過敏狀態(tài)對兒童哮喘細胞因子反應的影響*

白映光 林炳常 謝太門

小兒哮喘為兒科常見慢性呼吸道疾病之一，隨著大氣污染的增加，近年來在全球范圍內逐漸升高，越來越受到國內外的普遍關注[1]。因小兒哮喘無法根治，常反復發(fā)作，如未能得到有效診治，可出現呼吸困難、呼吸驟停、生長發(fā)育緩慢等情況，嚴重影響患兒的生命健康及質量。有文獻指出，過敏狀態(tài)對小兒哮喘的細胞因子水平產生嚴重影響，可加重病情[2]。而過敏引起哮喘病情加重的作用機制尚不完全明確，探究過敏狀態(tài)與小兒哮喘細胞因子水平的相關性具有重要的臨床價值，故本院2013年12月-2014年11月對哮喘患兒檢測其細胞因子水平，效果滿意，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 入選本院2013年12月-2014年11月80例小兒哮喘患者，其中男47例，女33例，年齡5~14歲，平均（7.8±1.4）歲，急性期病程1~5 h，平均病程（2.6±1.6）h。入選標準：符合中華醫(yī)學會呼吸科學會制定的支氣管哮喘診斷標準[3]；經相關實驗室檢查、影像學檢查確診為小兒哮喘患者。其中重度11例，中度43例，輕度26例。根據是否為過敏體質分為過敏組41例、非過敏組39例，同期入選體檢健康者40例為對照組。其中過敏組男23例，女18例，年齡5~13歲，平均（7.5±1.2）歲，平均病程（2.5±1.4）h。非過敏組男24例，女15例，年齡6~14歲，平均（7.7±1.3）歲，平均病程（2.6±1.5）h；對照組男24例，女16例，年齡5~14歲，平均（7.8±1.2）歲，平均病程（2.6±1.5）h。所有患者均無先天性心臟病、血液系統(tǒng)疾病、糖皮質激素禁忌證、嚴重肝腎功能障礙、30 d內未應用糖皮質激素治療，三組患兒的性別、年齡等一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 儀器與試劑 法國DIACLONE公司生產授權深圳英生物科技有限公司銷售的血清IL-5、IL-4、IFNγ檢測試劑盒。布地奈德混懸液：由AstraZeneca Pty Ltd.公司生產；復方異丙托溴銨溶液：由勃林格殷格翰國際公司（英國）生產；藥物霧化器：浙江寧波海署醫(yī)療用品廠生產，型號：QYW-20 mLⅡ型。

1.3 方法

1.3.1 檢查方法 所有患兒均應用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）進行血清IL-5、IL-4、IFN-γ水平檢測，抽取3 mL靜脈血，進行1000 r/min離心10 min，分離血清，裝置后置于-80 ℃?zhèn)溆?。酶?lián)免疫吸附法應用BIO-RAD680酶標儀，所有操作嚴格按說明書進行。檢測血清IL-5、IL-4、IFN-γ水平：在室溫下全部試劑盒及標本復溫超過0.5 h；根據試劑說明書將所需制劑進行配制，在相應孔內加入100 μL標準配制品或樣品，酶標板加蓋，18~25 ℃環(huán)境下孵育2 h，每孔洗3次；將稀釋的生物素抗體50 μL加入各孔，室溫下孵育1 h，洗3次；將親和鏈霉素-HRP100 μL加入各孔，室溫下孵育20 min，洗3次；將TMB底物100 μL加入各孔，室溫環(huán)境避光放置20 min；將硫酸100 μL加入各孔，反應終止；450 nm讀出各孔的吸光度值。

1.3.2 治療方法 對于哮喘臨床上常使用平喘、止咳、抗炎等常規(guī)治療，在此治療基礎上，使用氧驅動霧化吸入布地奈德繼續(xù)治療，使用布地奈德混懸液（普米克令舒，規(guī)格：0.5 mg/2 mL，批號：H20090902）進行治療，0.5 mg/次，2次/d，15 min/次。使用時以藥物霧化器將0.5 mg布地奈德混懸液、0.8 mL復方異丙托溴銨溶液（可必特，規(guī)格：2.5 mL：異丙托溴銨0.5 mg和硫酸沙丁胺醇3 mg，批號：H20100608）以及1 mL生理鹽水進行混合，以5 L/min氧流量通氧吸入。

1.4 統(tǒng)計學處理 全部數據采用SPSS 18.0軟件系統(tǒng)進行處理分析，計量資料以（x-±s）表示，采用t檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

小兒哮喘患者的血清IL-5、IL-4、IFN水平分別為（12.9±7.2）pg/mL、（1.7±1.1）pg/mL、（16.4±7.5）pg/mL，顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（t=2.66、4.90、4.48，P<0.05）。過敏組血清IL-5、IFN-γ水平顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（t=4.72、5.02，P<0.05），而IL-4水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義；過敏組血清IL-5、IFN-γ水平顯著高于非過敏組，差異有統(tǒng)計學意義（t=3.86、3.63，P<0.05），而IL-4水平與非過敏組比較差異無統(tǒng)計學意義，見表1。

表1 三組血清細胞因子水平比較（±s）pg/mL

表1 三組血清細胞因子水平比較（±s）pg/mL

*與非過敏組、對照組比較，P<0.05

組別 IL-5 IL-4 IFN-γ過敏組（n=41）15.9±7.6* 1.8±1.0 17.7±7.7*非過敏組（n=39）10.7±3.7 1.6±0.9 12.4±5.0對照組（n=40）9.7±3.4 1.5±0.8 10.6±4.6

3 討論

支氣管哮喘是一種反復發(fā)作的呼吸系統(tǒng)疾病，因其好發(fā)于小兒，又稱小兒哮喘。發(fā)病時患兒常表現為呼吸困難、喘鳴，經久難愈，是一種慢性疾病，不僅影響小兒的生活質量和能力，更影響小兒生長發(fā)育，危害小兒健康安全。有研究表明，過敏反應與哮喘之間關系密切[4]。患兒受到變應原、冷空氣或其他誘因的刺激時，往往首先表現為上呼吸道過敏的癥狀，如眼癢、鼻癢、打噴嚏、流清涕等，病情進展后可表現為上腭癢、咽癢、干咳和嗆咳[5]。突然發(fā)作的喘息為兒童哮喘的主要特征，兒童哮喘的喘息癥狀根據哮喘的嚴重程度而有較大的差異。患兒可出現高調喘鳴聲、呼吸頻度加快、呼吸困難。誘發(fā)因素有吸入性過敏原，如塵螨、花粉、真菌、動物毛屑等。吸入化學物質如二氧化硫、油漆、殺蟲劑等也可引起發(fā)作[6-7]。病毒性感冒及其他呼吸系統(tǒng)感染、食物性過敏原（如魚、蝦蟹、蛋類、牛奶等）、藥物（如心得安、阿斯匹林等）、氣候變化、運動等都可能是哮喘發(fā)作的誘因。胃內容物返流至食管及鼻分泌物后流，也可誘發(fā)哮喘[8-10]。而過敏所導致的哮喘其病因復雜，研究過敏反應而造成小兒哮喘的作用機制可有效降低小兒哮喘的發(fā)生率，減少哮喘對小兒的威脅，對于提高兒童安全性有重要意義。

目前臨床上對于哮喘的治療常使用霧化吸入治療，被認為是最佳治療途徑，治療有效率達到最大效果。常使用藥物為布地奈德混懸液，其霧化時作為微粒進入氣道內，可直達病變部位，效果顯著。布地奈德為糖皮質激素，其可增強內皮細胞的穩(wěn)定性，抑制免疫反應以及炎癥因子的釋放，抑制抗體的生成，從而減少抗原與抗體的結合，將過敏反應降至最低，達到治療哮喘的效果。臨床上的治療效果也從側面說明了過敏反應對哮喘的影響及關聯(lián)。在張嘉琳等[11]的研究中顯示，兒童哮喘多數是由過敏原引起，其不僅可以引起氣道內各種炎癥因子的釋放，造成氣道內局部炎癥反應，使氣道內呈高反應性，最終導致小兒哮喘的發(fā)生。隨后大多數專家學者們研究均得出過敏反應可誘發(fā)小兒哮喘的結論。高金明[12]研究大氣顆粒物對小兒哮喘的影響中發(fā)現，大氣顆粒物主要組成部分包括，粉塵、汽車尾氣、煙霧等有毒氣體以及Cu、Ni、As等重金屬化學元素，在吸入人體后可促進機體內IgE以及IgG抗體的表達，誘導炎癥因子大量釋放，加重氣道內局部炎癥反應，誘發(fā)哮喘。其研究結果表明，過敏狀態(tài)與哮喘密切相關。

輔助性T淋巴細胞的Th1、Th2兩種亞型與哮喘的發(fā)病密切相關，對機體正常機能的維持起關鍵作用。Th1主要介導遲發(fā)性超敏反應及細胞免疫應答，幫助B細胞產生IgA、IgG、IgM等抗體；Th2細胞主要對體液免疫應答予以介導，幫助B細胞予以IgE合成，非吞噬性宿主予以防御[13-15]。肥大細胞及Th2細胞產生IL-5，B細胞活化后對其分化及增殖產生刺激作用，參與過敏反應，同時促進嗜酸性粒細胞的分化及生長，使EOS生存時間延長，EOS活化后促使其釋放EOS陽離子蛋白、血小板活化因子、白三烯等各種炎性介質和堿性顆粒蛋白，導致支氣管炎癥，同時與IL-4、IL-2產生協(xié)同作用，參與誘導分化胸腺小細胞及體液免疫應答。小兒哮喘的氣道炎性反應進展中IL-5起主要作用，患兒血清IL-5水平上升對呼吸道上皮細胞產生刺激，使其釋放炎性介質導致喘息[16-17]。NK細胞及T細胞活化后可分泌IFN-γ，IFN-γ種屬具有高度特異性生物活性，功能主要是：促使血管內皮細胞激活；促使NK細胞的殺傷活性及中性粒細胞功能進行激活[18-19]；轉化Ig類型并產生抗體，促進分化B細胞；對Th2細胞增殖產生抑制作用，促進Th0細胞向Th1細胞轉化；促進各種細胞表達MHCII類及I類分子；使巨噬細胞激活并增強其作用；肥大細胞、嗜堿性粒細胞、T細胞均可分泌白介素-4。IL-4是一種多功能炎性介質，為Th2細胞分泌的特異性細胞因子，其主要生物學功能是：自分泌形式促使分化Th2細胞，對Th1細胞的應答及增殖產生抑制作用；促使IgG轉換為IgE類型；促使B細胞活化產生IgG1、IgE；促使B細胞表達MHCII類抗原[20-24]。本文以本院哮喘兒童為研究對象，將哮喘兒童分為過敏組與非過敏組，另以健康兒童為對照，探究兒童哮喘細胞因子水平與過敏狀態(tài)的相關性，結果顯示：小兒哮喘患者的血清IL-4、IL-5、IFN水平顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；過敏組血清IFN-γ、IL-5水平顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而IL-4水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義；過敏組血清IFN-γ、IL-5水平顯著高于非過敏組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），而IL-4水平與非過敏組比較差異無統(tǒng)計學意義。本研究結果提示哮喘患兒的細胞分子水平均顯著升高，而過敏組患兒的IL-5、IFN水平顯著高于非過敏組及健康兒童；而非過敏組與健康兒童組比較其細胞因子水平差異無統(tǒng)計學意義，與李素萍[25]的研究結果大體一致。

綜上所述，過敏狀態(tài)對哮喘患兒血清IL-5、IFN-γ水平影響較大，可影響患兒病情的嚴重程度。

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