五味子果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育及化學(xué)成分動(dòng)態(tài)變化研究

安開(kāi)龍　李德坤　周大錚　等

摘要：以遼寧省產(chǎn)五味子為研究對(duì)象，在7—9月果實(shí)發(fā)育期采樣，測(cè)定不同生長(zhǎng)階段果實(shí)的外觀性狀及主要化學(xué)成分變化，用主成分分析方法對(duì)不同生長(zhǎng)期的五味子品質(zhì)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，并結(jié)合產(chǎn)地實(shí)際情況確定五味子適宜采收期。結(jié)果表明，在整個(gè)生長(zhǎng)過(guò)程中，不同化學(xué)成變化趨勢(shì)不同；木脂素成分在一定時(shí)間內(nèi)呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，整體呈現(xiàn)倒“V”形分布，其中8月上旬果實(shí)中木脂素成分含量最高；遼寧省產(chǎn)地的五味子適宜采收期在9月上旬。

關(guān)鍵詞：五味子；化學(xué)成分；動(dòng)態(tài)變化；主成分分析；采收期

中圖分類號(hào)：S567.01 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2015）01-0234-05

收稿日期：2014-03-26

基金項(xiàng)目：國(guó)家科技重大專項(xiàng)（編號(hào)：2013ZX09402202）。

作者簡(jiǎn)介：安開(kāi)龍（1988—），男，甘肅武威人，碩士，主要從事中藥材質(zhì)量控制研究。E-mail：2011104185@njau.edu.cn。

通信作者：郭巧生，博士，教授，主要從事藥用植物資源開(kāi)發(fā)研究。E-mail：gqs@njau.edu.cn。五味子[Schisandra chinensis （ Turcz.） Baill.] 為五味子屬多年生左旋落葉木質(zhì)藤本植物，是我國(guó)溫帶針葉闊葉混交林帶區(qū)域和暖溫帶落葉闊葉林區(qū)域經(jīng)歷第四紀(jì)冰川時(shí)期而保留下來(lái)的第三紀(jì)古老植物種之一[1]，主要分布于中國(guó)東北和華北、朝鮮半島、日本及俄羅斯遠(yuǎn)東等地區(qū)，其干燥成熟果實(shí)作藥用已有2 000多年的歷史。目前，北五味子被廣泛用于制藥、造酒、飲料生產(chǎn)業(yè)中，是具有重要經(jīng)濟(jì)價(jià)值的藥用植物，開(kāi)發(fā)利用前景極為廣闊。我國(guó)五味子主要分布于黑龍江、吉林、遼寧、內(nèi)蒙古、河北、山東、山西、寧夏、甘肅9省（區(qū)）[2]。

近年來(lái)，關(guān)于菘藍(lán)、菊花、山茱萸、中華苦荬菜等生長(zhǎng)發(fā)育和次生代謝合成積累、成分積累動(dòng)態(tài)研究已有報(bào)道，對(duì)指導(dǎo)藥材采收、科學(xué)種植及資源合理利用具有一定意義。但是，有關(guān)五味子果實(shí)的生長(zhǎng)發(fā)育及次生代謝物合成積累動(dòng)態(tài)研究未見(jiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)五味子果實(shí)期間外觀發(fā)育和主要化學(xué)成分含量的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行研究，明確五味子果實(shí)期間主要化學(xué)成分的變化動(dòng)態(tài)，以期為提高產(chǎn)地藥材產(chǎn)品品質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)，為北五味子藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立、控制及合理開(kāi)發(fā)利用提供理論參考。

1材料與方法

1.1材料

材料采自遼寧省新賓縣，經(jīng)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)中藥材研究所郭巧生教授鑒定為五味子。在五味子開(kāi)花坐果到果實(shí)成熟整個(gè)發(fā)育過(guò)程中共取樣6次。在首次采樣時(shí)，隨機(jī)選擇生長(zhǎng)狀況良好、長(zhǎng)勢(shì)一致、無(wú)病害植株做好標(biāo)記；后續(xù)采樣時(shí)，從標(biāo)記植株上隨機(jī)剪取無(wú)病蟲(chóng)害果穗放入低溫樣品箱，盡快帶回實(shí)驗(yàn)室；將樣品混勻，洗凈、擦干，隨機(jī)選取測(cè)定。

1.2儀器與試劑

Waters alliance 2695 型高效液相色譜單元、Waters 2489 型紫外/可見(jiàn)光檢測(cè)器、Empower 2 工作站，美國(guó)Waters公司生產(chǎn)；XS 105型電子分析天平、AL 204 型電子分析天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司生產(chǎn)；KQ-5200型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)；WK 1000A高速粉碎機(jī)，山東省青州市精誠(chéng)醫(yī)藥裝備有限公司生產(chǎn)；DGG 101-1BS電熱鼓風(fēng)干燥箱，天津市天宇實(shí)驗(yàn)儀器有限公司生產(chǎn)；Milli-Q A10超純水系統(tǒng)，美國(guó)Millipore公司生產(chǎn)；pH計(jì)、磁力攪拌機(jī)、游標(biāo)卡尺、常規(guī)玻璃儀器等，國(guó)產(chǎn)。

五味子醇甲（批號(hào)：110857-200709，純度≥99%）、五味子酯甲（批號(hào)：111529-200503，純度≥99%）、五味子甲素（批號(hào)110764-200609，純度≥98%）、五味子乙素（批號(hào)110765-200710，純度≥99%）對(duì)照品，購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；五味子醇乙、五味子丙素、5-羥甲基糠醛（5-HMF）對(duì)照品，純度≥98%，購(gòu)自天津馬克生物技術(shù)有限公司；戈米辛D、戈米辛G、戈米辛J，純度≥98%，購(gòu)自天津一方科技有限公司；當(dāng)歸酰戈米辛H、當(dāng)歸酰戈米辛Q，純度≥98%，自制。分析純維生素C，國(guó)產(chǎn)；L-蘋果酸、檸檬酸對(duì)照品，美國(guó)Supelco公司；莽草酸對(duì)照品，純度大于98.8%，批號(hào)：14800，上海晶純?cè)噭┯邢薰?；分析純磷酸二氫鉀、草酸，天津市風(fēng)船試劑科技有限公司；色譜純磷酸，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所；硫酸（優(yōu)級(jí)純），國(guó)產(chǎn)；蒽酮，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；色譜純乙腈、甲醇，純度≥99.9%，德國(guó)Merck集團(tuán)。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1五味子果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育分別隨機(jī)抽取50個(gè)五味子鮮果果實(shí)和50粒種子。以游標(biāo)卡尺測(cè)定鮮果和種子的最寬處（橫徑）與最長(zhǎng)處（縱徑）尺寸；采用量筒排水法，以加入果實(shí)或種子前后的水位差分別作為鮮果和種子的體積；以電子天平測(cè)定鮮果果實(shí)和種子的質(zhì)量（鮮質(zhì)量）及果實(shí)和種子烘至恒重時(shí)的質(zhì)量（干質(zhì)量）。

1.3.2木脂素類成分測(cè)定采用液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，色譜條件[3]為：Waters alliance 2695 型高效液相色譜單元，Waters 2489 型紫外/可見(jiàn)光檢測(cè)器，Empower 2工作站，Waters Symmetry C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈-水，梯度洗脫；柱溫為30 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為218 nm，流速為 1 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL。結(jié)果如圖1所示。

1.3.3酸類成分測(cè)定維生素C、L-蘋果酸、莽草酸、檸檬酸含量測(cè)定采用液相色譜儀。維生素C含量測(cè)定的色譜條件：PrevailTM Organic Acid色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相為01%草酸，等度洗脫；流速為1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為244 nm，柱溫為30 ℃。結(jié)果如圖2所示。L-蘋果酸、莽草酸、檸檬酸含量測(cè)定的色譜條件：PrevailTM Organic Acid色譜柱（46 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相為0.01 mol/L磷酸二氫鉀水溶液，用一定濃度磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.0，等度洗脫；流速為 1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，柱溫為30 ℃。結(jié)果如圖3所示?？偹岷坎捎秒娢坏味ǚy(cè)定。

1.3.4總糖含量測(cè)定總糖含量采用硫酸-蒽酮比色法測(cè)定。

1.3.55-羥甲基糠醛（5-HMF）測(cè)定取4份10 g五味子鮮果勻漿，分別加水20 mL，進(jìn)行以下處理：（1）密封于4 ℃冰箱中，冷浸提取5-HMF 24 h；（2）加入定量5-HMF標(biāo)準(zhǔn)品，密封于4 ℃冰箱中，冷浸提取5-HMF 24 h；（3）密封于4 ℃冰箱中，冷浸提取5-HMF 24 h，再超聲提取40 min；（4）加入定量5-HMF標(biāo)準(zhǔn)品，密封于4 ℃冰箱中，冷浸提取5-HMF 24 h，再超聲提取40 min。采用液相色譜儀對(duì)提取液進(jìn)行測(cè)定，色譜條件為：Diamonsil C18（2）色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈 ∶水=8 ∶92，等度洗脫；流速為 1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為284 nm，柱溫為30 ℃。

1.3.6不同生長(zhǎng)期五味子綜合評(píng)價(jià)選擇與五味子產(chǎn)量和功效密切相關(guān)的果實(shí)與種子干質(zhì)量、縱橫徑、體積及木脂素類、總糖、有機(jī)酸等成分含量共26個(gè)指標(biāo)，建立五味子不同生長(zhǎng)期綜合評(píng)價(jià)體系，運(yùn)用主成分分析方法對(duì)五味子不同生長(zhǎng)期樣品進(jìn)行多指標(biāo)分析。

2結(jié)果與分析

2.1五味子果實(shí)與種子的生長(zhǎng)發(fā)育

2.1.1果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育動(dòng)態(tài)由表1可見(jiàn)，在生長(zhǎng)期內(nèi)，果實(shí)的橫徑、縱徑、干質(zhì)量、鮮質(zhì)量、體積大部分都呈現(xiàn)不斷增加的趨勢(shì)，且除含水量各指標(biāo)基本在9月中旬達(dá)到最大值；果實(shí)顏色由綠色或黃綠色逐漸變?yōu)榧t色或鮮紅色，其中8月底至9月初為五味子紅色變色期；7月中旬，五味子果實(shí)橫徑、縱徑分別為采收時(shí)（9月15日）的67.2%、74.1%，體積為采收時(shí)的55.9%，干質(zhì)量為采收時(shí)的28.3%，6月份的迅速生長(zhǎng)對(duì)五味子漿果大小有著基礎(chǔ)性的作用；8月10日，采收的樣品中已有紅色出現(xiàn)，但大部分還為黃綠色；8月末，果實(shí)已基本變紅，但還有少許綠色；9月上旬，果皮紅色加深，并伴隨果實(shí)變軟，果實(shí)橫徑、縱徑、體積、鮮質(zhì)量無(wú)明顯變化。表1五味子鮮果各生長(zhǎng)發(fā)育階段果實(shí)的外觀指標(biāo)（x±s，n=3）

2.1.2種子生長(zhǎng)發(fā)育動(dòng)態(tài)由表2可見(jiàn)，種子的橫徑、縱徑、干質(zhì)量、體積整體上隨果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育而增大，含水量在一定時(shí)間內(nèi)逐漸降低。7月上旬，種子的橫徑、縱徑達(dá)到采收時(shí)的97%，說(shuō)明種子在坐果后生長(zhǎng)很快，在6月末已經(jīng)基本形成，此時(shí)種皮較脆，含水量較高，顏色呈現(xiàn)黃色，其干質(zhì)量為采收時(shí)的32.1%；8月上旬，種子顏色略有加深，基本呈現(xiàn)成熟種子的顏色，且硬度增加，干物質(zhì)積累迅速，為采收時(shí)的70.9%，較7月份增加1倍多，但種子的橫徑、縱徑變化不大；9月上旬，種子干質(zhì)量為采收時(shí)的96%，這說(shuō)明物質(zhì)積累已經(jīng)基本完畢，顏色也已成為成熟種子的顏色，9月5日至15日，種子橫徑、縱徑變化已不明顯。表2五味子鮮果種子各生長(zhǎng)發(fā)育階段指標(biāo)（x±s，n=3）

2.2五味子鮮果木脂素類成分含量變化動(dòng)態(tài)

由表3可見(jiàn)，整個(gè)生長(zhǎng)期內(nèi)，五味子鮮果木脂素類成分成分呈現(xiàn)先升高后降低或后期略有回升趨勢(shì)，整體呈現(xiàn)倒“V”形分布；五味子醇甲、五味子醇乙、當(dāng)歸酰戈米辛H、五味子甲素、五味子乙素5種木脂素成分含量相對(duì)較高。7月份，各木脂素成分含量已達(dá)到一定水平，這是由于木脂素類成分大部分存在于種子中，7月份種子已基本成型；8月初，木脂素各成分含量急劇增加，木脂素各成分含量相對(duì)最高；8月末，木脂素含量又有所降低，此時(shí)正值五味子紅色素形成、果實(shí)由綠轉(zhuǎn)紅的階段；9月，不同木脂素成分表現(xiàn)出不同的變化趨勢(shì)，這可能是由于不同木脂素成分在果實(shí)中的生理作用不一樣，不同木脂素在果實(shí)成熟過(guò)程中參與了生理生化反應(yīng)。表3五味子鮮果木脂素各成分的含量（n=3）

采樣日期

（月-日）五味子醇甲（%）戈米辛D（%）戈米辛J（%）五味子醇乙（%）當(dāng)歸酰戈米辛H（%）當(dāng)歸酰戈米辛Q（%）含量RSD含量RSD含量RSD含量RSD含量RSD含量RSD07-120.364f0.550.058f1.720.068b1.470.168c0.590.098e1.020.038b1.6308-100.791a1.640.100a1.000.070a1.430.210a0.950.182a1.650.050a1.8608-310.546e0.730.076d1.320.056d1.790.153e1.740.121d1.740.032c1.7409-050.591d1.020.064e1.560.053e1.890.157d0.640.121d0.830.026d1.8409-100.643c1.690.079c1.270.057d1.750.153e1.310.141b0.710.027d1.7009-150.671b0.920.098b1.020.060c1.670.199b0.500.130c0.740.022e1.55采樣日期

（月-日）戈米辛G（%）五味子酯甲（%）五味子甲素（%）五味子乙素（%）五味子丙素（%）木脂素總和（%）含量RSD含量RSD含量RSD含量RSD含量RSD含量RSD07-120.059b1.690.036e1.860.080e1.250.230e0.870.057b1.751.256e2.6208-100.068a1.470.067a1.490.148a1.350.337a1.480.063a1.592.086a2.2108-310.057c1.750.054b1.740.120c1.670.274c1.460.055c1.811.544d1.1709-050.050d1.830.041c1.580.132b1.520.250d1.870.055c1.791.540d1.3009-100.050d1.680.039d1.420.147a1.360.268c1.120.062a1.611.676c1.7309-150.049d1.740.032f1.660.113d0.880.314b1.830.058b1.571.752b1.47

2.3五味子鮮果維生素C、酸類成分、糖含量變化動(dòng)態(tài)

由表4可見(jiàn)，在五味子部分生長(zhǎng)期內(nèi)，果實(shí)維生素C含量呈現(xiàn)降低趨勢(shì)，7月初至8月末急劇降低；L-蘋果酸在7月份未檢測(cè)到，可能是由于含量較低或者還未生成，8月份開(kāi)始逐漸積累，9月份含量持續(xù)增加；莽草酸含量在7月份時(shí)較高，隨果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育呈現(xiàn)一定程度的降低趨勢(shì)；檸檬酸在7月份時(shí)含量較低，8月份急劇增加，后隨果實(shí)成熟，含量略有降低；果實(shí)總酸含量總體表現(xiàn)出升高趨勢(shì)，這是由于隨果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育，從果實(shí)以外器官運(yùn)輸?shù)綕{果中的酸逐漸增加，同時(shí)漿果本身合成酸的能力逐漸增強(qiáng)，從而導(dǎo)致漿果中酸含量逐漸升高；果實(shí)總糖含量在9月初達(dá)到最高值，隨果實(shí)成熟又有所下降，這是由于漿果生長(zhǎng)前期，進(jìn)入漿果中的糖分除用來(lái)提供能源、用于漿果的呼吸作用和細(xì)胞的增殖與增大，還被用來(lái)合成細(xì)胞壁、原生質(zhì)等，因此，五味子早期糖分含量較低，始熟期后，果實(shí)以外的器官運(yùn)輸?shù)綕{果中的糖分增加，或可能由多糖、有機(jī)酸向單糖轉(zhuǎn)變而使其糖含量提高，但在果實(shí)轉(zhuǎn)色期后總糖含量又有所下降。表4不同生長(zhǎng)期五味子鮮果維生素C、酸類成分、糖的含量（n=3）

采樣日期

（月-日）維生素C（%）L-蘋果酸（%）莽草酸（%）檸檬酸（%）總酸（%）總糖（%）含量RSD含量RSD含量RSD含量RSD含量RSD含量RSD07-120.498a1.20未檢出-6.513a0.717.082e1.658.80d1.143.91f2.9508-100.379b1.32未檢出-4.379b0.7513.709b1.6714.03c1.508.13e3.1108-310.269c1.121.450d1.862.626d0.9114.403a1.6516.38b1.1617.81b2.1809-050.272c1.473.137c1.692.712c0.9913.814b1.8414.44c2.1523.08a3.4509-100.258d1.383.795b1.791.845f1.7411.833d1.8316.21b2.5914.25d2.9809-150.265c1.254.336a1.452.026e1.7712.540c1.7118.23a1.9216.62c3.14

2.4五味子鮮果5-HMF成分測(cè)定

試驗(yàn)結(jié)果（圖4）表明，加入標(biāo)準(zhǔn)樣品的2種提取液均檢出5-HMF；標(biāo)準(zhǔn)品加樣冷浸提取和超聲提取，回收率分別為99.22%、98.94%。這說(shuō)明試驗(yàn)采用的方法能夠使5-HMF穩(wěn)定存在，5-HMF并非五味子的原始積累成分。

2.5主成分分析

主成分分析結(jié)果表明，F(xiàn)1、F2、F3主成分因子在五味子質(zhì)量評(píng)價(jià)中起著主導(dǎo)作用，3個(gè)主成分的累積貢獻(xiàn)率達(dá)9510%，能夠較客觀地反映五味子的質(zhì)量，故選取主成分F1、F2、F3進(jìn)行分析。依據(jù)五味子不同生長(zhǎng)期樣品主成分因子得分結(jié)果，以每個(gè)主成分所對(duì)應(yīng)的特征值作為權(quán)重計(jì)算綜合模型F（表5），并按照得分值進(jìn)行排序，綜合得分越高，表明果實(shí)越成熟，品質(zhì)越好，但如果實(shí)過(guò)于成熟，會(huì)導(dǎo)致植株落穗、落果從而減產(chǎn)，同時(shí)在采收運(yùn)輸過(guò)程中會(huì)導(dǎo)致果實(shí)大量破損，從而導(dǎo)致在干燥過(guò)程中有害成分5-HMF含量過(guò)高而影響藥材品質(zhì)。綜合遼寧省產(chǎn)地實(shí)際情況，建議9月上旬五味子果實(shí)全部變紅即可采收，此時(shí)，不但外觀色澤符合傳統(tǒng)用藥習(xí)慣，成分含量也能達(dá)到藥典規(guī)定要求，且不含有害成分5-HMF；另外，比傳統(tǒng)采收時(shí)間提前7 d左右，避開(kāi)了產(chǎn)地農(nóng)忙時(shí)節(jié)，降低了采收成本，保證了藥材質(zhì)量。

3結(jié)論與討論

3.1采樣時(shí)間的確定

遼寧產(chǎn)地五味子一般于5月中下旬開(kāi)花，花期15 d左右，6月上旬初見(jiàn)果形，9月中旬開(kāi)始采收。由于考慮五味子果實(shí)發(fā)育早期果粒相對(duì)較小，難以形成產(chǎn)量，不具有實(shí)際應(yīng)用

表5不同生長(zhǎng)時(shí)期五味子主成分分析得分及排名

生長(zhǎng)時(shí)期

（月-日）F1F2F3F得分排名得分排名得分排名得分排名07-12-6.696-2.7260.652-4.63608-10-2.5355.301-0.3340.12508-311.114-0.664-1.6960.32409-052.163-1.805-1.2350.61309-102.752-0.2730.5731.55209-153.2010.1722.0312.041

價(jià)值，因此試驗(yàn)選擇在7月、8月上旬各采樣1次，8月末五味子果實(shí)成熟前期適當(dāng)增加采樣次數(shù)，在8月31日至9月15日采樣4次，重點(diǎn)考察成熟期階段果實(shí)和種子及其化學(xué)成分的變化。

3.2果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育

果實(shí)大小是果實(shí)外觀品質(zhì)的重要指標(biāo)，與果實(shí)縱徑、橫徑的發(fā)育密切相關(guān)。坐果后，果實(shí)經(jīng)過(guò)連續(xù)的細(xì)胞分裂、細(xì)胞膨大會(huì)表現(xiàn)出一定的生長(zhǎng)動(dòng)態(tài)。果實(shí)細(xì)胞分裂與膨大除受遺傳因素制約外，還受內(nèi)源激素、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及環(huán)境、土壤等因素的影響[4]。種子是漿果產(chǎn)生激素的中心，五味子種子在6月份就已基本形成，因此開(kāi)花前期的營(yíng)養(yǎng)水平關(guān)系到種子的發(fā)育，進(jìn)而影響到果實(shí)大小。目前，關(guān)于氣象環(huán)境因素調(diào)控果實(shí)生長(zhǎng)發(fā)育的研究較少，如劉實(shí)等在長(zhǎng)春地區(qū)針對(duì)氣象因子對(duì)北五味子生長(zhǎng)特性的影響進(jìn)行了研究[5]，相關(guān)基礎(chǔ)研究還相對(duì)薄弱。

3.3五味子果實(shí)生長(zhǎng)期主要化學(xué)成分含量的動(dòng)態(tài)變化

藥用植物中所含的有效成分是防病、治病的物質(zhì)基礎(chǔ)，多為植物的次生代謝產(chǎn)物。藥用植物在生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中，有效成分的合成積累呈現(xiàn)一定的規(guī)律性。組成木脂素的單體主要有桂皮酸（偶有桂皮醛）、桂皮醇、丙烯苯和烯丙苯4種[6]，木脂素類成分是葉片次生代謝的產(chǎn)物[7]。9月中旬，五味子植株葉片大部分仍然保持綠色，這說(shuō)明良好的栽培管理降低了葉片的病蟲(chóng)危害，能夠保證果實(shí)木脂素含量達(dá)到較高的水平。在整個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育階段，五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素含量相對(duì)較高，而五味子醇甲、當(dāng)歸酰戈米辛H、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素為入血成分[8-9]，將這幾個(gè)成分納入質(zhì)量控制指標(biāo)更為合理。不同產(chǎn)地采收的五味子木脂素含量差異很大[10]，這可能與種質(zhì)、氣候環(huán)境、栽培措施等不同有密切關(guān)系。

果實(shí)生長(zhǎng)過(guò)程中，有機(jī)酸含量的增減與磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）等關(guān)鍵酶發(fā)揮作用密不可分。有機(jī)酸在果實(shí)自身代謝中參與光合作用、呼吸作用，以及合成酚類、氨基酸、酯類和芳香物質(zhì)等[11]，果實(shí)發(fā)育過(guò)程中的有機(jī)酸代謝及其變化，影響著成熟果實(shí)的有機(jī)酸含量。果實(shí)有機(jī)酸代謝是一個(gè)極為復(fù)雜的過(guò)程，有機(jī)酸含量及組成是內(nèi)在遺傳特性、外在自然環(huán)境因子和栽培措施等多因素共同作用的結(jié)果。有文獻(xiàn)報(bào)道，五味子果實(shí)中含有酒石酸、奎尼酸[12-13]。在本試驗(yàn)樣品中，只發(fā)現(xiàn)含有L-蘋果酸、莽草酸、檸檬酸，這可能是由于不同的種質(zhì)處在不同栽培環(huán)境條件所引起的，這也為五味子產(chǎn)地差異化鑒別提供了可能。

五味子鮮果花色苷主要成分為矢車菊-3-O-木糖鼠李糖苷[14]，糖對(duì)花色素形成有極為重要的作用。9月5日前后，遼寧省五味子糖類成分達(dá)到1個(gè)峰值，此時(shí)正值五味子漿果紅色素形成期，因此，要促進(jìn)果實(shí)色澤發(fā)育，需要提高果實(shí)的含糖量。

3.45-HMF成分定性測(cè)定

有文獻(xiàn)報(bào)道，5-HMF可能引發(fā)結(jié)腸小囊異常生長(zhǎng)[15]，產(chǎn)生一定程度的基因毒性[16-17]，對(duì)人體橫紋肌和內(nèi)臟有損害，能與人體蛋白質(zhì)結(jié)合產(chǎn)生蓄積中毒[18]。試驗(yàn)采用冷浸法和超聲提取法的同時(shí)，運(yùn)用回流法提取，考察不同時(shí)期五味子形成5-HMF的條件，結(jié)果表明，不同生長(zhǎng)期的五味子樣品回流提取液一直存在5-HMF，而鮮果超聲和冷浸提取液中未檢出，這說(shuō)明五味子在加熱過(guò)程中很容易產(chǎn)生5-HMF。鮮果中不存在5-HMF，這為尋找低含量5-HMF的加工方法提供了思路。

3.5五味子適宜采收期的確定

研究早期，往往以單一的五味子醇甲作為五味子質(zhì)量控制指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)其質(zhì)量，隨著五味子藥理研究的不斷深入，研究者逐漸認(rèn)識(shí)到五味子發(fā)揮藥效的物質(zhì)不單單是五味子醇甲，而是多個(gè)成分的協(xié)同作用，除木脂素類成分外，多糖類和有機(jī)酸類成分也是五味子物質(zhì)基礎(chǔ)的重要組成部分。五味子多糖在保肝、抗疲勞、降血脂、抗突變等方面具有一定療效[19]，有機(jī)酸類成分對(duì)心血管系統(tǒng)疾病具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值[20]。單一比較某種化學(xué)成分含量的高低也不能完全說(shuō)明五味子的品質(zhì)。

主成分分析是一種較為客觀的評(píng)價(jià)方法，根據(jù)每個(gè)主成分的得分來(lái)衡量指標(biāo)的程度和地位，進(jìn)而構(gòu)建綜合評(píng)價(jià)函數(shù)，對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，在研究過(guò)程中不需要人為確定指標(biāo)權(quán)重，減少了人為誤差。本試驗(yàn)根據(jù)主成分分析的理論和方法，對(duì)不同生長(zhǎng)期五味子進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，擺脫了單獨(dú)以五味子醇甲含量評(píng)價(jià)五味子的片面性，同時(shí)避免了人為劃定權(quán)重的影響。對(duì)五味子產(chǎn)量和質(zhì)量相關(guān)聯(lián)的26個(gè)指標(biāo)運(yùn)用多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)模式對(duì)五味子適宜采收期進(jìn)行研究，結(jié)果表明，遼寧省產(chǎn)地應(yīng)于9月上旬開(kāi)始采收五味子，需在15～20 d采收完畢。若不及時(shí)采收，五味子果實(shí)過(guò)度成熟變軟，會(huì)自動(dòng)脫落，給采收帶來(lái)困難；同時(shí)，9月正是遼寧省產(chǎn)地農(nóng)忙時(shí)節(jié)，五味子藥材采收需要大量的人力，過(guò)遲采收不利于勞動(dòng)力的資源配置。

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