmarinic acid[J].Ind Crop prod,2015,67:336-345.

[16]GENDY A N E,LEONARDI M,MUGNAINI L,et al.Chemical composition and antimicrobial activity of essential oil of wild and cultivated Origanum syriacum plants grown in Sinai,Egypt[J].Ind Crop prod,2015,67:201-207.

[17]IBRAHIM A H,AL-RAWI S S,RAHMAN N N,et al.Separation and fractionation of Aquilaria malaccensis oil using supercritical fluid extraction and the cytotoxic properties of the extracted oil[J].Procedia Food Science,2011,1:1953-1959.

[18]LARKECHE O,ZERMANE A,MENAIA A H,et al.Supercritical extraction of essential oil from Juniperus communis L.needles:application of response surface methodology[J].J Supercrit Fluid,2015,99:8-14.

[19]MARAN J P,PRIYA B.Supercritical fluid extraction of oil from muskmelon (Cucumis melo) seeds[J].Journal of the Taiwan Institute of Chemical Engineers,2015,47:71-78.

[20]ZHAO S W,ZHANG D K.Supercritical fluid extraction and characterization of Moringa oleifera leaves oil[J].Sep Purif Technol,2013,118:497-502.

[21]ANSARI K,GOODARZNIA I.Optimization of supercritical carbon dioxide extraction of essential oil from spearmint(Mentha spicata L.)leaves by using Taguchi methodology[J].J Supercrit Fluid,2012,67:123-130.

[22]GOLI A,BARZEGAR M,SAHARI M.Anti-oxidant activity and total phenolic compounds of pistachio (Pistachia vera) hull extracts[J].J Food Chem,2005,92:521-525.

[23]SHAO Q S,DENG Y M,LIU H B,et al.Essential oils extraction from Anoectochilus roxburghii using supercritical carbon dioxide and their antioxidant activity[J].Ind Crop Prod,2014,60:104-112.

[24]RUTTARATTANAMONGKOL K,SIEBENHANDL-EHN S,SCHREINERB M,et al.Pilot-scale supercritical carbon dioxide extraction,physico-chemical properties and profile characterization of Moringa oleifera seed oil in comparison with conventional extraction methods[J].Ind Crop Prod,2014,58:68-77.

[25]DE MELO M M R,BARBOSA H M A,PASSOS C P,et al.Supercritical fluid extraction of spent coffee grounds:measurement of extraction curves,oil characterization and economic analysis[J].J Supercrit Fluid,2014,86:150-159.

[26]PEREIRA D M,VALENTAO P,ANDRADE P B.Marine natural pigments:chemistry,distribution and analysis[J].Dyes Pigments,2014,111:124-134.

[27]封 瓊.Deinococcus radiopugnans 類胡蘿卜素的提取純化、特性和生物活性的研究[D].杭州：浙江大學(xué)碩士論文，2013.

[28]ZHANG J F,HOU X,AHMAD H,et al.Assessment of free radicals scavenging activity of seven natural pigments and protective effects in AAPH-challenged chicken erythrocytes[J].Food Chem,2014,145:57-65.

[29]虎春艷，林玉萍，魯 瑞，等.紫色胡蘿卜汁體外抗氧化活性的研究[J].中國釀造，2015，34（1）：85-88.

[30]田喜強(qiáng)，董艷萍.超聲波輔助提取紫薯花青素及抗氧化活性研究[J].中國釀造，2014，33（1）：77-80.

[31]BOO H O,HWANG S J,BAE C S,et al.Extraction and characterization of some natural plant pigments[J].Ind Crop Prod,2012,40:129-135.

[32]AKGUN I H,ERKUCUK A,PILAVTEPE M,et al.Optimization of total alkannin yields of Alkanna tinctoria by using sub-and supercritical carbon dioxide extraction[J].J Supercrit Fluid,2011,57(1):31-37.

[33]樂超銀，唐 明，陳 菽，等.超臨界CO2萃取紅曲色素的工藝優(yōu)化研究[J].中國釀造，2009，28（12）：81-83

[34]WANG L Z,YANG B,YAN B L,et al.Supercritical fluid extraction of astaxanthin from Haematococcus pluvialis and its antioxidant potential in sunflower oil[J].Innovative Food Science and Emerging Technologies,2012,13:120-127.

[35]BASHIPOUR F,GHOREISHI S M.Experimental optimization of supercritical extraction of β-carotene from Aloe barbadensis Miller via genetic algorithm[J].J Supercrit Fluid,2012,72:312-319.

[36]PAES J,DOTTA R,BARBERO G F,et al.Extraction of phenolic compounds and anthocyanins from blueberry(Vaccinium myrtillus L.) residues using supercritical CO2and pressurized liquids[J].J Supercrit Fluid,2014,95:8-16.

[37]LIAU B C,HONG S E,CHANG L P,et al.Separation of sight-protecting zeaxanthin from Nannochloropsis oculata by using supercritical fluids extraction coupled with elution chromatography[J].Sep Purif Technol,2011,78(1):1-8.

[38]MACHADO F R S Jr,REIS D F,BOSCHETTO D L,et al.Encapsulation of astaxanthin from Haematococcus pluvialis in PHBV by means of SEDS technique using supercritical CO2[J].Ind Crop Prod,2014,54:17-21.

[39]TSOI B,YI R N,CAO L F,et al.Comparing antioxidant capacity of purine alkaloids:A new,efficient trio for screening and discovering potential antioxidants in vitro and in vivo[J].Food Chem,2015,176:411-419.

[40]張玉紅，周志強(qiáng)，王 洋.超臨界二氧化碳萃取喜樹種子中喜樹堿[J].精細(xì)化工，2012，29（8）：757-760.

[41]李新德，駱俊才，駱軍玉，等.CO2超臨界萃取伊貝母中總生物堿工藝研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2014，10（7）：31-33.

[42]DE MELO M M R,SILVESTRE A J D,SILVA C M.Supercritical fluid extraction of vegetable matrices:Applications,trends and future perspectives of a convincing green technology[J].J Supercrit Fluid,2014,92:115-176.

[43]DEL VALLE J M.Extraction of natural compounds using supercritical CO2:Going from the laboratory to the industrial application[J].J Supercrit Fluid,2015,96:180-199.